摘要：目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)对慢性创面组织修复中STAT6和SOCS1表达的影响,为MEBT/MEBO临床推广提供可靠的理论依据。方法:(1)本实验选择150只Wistar大鼠作为研究对象,将这些大鼠分为模型组、空白组、急性组以及贝复新组、MEBO组,每组30只。按要求处理各组大鼠,分别在实验分组后的第3、第7天、第14天观察各组大鼠创面愈合情况,并于这3个时间节点切取大鼠创面组织行石蜡包埋,进行Masson染色及HE染色;(2)采用Western Blot法分别对信号转导子和转录激活子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)及细胞因子信号抑制因子(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)进行检测与对比,分析在各组大鼠创面组织中STAT6和SOCS1蛋白表达量的情况;(3)采用Real Time PCR法检测各组大鼠慢性难愈合创面肉芽组织中STAT6和SOCS1 mRNA基因转录情况。结果:(1)通过研究对比各组大鼠创面大体愈合情况及创面组织Masson及HE染色结果,可以发现MEBO组、急性组、贝复新组三组组间对比都未见显著差异性,且这三组的愈合情况明显好于模型组。(2)对比各组大鼠创面组织STAT6、SOCS1蛋白在各时间点的表达水平:急性组、MEBO组和贝复新组STAT6蛋白表达呈先降低后再增高的趋势(P<0.05),而模型组呈持续降低现象(P<0.05)。建模后第3天、第7天,对比模型组,其他四组的STAT6蛋白表达水平均较低,第14天,五组的STAT6蛋白表达水平未见显著差别(P>0.05)。急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1蛋白表达呈先上升后降低趋势(P<0.05),而模型组则持续升高(P<0.05);建模后第3天、第7天,急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1蛋白表达最高,最低为模型组。第14天时,各组有关该值实验结果的差异性并不明显(P>0.05)。(3)SOCS1 mRNA、STAT6mRNA的基因转录水平比较:建模后急性组、MEBO组和贝复新组的STAT6 mRNA转录水平均呈先降低,后增高趋势(P<0.05),而模型组则表现为持续降低的趋势(P<0.05);建模后第3天、第7天,空白组、急性组、贝复新组与MEBO组STAT6 mRNA转录水平均明显低于模型组(P<0.05);第14天五组mRNA转录水平无明显差异(P>0.05)。建模后急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1 mRNA转录水平呈先升高后降低现象(P<0.05),模型组呈持续升高现象(P<0.05);建模后第3、第7天,急性组、贝复新组与MEBO组SOCS1 mRNA转录水平均明显高于空白组及模型组(P<0.05),对比模型组,空白组转录水平更高(P<0.05);五组在第14天时的SOCS1 mRNA转录水平无统计学差异。结论:(1)通过MEBT/MEBO治疗可有效促进创面的愈合,明显减少浸润的炎症细胞,促进毛细血管、毛囊、皮质腺的生成;(2)MEBT/MEBO能够下调慢性难愈合创面中STAT6的蛋白表达及STAT6 mRNA转录水平,抑制2型固有免疫的促进纤维化修复的作用,从而减少瘢痕的形成;(3)MEBT/MEBO能够上调SOCS1蛋白表达及SOCS1 mRNA转录水平,从而抑制STAT6的蛋白表达及STAT6 mRNA转录水平,缓解慢性难愈合创面中的炎症反应,促进慢性难愈合创面组织原位再生修复。

摘要：目的:许多miRNAs对皮肤有特定功能,miRNA广泛参与了机体皮肤发育,包括表皮细胞的增殖、分化、衰老及毛囊的发育,miRNA-203是第一个被发现在表皮及毛囊丰富表达的miRNA, miRNA-203在皮肤中的表达比在其他器官中高出100倍,被称为是"皮肤特异性的miRNA",它可通过直接抑制p63基因表达而促进表皮分化。研究表明,miRNA-203表达与皮肤分化和分层密切相关。临床实践中应MEBT/MEBO治疗慢性难愈合性创面,发现MEBO能显著缩短创面愈合时间,减少瘢痕愈合;进一步研究发现MEBO/MEBO能明显提高创面肉芽组织VEGF、bFGF、EGF基因及蛋白表达,最终加快创面愈合的进程,减少疤痕形成。尽管我们的研究初步揭示了MEBO防治慢性难愈合创面的部分机制,但是MEBO是通过何种途径调节以上基因及蛋白表达的呢?这个问题还有待进行更深入的研究。鉴于miRNA是一类小分子的非编码调控基因,而且人类中大部分的蛋白编码基因受miRNA调控,所以我们研究目的是证明MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。方法:参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型。健康成年SPF级Wistar雄性大鼠250只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组50只、对照组50只、慢性难愈合创面组150只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠按上述模型建立方法在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠按上述方法制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组50只,各组创面制备后立即用药治疗。模型制备完成后,各组于1d、3d、7d、11d、14d共5个时相点随机取10只大鼠,尾静脉注射适量的多功能纳米探针,然后利用小动物活体成像系统,进行miRNA-203的活体原位荧光成像与分析检测。活体原位荧光成像与分析检测完成后,对大鼠作病理切片,Western Blot检测HIF-1α、PTEN、VEGFR2、PI3K、MMP2、p-Akt蛋白表达。结果:MEBO可以通过PTEN/Akt/VEGF信号通路影响血管内皮细胞的生长,调控血管新生;通过PTEN/Akt/EGF信号通路影响表皮细胞的增殖和爬行,调控再上皮化的过程,进而促进细胞生长因子产生和修复创面。而MEBO可以促进miRNA-203的表达,而miRNA-203又可以调节PTEN表达水平的变化。结论:PTEN-Akt-VEGF/EGF通路可以接受miRNAs调节而发挥相应作用,而MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。所以miRNA-203在MEBO发挥防治慢性难愈合创面作用过程中起到重要的作用。

摘要：目的:探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响,完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制,为临床应用及推广提供更多的理论依据。方法:(1)取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组(Blank)、急创组(Acute)、美宝组(MEBO)、贝复济组(rb-b FGF)、模型组(Model),每组18只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理,急创组直接进行背部皮肤剪除,建立急性损伤模型,并湿敷生理盐水纱布,其余三组大鼠制备慢性难愈合创面模型,分别用湿润烧伤膏、贝复济,生理盐水湿敷创面治疗。造模后第3、7、14天分别切取创面肉芽组织,部分置于甲醛液及电镜液中固定,待病理HE染色,免疫荧光及电镜实验时取用。其余创面标本置于-80℃冰箱,用于Western Blotting和Real-Time PCR检测,对比各组大鼠创面IL-18及Caspase-1蛋白表达情况及mRNA转录水平。结果:(1)创面愈合情况:治疗后第3天,各组大鼠创面愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第7天和第14天,急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率和模型组比较均明显升高(P<0.05),美宝组与贝复济组比较无差异(P>0.05)。急创组在第14天愈合效果最好。(2)HE染色情况:急创组、贝复济组、美宝组的组织形态学结构均优于模型组。(3)电镜观察情况:电镜观察显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大、细胞破损、胞液稀疏、着色较浅、胞膜不连续,膜孔形成的细胞焦亡特征。(4)免疫荧光染色结果:Caspase-1在造模后第3天的急性组、贝复济组、美宝组,模型组中均有不同程度表达,其中模型组表达明显;造模后第7天和第14天,其余各组表达均明显减少,而模型组相对其他组仍然明显表达。(5)Western Blotting和Real-Time PCR检测情况:(1)治疗后第3、7、14天,空白组各时间点IL-18蛋白表达水平无明显变化,P>0.05,差异无统计学意义;急创组、贝复济组、美宝组、模型组:大鼠创面组织内IL-18蛋白表达水平先升高后降低;各组对比情况:第3天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异P<0.05,急创组、贝复济组、美宝组两两比较无统计学差异。第7天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异...

摘要：目的观察皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对Wagner2级糖尿病足患者密歇根神经病变筛选表(MNSI)评分及患肢神经肌肉电生理的影响。方法将2013年10月—2016年6月于右江民族医学院附属医院被初次诊断和治疗的52例2型糖尿病合并Wagner2级糖尿病足患者按照入院先后顺序采用单双号数字表法随机分为MEBO组(26例)与贝复新组(26例),其中MEBO组患者采用湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)治疗局部创面,贝复新组患者采用重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(贝复新)治疗局部创面。对比观察两组患者入院时及治疗14、28 d时的MNSI评分、腓总神经运动传导速度(MCV)及感觉传导速度(SCV)、腓肠肌运动单位电位(MUP)时限。结果治疗过程中,MEBO组与贝复新组患者MNSI评分及腓肠肌MUP时限均逐渐降低、腓总神经MCV与SCV均逐渐升高,其中各时间点MNSI评分、腓肠肌MUP时限及腓总神经MCV与SCV组内两两对比,P均<0. 05,差异具有统计学意义;治疗14、28 d时MEBO组与贝复新组患者MNSI评分、腓总神经MCV与SCV、腓肠肌MUP时限对比,P均> 0. 05,差异无统计学意义。结论 MEBT/MEBO可促进Wagner2级糖尿病足创面的神经修复,改善周围神经传导速度,疗效与具有神经再生作用的贝复新相近,值得临床推广应用。