摘要：目的 探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织内核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)/醌氧化还原酶1(NQO1)信号通路的影响。方法 选取90只SPF级Wistar雄性大鼠适应性饲养1周后，采用随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组和贝复新组，每组18只。其中空白组大鼠只做备皮处理，对照组大鼠建立急性创面模型，模型组、MEBO组和贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型。模型建立后，空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水纱布换药处理，MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)药纱换药处理，贝复新组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶药纱换药处理，对比观察各组大鼠创面愈合率、组织病理学变化情况以及皮肤/创面组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及Nrf2、HO-1、NQO1蛋白与HO-1、NQO1 mRNA表达水平。结果 干预第3天，各组大鼠创面愈合率尤以对照组最高、贝复新组次之(P均<0.05);干预第7、14天，各组大鼠创面愈合率尤以MEBO组最高、贝复新组次之(P均<0.05)。HE染色结果显示，干预第3、7、14天，对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内坏死细胞及炎性细胞逐渐减少，成纤维细胞与毛细血管逐渐增多，而模型组大鼠创面组织内坏死细胞和炎性细胞减少不明显；Masson染色结果显示，干预第3、7、14天，对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内胶原纤维由细少且紊乱逐渐趋于粗大且平整，而模型组大鼠创面组织内胶原纤维虽逐渐增粗、增多，但排列仍较紊乱。干预第7天，对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内MDA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05);干预第3、7天，对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内SOD表达水平均明显高于模型组(P均<0.05)。干预第3、7天，MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内Nrf2、HO-1、NQO1蛋白以及HO-1、NQO1 mRNA表达水平均明显高于空白组、对照组和模型组(P均<0.05),且干预第7天，MEBO组大鼠创面组织内Nrf2、HO-1蛋白以及HO-1 mRNA表达水平均明显低于贝复新组(P均<0.05)。结论 MEBT/MEBO可能能够通过激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路减轻大鼠慢性难愈合创面氧化应激损伤，促进创面再生修复。
摘要：目的:通过氧化应激有关信号通路NRF2/HO-1/NQO1轴探讨皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist Exposedburn Ointment,MEBT/MEBO)促进大鼠慢性难愈合创面的再生修复机制。方法:90只SPF级Wistar大鼠被随机分为空白组、对照组(急性皮肤缺损)、慢性难愈合创面组(模型组、MEBO组、贝复新组),共5组,18只/组,模型组、MEBO组、贝复新组同时构建慢性难愈合创面模型。(1)于造模的第3、7、14日检测各组大鼠的创面愈合率;(2)采集创面组织,并采用HE染色、Masson染色检查各创面组织的细胞、肉芽、血管及胶原纤维等形态学改变;(3)比色法测定创面组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的浓度及超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase,SOD)的活力值;(4)采用免疫组化技术测定各组创面组织中的HO-1、NQO1平均光密度值;(5)采用免疫荧光法测定组织中NRF2蛋白表达量;(6)采用Western-blo法测定组织中HO-1、NQO1的蛋白表达水平;(7)采用Real-time PCR检测法测定组织中HO-1、NQO1m RNA的转录水平。结果:(1)对5组大鼠进行干预治疗第14日后,MEBO组及贝复新组的大鼠创面愈合率优于模型组(P<0.05);(2)对5组大鼠进行干预治疗第7、14日后,MEBO组及贝复新组的新生血管、胶原纤维及成纤维数量较模型组多且整齐(P<0.05);(3)对5组大鼠进行干预治疗第3、7、14日后,除第3日贝复新组外,其余四组创面组织中MDA含量均优于模型组(P<0.05);MEBO组的SOD的活性均优于模型组(P<0.05);(4)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1平均光密度值均比同期模型组高(P<0.05);(5)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的NRF2蛋白表达量均优于模型组(P<0.05);(6)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1蛋白表达水平均优于模型组(P<0.05);(7)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1m RNA转录水平均优于模型组(P<0.05)。结论:MEBT/MEBO通过激...
摘要：目的:许多miRNAs对皮肤有特定功能,miRNA广泛参与了机体皮肤发育,包括表皮细胞的增殖、分化、衰老及毛囊的发育,miRNA-203是第一个被发现在表皮及毛囊丰富表达的miRNA, miRNA-203在皮肤中的表达比在其他器官中高出100倍,被称为是"皮肤特异性的miRNA",它可通过直接抑制p63基因表达而促进表皮分化。研究表明,miRNA-203表达与皮肤分化和分层密切相关。临床实践中应MEBT/MEBO治疗慢性难愈合性创面,发现MEBO能显著缩短创面愈合时间,减少瘢痕愈合;进一步研究发现MEBO/MEBO能明显提高创面肉芽组织VEGF、bFGF、EGF基因及蛋白表达,最终加快创面愈合的进程,减少疤痕形成。尽管我们的研究初步揭示了MEBO防治慢性难愈合创面的部分机制,但是MEBO是通过何种途径调节以上基因及蛋白表达的呢?这个问题还有待进行更深入的研究。鉴于miRNA是一类小分子的非编码调控基因,而且人类中大部分的蛋白编码基因受miRNA调控,所以我们研究目的是证明MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。方法:参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型。健康成年SPF级Wistar雄性大鼠250只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组50只、对照组50只、慢性难愈合创面组150只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠按上述模型建立方法在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠按上述方法制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组50只,各组创面制备后立即用药治疗。模型制备完成后,各组于1d、3d、7d、11d、14d共5个时相点随机取10只大鼠,尾静脉注射适量的多功能纳米探针,然后利用小动物活体成像系统,进行miRNA-203的活体原位荧光成像与分析检测。活体原位荧光成像与分析检测完成后,对大鼠作病理切片,Western Blot检测HIF-1α、PTEN、VEGFR2、PI3K、MMP2、p-Akt蛋白表达。结果:MEBO可以通过PTEN/Akt/VEGF信号通路影响血管内皮细胞的生长,调控血管新生;通过PTEN/Akt/EGF信号通路影响表皮细胞的增殖和爬行,调控再上皮化的过程,进而促进细胞生长因子产生和修复创面。而MEBO可以促进miRNA-203的表达,而miRNA-203又可以调节PTEN表达水平的变化。结论:PTEN-Akt-VEGF/EGF通路可以接受miRNAs调节而发挥相应作用,而MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。所以miRNA-203在MEBO发挥防治慢性难愈合创面作用过程中起到重要的作用。
摘要：目的:从PTEN/AKT/VEGF信号通路进一步探讨MEBT/MEBO促进大鼠难慢性难愈合创面修复的机制。方法:健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白对照组18只、对照组（急性全层皮肤缺损组）18只、模型组54只。空白对照组大鼠不作任何有损伤处理;对照组大鼠在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;模型组大鼠在造模部位行全层皮肤切除后注射氢化可的松制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组18只。各组创面制备后立即用药治疗。在造模后第3天、第7天、第14天每组各处死6只,取新鲜创面组织,立即放于液氮罐中,并在取材完毕后迅速转入﹣80℃超低温冰箱。待标本全部收集完成后进行Western Blotting、RT-PCR方法检测PTEN、p-AKT、VEGFR2因子的表达。结果:（1）PCR结果:（1）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中PTEN表达量都呈现出降低-升高的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递减趋势（P<0.05）;MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的PTEN表达量均有显著差异（P<0.05）;空白对照组大鼠三个时相点的PTEN表达量未有明显变化（P>0.05）。（2）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中VEGFR2表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）;MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的VEGFR2表达量均有显著差异（P<0.05）;空白对照组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故VEGFR2表达量未有明显变化（P>0.05）。（3）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中p-AKT表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）;MEBO组、贝复济组和对照组各组三个时相点的p-AKT表达量均有显著差异（P<0.05）;空白对照组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故p-AKT表达量未有明显变化。（2）WB结果:（1）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中PTEN表达量都呈现出降低-升高的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递减趋势（P<0.05）;M...