从p38MAPK信号通路探讨MEBT/MEBO对大鼠慢性难愈合创面的修复机制
目的:从p38MAPK信号通路探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合皮肤创面的修复机制。方法:(1)实验一:SPF级10~12周,体重在220g250g之间,SD雄性大鼠40只,一周适应性喂养,按照随机原则抽取10只大鼠作为空白组,空白组大鼠仅作皮肤全层切除,不再进行药物干预。剩余30只大鼠注射醋酸氢化可的松形成慢性难愈合创面模型,随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组10只。造模后第二天用药治疗。换药前各组均以1/5000呋喃西林溶液清洁创面,每天换药2次。在造模后第3天、第7天、第14天观察创面情况、测量并计算各组创面愈合率,观察计算创面愈合时间。(2)实验二:同实验一要求的大鼠80只,按照随机原则抽取20只大鼠作为空白组,同实验一的造模方法,剩余60只大鼠随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组20只。造模后第二天用药治疗。换药方法及次数同实验一。在造模后第3天、第7天、第14天各组随机处死5只,取皮肤创面组织,一部分用10%福尔马林固定以作病理切片,剩余部分立即放于液氮罐中,稍后迅速转入-80℃超低温冰箱。待标本收集完毕做后续的Western blotting、RT-PCR、ELISA方法检测。结果:(1)创面大体情况:空白组创面恢复最好,MEBO组、贝复济组情况显著优于模型组。(2)创面愈合时间:空白组愈合时间最短(13.40±0.74d),与模型组相比有显著差异(P<0.01),模型组所需时间最长(22.19±2.09d),与各组相比有显著差异(F=141.900,P<0.01),MEBO组愈合时间与贝复济组无显著差异(P>0.05)。(3)创面愈合率:在第3d,7d,14d,空白组愈合率与模型组相比有显著差异(P<0.05);在第7d、第14d,MEBO组、贝复济组与模型组愈合率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);MEBO组与贝复济组比较,在第3d、14d,差异无统计学意义(P>0.05),但在第7d相比,有显著差异(P<0.05)。(4)Western blotting:(1)在整个创面愈合过程中,实验二各组大鼠创面肉芽组织中p38、MK2的含量呈逐渐递减趋势(P<0.01),造模后第3天、第7天、第14天各时相点各组大鼠创面肉芽p38、MK2表达均无差异(P>0.05);(2)在创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组创面组织中p-p38、p-...