摘要:第一部分:小鼠慢性创面愈合过程中巨噬细胞极化类型及影响创面愈合关键的信号通路研究目的:经由单细胞转录组测序技术(sc RNA-seq)对小鼠创面内巨噬细胞(Mac)极化类型与成纤维细胞(Fib)、上皮细胞(EC)之间的关系,还有影响创面愈合的主要信号途径展开探讨。方法:经由sc RNA-seq法探究小鼠愈合创面(Wound)与未愈合创面(Un_wound)组织在细胞亚群通讯强度、数量与互作方面的不同表现;对2类创面组织中特异性信号途径及其配体-受体加以明确,同时开展比较分析;并探讨小鼠Wound与Un_wound组织中Monocyte亚群类型及其几类关键亚群类型。结果:(1)小鼠2类创面(Wound、Un_wound)的单细胞质控Counts值皆未显示异常,细胞之间表现出较好的整体关联性。Wound组织中的细胞亚群以皮肤组织干细胞(Tissue SC)、EC、软骨细胞(Chondrocytes)、B细胞(B cells)、单核巨噬细胞(Monocyte)、Fib、内皮细胞(Endo)、角化细胞(KC)与T细胞(T cells)为主;Un_wound组织中相关的细胞亚群以皮肤组织SC、T细胞(T cells)、波纹管细胞(CMP)、Monocyte、神经元细胞(Neurons)、Endo、EC、KC、Fibroblasts、软骨细胞(Chondrocytes)与B细胞(B cells)为主;在Wound组织中,Monocyte同EC、Fib、Tissue sc细胞亚群之间皆存在紧密联系;在Un_wound组织内,就Monocyte同EC、Fib细胞亚群的通讯强度与数目而言,相较Wound组织皆偏低;(2)对于小鼠慢性创面组织Fib与Epithelial这2类细胞亚群,皆会受到Monocyte所含EGF信号途径CXCL1-Akr1信号轴的活化效应影响,CXCL信号途径内的不同配体-受体之间的作用性,对于整个信号途径,CXCL16-Akr6以及CXCL1-Akr1配体受体所具备的价值最高。对单个配体受体在不同细胞通信中的调控功能进行分析的结果显示,Cxcl3-Ark1配体受体于Mac与血管内皮细胞(VEC)的信号关联性更为显著,且更为关键;(3)Monocyte亚群由0、1、2、3、4、5这五类构成,前两类在Wound组织中占据主要位置,CD68与CD162特异性表达亚群存在比较明显的优势,同时CD163标记的Mono...
学位论文
MEBO活化M2巨噬细胞激活EGF信号促进糖尿病创面愈合的机制研究
期刊论文
MEBO对大鼠糖尿病性创面组织中miRNA-21及其靶标TGF-β1/Smads信号通路的影响
摘要:目的 探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗大鼠糖尿病性创面的作用及部分作用机制。方法 采用高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,成模后将糖尿病大鼠随机分为模型组、MEBO组及重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用液(贝复济)组,与空白组同时制备创面模型后,分别予以相应药物干预治疗,MEBO组予以MEBO创面外敷,贝复济组予以贝复济创面外敷,空白组与模型组予以凡士林无菌纱布创面外敷。各组于干预治疗后第4、6、12天观察创面情况计算创面愈合率,分别取相同位点创面组织采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miRNA-21和转化生长因子(TGF)-β1 mRNA表达,应用Western印迹检测创面组织中TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3和Smad7蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组第4、6、12天创面愈合率、创面组织中miRNA-21、TGF-β1 mRNA及TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3蛋白表达显著降低,Smad7蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组比较,MEBO组干预第6、12天创面愈合率、创面组织中miRNA-21、TGF-β1 mRNA表达及TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3蛋白表达显著升高,Smad7蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论 MEBO可能通过miRNA-21调控TGF-β1/Smads信号通路促进成纤维细胞迁移、增殖,促进糖尿病性创面修复。