摘要：烧伤创疡再生医疗技术(MEBT/MEBO)立足中西医结合理论,秉承中医整体观念,为创面营造生理性湿润环境的同时,通过转化生长因子β1 (TGF-β1)/Smad3、细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)等多种信号通路调控血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等多种细胞因子的表达,在糖尿病足、压疮、静脉性溃疡、神经性溃疡、痛风性溃疡等多种慢性难愈合创面的治疗中发挥了减轻创面疼痛、促进创面愈合、减少愈后瘢痕形成率及截肢率等作用,取得了良好的临床疗效。为更好地指导MEBT/MEBO的临床治疗,该研究对近年来MEBT/MEBO在慢性难愈合创面治疗中的基础与临床研究进展进行了综述。

摘要：目的通过动态观察大鼠慢性难愈合皮肤创面肉芽组织中p38、MK2蛋白及基因表达变化,从p38信号通路角度探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合皮肤创面的可能修复机制。方法实验一:以40只SD大鼠为研究对象,随机分为MEBO组、贝复济组、模型组、空白组,每组各10只,依据文献复制了大鼠体表皮肤溃疡模型。造模后第二天用药,观察创面愈合时间及愈合率;实验二:SD大鼠80只,随机分为4个组,每组20只,同实验一造模方法,造模后第3d,7d,14d各组随机处死5只大鼠,取相同部位皮肤溃疡创面肉芽组织,采用Western blotting和Real-Time PCR技术检测p38、MK2蛋白及其mRNA水平表达差异。结果(1)Western blotting检测结果:①在整个创面愈合过程中,纵向比较,P38、MK2总蛋白表达量在同个时相点各组差异无统计学意义(P>0.05),横向比较,在造模后第3天表达最高,其次逐渐下降;②在创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组创面组织中p-p38、p-MK2表达差异无统计学意义(P>0.05);在造模后第7天,各组间的差异开始明显,空白组、MEBO组、贝复济组表达量开始显著下降,模型组下降趋势不明显,各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05);造模后第14天,相比其他三组,模型组表达量仍处于较高水平(P<0.05),MEBO组和贝复济组差异无统计学意义(P>0.05);(2)RT-PCR检测结果:①在整个实验过程中,与空白组相比,MEBO组、贝复济组、模型组的P38 mRNA、MK2 mRNA表达量在第3天时最多,随后持续下降;②造模后第3天,各组差异无统计学意义(P>0.05);造模后第7天,MEBO组、贝复济组的表达量下降趋势明显,两组之间有明显统计学差异(P<0.05);造模后第14天,MEBO组、贝复济组的表达量持续下降,两组之间无统计学差异(P>0.05),但与模型组相比均有差异(P<0.05),模型组仍处于高表达。结论(1)MEBO能明显缩短大鼠慢性难愈合创面的愈合时间,下调p38和MK2磷酸化及其mRNA表达水平。(2)慢性难愈合创面难迟缓愈合与p-p38和p-MK2高水平表达有关,MEBO能促进慢性难愈合创面的作用机制之一可能是通过下调p38MAPK信号通路中p38和MK2磷酸化水平,阻断部分信号转导,抑制p38MAPK信号通路被过度激活的状态,从而促进大鼠慢性难愈合创面的愈合。

摘要：目的:观察皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进糖尿病足Wagner 3级创面愈合作用,初步探讨MEBT/MEBO对糖尿病足Wagner 3级创面愈合过程中AGEs-RAGE信号通路的干预机制,为临床MEBT/MEBO治疗糖尿病足溃疡提供理论依据。方法:采用随机数字表法纳入50～70岁糖尿病足Wagner 3级患者进行随机分组,分为治疗组36例和对照组30例。两组病例均进行基础治疗,包括控制血压、血脂,扩血管、营养神经、营养支持等对症支持治疗。治疗组采用MEBT/MEBO进行创面处理,对照组采用贝复济进行创面处理,换药次数1～2次/日。在治疗前、治疗两周、治疗四周分别对患者创面情况及症状情况(包括渗液、腐肉、肉芽、上皮量、创面面积及深浅、周围皮色、肿胀、疼痛)进行记录,并依照症状积分量表进行比较。于治疗前、治疗两周、治疗四周分别取部分创面组织,匀浆取上清液采用ELASA法测定AGEs、RAGE表达水平。所有实验数据采用SPSS22.0统计分析软件处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果:本研究共纳入66例糖尿病足Wagner 3级患者,分为治疗组(MEBO组)36例和对照组(贝复济组)30例。治疗前,两组病例一般情况(年龄、餐后血糖、肱踝指数、创面面积)、症状积分比较,组间差异均无统计学差异(P>0.05),具有可比性。治疗两周后,与贝复济组比较,MEBO组的腐肉、肉芽积分降低趋势明显,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗四周后,MEBO组的渗液、腐肉、肉芽、上皮量、创面、创周情况积分较贝复济组下降趋势明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。在治疗两周、治疗四周,两组创面组织AGEs表达水平均有所下降,与贝复济组比较,MEBO组AGEs表达量下降趋势明显,差异具有统计学意义(P<0.05);MEBO组在治疗两周、治疗四周RAGE表达量明显下降,与贝复济组比较,两组之间有明显统计学差异(P<0.05)。两组患者在经过四周治疗后,经秩和检验结果显示:治疗组痊愈2例,显效23例,有效9例,无效2例,有效率94.4%,显效率63.89%;贝复济组治愈0例,显效6例,有效19例,无效5例,有效率83.33%,显效率20%。两组结果比较,差异具有统计学意义(P<0.05),MEBO组疗效优于贝复济组。结论...

摘要：目的:(1)通过单细胞测序(single-cell RNA-sequencing,sc RNA-seq)技术分析糖尿病足创面愈合组织(healing diabetic foot ulcer,Healing DFU)和非愈合组织(DFU)中CC类趋化因子配体2(c-c motif ligand 2,CCL2)、非典型趋化因子受体1(atypical chemokine receptors 1,ACKR1)与组织干细胞、内皮细胞的关系,从而进一步探究其影响创面愈合的机制;(2)探讨MEBO湿润烧伤膏在小鼠DFU创面CCL2-ACKR1信号轴的活化作用以及通过影响内皮细胞的活性促进创面愈合的分子作用机制。方法:(1)通过单细胞测序技术分析Healing DFU、DFU创面组织中组织干细胞、内皮细胞基因本体(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析结果;细胞亚群通讯数量、强度及相互作用差异性;进一步确定两种创面组织内特异性信号通路及其配体-受体对比分析;(2)我们将48只C57BL/6Jnifdc小鼠作为研究对象,随机将其分为4组,分别为急性创面组(Acute组,n=12),模型组(Model组,n=12),贝复新组(GF组,n=12),湿润烧伤膏组(MEBO组,n=12)。除外急性创面组,其余3组小鼠连续5天腹腔内注射链脲佐菌素(50mg/kg),连续饲养8周后取尾部静脉血确定模型建立成功性。待糖尿病模型建立成功后,在小鼠背部全层皮肤处制备缺损创伤模型,Acute组和Model组小鼠创面滴加生理盐水(20μL),GF组小鼠创面外用贝复新(20μL),MEBO组外用湿润烧伤膏(20μL),直到药物充分吸收。分别于DFU模型建立后3d、7d、14d取小鼠创面愈合组织。将各时点切取的组织一部分装入冻存管置入液氮中,并及时转移至-80℃冰箱,另一部分冰冻包埋剂处理,-20℃冰箱保存。确定各组小鼠创面愈合比率;观察各组小鼠3d、7d、14d创面愈合情况;免疫荧光化学染色分析14d后各创面组织内CCL2、ACKR1的表达;蛋白印迹法(Western blot,WB)分析各组小鼠3d、7d、14d创面CCL2、ACKR1的表达水平。结果:(1)创面相关的差异基因表达分析显示,愈合创面与未愈合创面的组织干细胞共有1948个差异基因,其中1198个基因被上调,685基因被下调;组织干细胞GO富集功能分析结果表明,其与创面愈合密切相关;组织干细胞中CCL2-ACKR1信号通路活性对内皮细胞亚群生物活性产生影响,最终促进DFU创面的愈合;(2)随着时间的延长,各组小鼠的创面组织体现出逐渐愈合的趋势,急性创面组小鼠愈合情况好于DFU模型组;贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预可以加速DFU小鼠创面的愈合情况,其中MBEO组体现出最好的疗效;(3)DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的荧光强度低于急性创面组;贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预均可以上调DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的强度,MEBO组创面组织内CCL2、ACKR1的荧光强度最高;(4)Acute组随时间变化其创面组织内的CCL2、ACKR1蛋白表达量呈现出持续升高的趋势,表达量明显高于Model组,贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预均可以上调DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的强度。结论:(1)DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1表达失调,MEBO的干预可以逆转DFU组小鼠创面组织内CCL2、ACKR1失调现象;(2)MEBO通过活化组织干细胞激活CCL2-ACKR1信号轴,促进创面组织血管内皮细胞的生成,最终促进创面愈合。