摘要：目的:1.观察皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进体表慢性难愈合创面(简称“慢创”)愈合的药效作用。2.观察MEBT/MEBO对体表慢性难愈合创面组织的苏木精-伊红染色(HE)染色病理形态学的改善作用;并观察全层皮肤愈合过程中,其真皮再生模式及与表皮层、基底膜层再生的关系。3.探究MEBT/MEBO干预PI3K/Akt/mTOR信号通路调控创面蛋白质合成促进体表慢性难愈合创面愈合的修复机制。4.探讨MEBT/MEBO作用IGF-1/PI3K/Akt信号通路调控创面血管生成促进慢创修复的机制。方法:1.将160只雄性SD大鼠随机分为空白组24只、对照组(急性全层皮肤缺损组)34只和体表慢性难愈合创面组102只,慢性难愈合创面组(全层皮肤缺损+注射醋酸氢化可的松)造模成功后再随机分为模型组34只、贝复新组(阳性对照组)34只和MEBT/MEBO组34只。并同时于第3、7、14 d取创面组织。各组分别干预治疗后,观察创面愈合情况,记录统计创面愈合时间;于干预治疗后第3 d、7 d和14 d固定焦距拍照创面计算愈合率。HE染色法观察病理学改变、PAS染色法观察创面基底膜层的生长情况。提取第3、7、14 d创面组织总RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot法检测PI3K、Akt(S473)、mTOR(Ser2448)、p70 S6K(Thr389)、4E BP1(Thr37/46)的mRNA和蛋白转录及表达水平。2.145只雄性SD大鼠,随机分为空白组21只、对照组31只和慢创组93只,慢创组造模成功后再随机分为模型组、贝复新组和MEBT/MEBO组各31只,于干预治疗后第3 d、7 d和14 d取创面组织。碱性水浸泡法扫描电子显微镜技术(SEM)观察创面组织愈合过程中真皮全层再生过程。提取第3 d、7 d和14 d创面组织,分离上清液,ELISA法检测IGF-1含量;提取创面组织总RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot法检测PI3K、Akt(S473)、eNOS(S1177)、VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平。结果:1.与模型组比较,MEBT/MEBO组显著缩短大鼠创面愈合时间和提高创面愈合率(P<0.01)。2.造模及干预治疗14 d后,MEBT/...

摘要：目的:观察皮肤再生医疗技术(Moist Exposed Burn Therapy/Moist Exposed Burn Ointment,MEBT/MEBO)对肛瘘术后创面愈合的临床疗效以及对大鼠创面组织中BMP-7表达的影响。方法:(1)将2018年5月-2019年9月在我院行手术治疗的肛瘘患者90名,随机分成对照组30例,MEBO组30例,贝复济组30例,MEBO组以皮肤再生医疗技术进行干预治疗,贝复济组以贝复济干预治疗,对照组术后创面以生理盐水进行干预,对比三组术后第3、7、14、21天创面分泌物、肉芽组织以及肛门疼痛情况;对比三组术后第2、14、21天两组创面愈合情况。(2)按照随机数表法将54只健康成年SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组(18只)、MEBO组(18只)和贝复济组(18只),模型建立后,对照组创面局部涂生理盐水、MEBO组以皮肤再生医疗技术进行干预治疗,贝复济组以贝复济干预治疗,并分别于治疗后第3、7、14天取创面组织进行检测。采用Western blot检测各组大鼠创面组织中BMP-7蛋白的表达水平,采用油红O染色观察创面组织中脂肪细胞的生成情况,采用苏木精-伊红染色观察创面愈合情况,采用Masson染色观察创面组织纤维化情况。结果:(1)三组创面分泌物对比在术后第3天对比差异无统计学意义(P>0.05),在术后第7天贝复济组最少,在术后第14、21天MEBO组和贝复济组创面分泌物均少于对照(P<0.05);(2)在术后第7、14、21天,MEBO组和贝复济组的肉芽组织均优于対照组(P<0.05);(3)三组肛门局部疼痛评分对比在术后第3天差异无统计学意义(P>0.05),在术后第7、14、21天对比,MEBO组和贝复济组疼痛程度低于对照组(P<0.05);(4)术后第14天、第21天,MEBO组和贝复济组创面愈合率高于对照组(P<0.05)。(5)在治疗的第3天、第7天、第14天,创面组织中BMP-7表达水平组内比较差异具有统计学意义(P<0.05),BMP-7表达水平逐渐升高(第3天<第7天<第14天),组间对比:MEBO组与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05),贝复济组与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05),MEBO组与贝复济组对比差异无统计学意义(P>0.05)。(6)随着治疗时间延长,脂肪细胞生成数逐渐增多(P<0.05),其中MEBO组、贝复济组脂肪细胞生成数较对...

摘要：目的观察皮肤原位再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足创面TGF-β1、P-smad3表达的调控作用。方法100只SD大鼠随机分为糖尿病足造模组(80只)与空白对照组(20只),从糖尿病足造模组成功造模大鼠中取60只,随机分为模型组、贝复济组及MEBO组,各20只。于用药第5天、14天,各取相同部位创面组织,采用Western blotting技术检测TGF-β1、Smad3、P-smad3(磷酸化smad3)蛋白表达水平。结果四组大鼠Smad3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);MEBO组与贝复济组TGF-β1、P-smad3蛋白表达无差异(P>0.05),均低于空白对照组、高于模型组(P<0.05或P<0.01);与第5天相比,第14天时MEBO组与贝复济组TGF-β1、P-smad3表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠糖尿病足溃疡创面修复早期,MEBT/MEBO可能通过上调创面TGF-β1、P-smad3蛋白的表达,促进创面损伤修复;而在创面修复后期,MEBT/MEBO可能通过下调创面TGF-β1、P-smad3蛋白的表达,减少瘢痕愈合。

摘要：目的:建立糖尿病溃疡创面大鼠模型,以细胞自噬和PI3K-Akt-mTOR信号通路为研究切入点,探讨皮肤再生医疗技术(湿润暴露疗法,Moist exposed burn therapy,MEBT/湿润烧伤膏,Moist exposed burn ointment,MEBO)促进糖尿病溃疡创面修复的机制,为临床推广应用MEBT/MEBO治疗糖尿病溃疡创面提供理论依据。方法:将80只健康雄性wistar大鼠随机分成糖尿病溃疡创面组60只、对照组20只。糖尿病溃疡创面组先进行适应性喂养1周,再予高脂饲料喂养4周,禁食16小时,再腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)45mg/kg,以空腹血糖≥16.7mmol/L为糖尿病造模成功。1周后在大鼠背部建立直径约为2.5cm×2.5cm的全层皮肤切除模型,创面深度要求到达筋膜层,创面表面涂抹金黄色葡萄球菌悬浮液,造成糖尿病溃疡创面模型,再将其随机分为三组:MEBO组、康复新组和模型组,每组20只,分别采用MEBO、康复新液、生理盐水外敷进行创面处理。对照组大鼠在背部行全层皮肤切除,创面深度及大小与糖尿病溃疡创面组相同,但不予注射STZ,其创面也不涂抹金黄色葡萄球菌悬浮液。造模成功后各组动态观察创面的愈合情况,测量、计算各组大鼠的创面愈合率,并分别于第1天、第5天、第11天、第18天、第25天共5个时相点各组随机取4只大鼠,采集造模区创面组织后处死。将采集到的组织样品分别行常规病理技术观察创面组织形态学结构、电镜观察自噬体变化、Western blot检测PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)分析PI3K、Akt、mTOR mRNA的表达情况。结果:1.创面愈合情况:对照组的创面修复最好,愈合时间最短;MEBO组、康复新组的创面修复情况显著优于模型组。创面愈合率:各组大鼠的创面愈合率均随着各时相点的增加呈逐渐升高趋势,在第5天,创面愈合率:对照组>康复新组>MEBO组>模型组,差异有统计学意义(P<0.05);第11天、第18天、第25天,创面愈合率:对照组>MEBO组>康复新组>模型组,差异有统计学意义(P<0.05),其中在第18天和第25天,MEBO组与康复新组之间对比差异均无统计学意义(P=0.76、0.23)。2.创面病理变化:第5天,MEBO组、康复新组及对照组的...