摘要：目的:通过对S D大鼠默克尔细胞（merkel cell,MCs）的提取、分离、培养及鉴定,观察局部注射MCs联合美宝湿润烧伤膏（MEBO）外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法:1)取新生SD大鼠（1～3d）足垫、须垫及背部皮肤,采用酶消化法分离提取MCs,接种于多聚赖氨酸（PLL）包被的培养瓶内,通过细胞免疫组织化学法测定细胞角蛋白CK20的表达,qPCR检测MCs中Piezo2 mRNA的表达,ELISA法检测培养第2d、4d、6d、8d、10d细胞分泌CGRP情况。2)建立SD大鼠足底创面模型,按照干预方式的不同分为如下五组:A组（MCs注射+MEBO组）;B组（MCs局部注射组）;C组（MEBO外用组）;D组（阴性对照组）;E组（鼠神经生长因子注射阳性对照组）。细胞组用MCs 1×106个/mL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处,24小时后追加1次,每次每个部位25μL;MEBO组按相应分组给予MEBO外用,每日换药一次,直至创面愈合。阳性及空白对照组分别予等体积鼠神经生长因子及PBS注射。观察创面愈合时间,计算各组创面各时间点愈合率,棉拭子检测足底感觉恢复情况,分别于干预后7d、14d、21d三个时相各组分别随机抽取6只大鼠,切取组织,制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维生长情况。3)每组大鼠均于造模后第7d、14d、21d时用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录、统计缩足次数并计算百分比。结果:1)采用中性蛋白酶和胰酶依次消化SD大鼠足底及须垫部位所取皮肤组织可得到较多MCs,以CK20做细胞免疫化学染色可见MCs呈阳性反应。2)实验中应用中性蛋白酶及胰酶双酶消化法可得到MCs,以Ham,s F-12培养基为基础培养基,加入20ng/ml bFGF可使MCs稳定增殖;qPCR结果示MCs中Piezo2 mRNA的表达量为:0.0270±0.0042;酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测检测MCs上清液中降钙素基因相关肽（CGRP）在培养第2、4、6、8、10天浓度随培养时间的延长逐渐增加,培养第6d到8d时增加速率更快,间接提示默克尔细胞增殖情况。3)创面愈合方面,大体观察肿胀程度及炎性反应程度无明显区别,总愈合时间上应用MEBO的两组创面较其他实验组提前,A组E组愈合时间分别为14.33±0.69天、16.44±0.86天、14.83±0.71天、1...

摘要：目的:白癜风是皮肤科常见难治性皮肤病,全世界人群发病率平均在1%-2%[1]。且现阶段发病原因上不十分明了,涉及到的方方面面均是推测性和探讨性的,现多倾向于是黑色素细胞产生黑色素的能力进行性较少或消失,其中包括如遗传因素、免疫因素精神神经因素、内分泌因素、表皮角质形成细胞功能异常、药物因素、黑色素细胞因素等诸多方面的病理性改变导致白癜风的发生[2]。现白癜风的治疗方法很多,常用的药物口服及外用要治疗,光疗法,自体表皮黑色素细胞移植术,中医中药治疗等。方法很多但总的来说,现阶段还没有一种较为理想、疗效确切的药物或方法,现有的文献报道率较为乐观,但真正能解决问题的痊愈率低,基本在20%左右,且远期疗效尚不能肯定[3]。我科自2013年开始由本人主持临床科研课题"黑色素细胞原位再生的研究",采用该技术治疗白癜风。我科在采用湿润烧伤法治疗组织缺损的患者的时候发现,患者缺损的组织不但能完全再生,其创面愈合后表皮色素细胞也能完全恢复,黑色素细胞功能完全恢复。就设计采用再生医疗的方法对白癜风患者皮损缺失的黑色素细胞进行修复。再生医疗技术的核心就在于,使用药物(湿润烧伤膏)刺激正常组织中的原位干细胞(角蛋白19型细胞)向正常细胞分化,进而修复缺失的组织及细胞[4]。而白癜风患者的皮损区存在黑色素细胞缺失和功能减退的病理表现[5]。本技术的新颖性在于采用皮肤原位再生疗法治疗白癜风,通过表皮磨削(去除病损的组织)[6]后用微针在皮损处打孔(每周一次)[7],在皮损处外敷湿润烧伤膏,使药物能通过皮肤的孔道持续渗透至真皮浅层、表皮基底层,再生类药物能持续刺激此处的原位干细胞(角蛋白19型细胞),促使其增值分化为原位黑色素细胞,在向有功能的黑色素细胞进行转化,进而修复白癜风皮损。该方法采用再生医学的理论、皮肤干细胞的理论,结合表皮磨削、微针技术,使用具有再生功能的中药对白斑进行修复。湿润烧伤膏中不含有传统中医药中有促进黑色素增值、提高酪氨酸酶活性的物质,而是直接刺激角蛋白19型细胞进行修复,与国内外现有的研究方法有明显的不同。方法:一)研究对象病例来源随机完成60例观察病例,来自于邛崃市医疗中心医院皮肤科门诊病人。借助SPSS13统计分析系统产生受试者所接受处理的随机安排。1.符合以白癜风的诊断标准。2.年龄在3～70周岁之间,性别不限。3.皮损为局限型、散发型、肢端型白癜风。4.从未接受过任何治疗的白癜风患者(包括药物口服、外擦、中医治疗、外科治疗、物理治疗)。5.自愿接受并配合表皮磨削、微针治疗。(二)仪器及材料1.表皮磨削机山东神思医疗设备有限公司型号BY-11 2.上海兰尤生物科技有限公司生产微针2.2mm 3.汕头市美宝制药有限公司生产湿润烧伤膏(三)方法 1.治疗组1.1选取白癜风患者白班区皮损,1.2操作方法:外用75%医用酒精常规消毒,消毒的面积应大于皮损的范围5cm。待皮肤完全干燥后,手指绷紧皮肤,使用表皮磨削机,400转速/分钟,在白癜风皮损表面磨削,同时用生理盐水冲洗,以磨削区见到点状渗血即停止,磨削面积应大于白斑区约2cm,压迫止血,使用湿润烧伤膏外涂微针打孔区皮肤,涂药厚度约1～2mm。剪取比皮损面积略大的消毒纱布三层,用湿润烧伤膏将其制作成油纱,覆盖在皮损区,外覆干燥消毒棉纱4层,并包扎固定。在操作中要求湿润烧伤膏的厚度要足够,要保持皮肤24小时不间断的接触药物。约10天后,磨削区表皮已覆盖创面,但色素细胞功能尚未恢复,进而使用微针在白斑区打孔。手指绷紧皮肤,使用2.2mm的微针在白斑区皮肤做"米"字形来回滚动,微针滚动覆盖的面积应大于白斑区约2cm。每个方向滚动5次,大约做5分钟。以看到皮肤发红,并有点状渗血点后停止滚动,并用消毒干棉签将渗血轻轻拭去。使用湿润烧伤膏外涂微针打孔区皮肤,使用方法同上。疗程中微针皮肤打孔每周进行一次,药物外敷包扎每天进行两次。3个月为1疗程。每周微针打孔前皮损区进行拍片存档,2个疗程后观察疗效。治疗期间停用一切与本病相关的药物及其他治疗。2.对照组对照组:白癜风患者白斑区皮损外擦卤米松乳膏每天1次、卡泊三醇软膏每天1次[8]。3个月为1疗程,2个疗程后观察疗效。3.统计学方法用Excel软件对临床观察表进行数据录入后,利用统计学软件SPSS13.0进行数据统计,数据以均数±标准差(x±S)来表示,计量资料采用T检验,计数资料采用四格表卡方检验,等级资料采用Mann-Whitney U检验,假设检验统一使用双侧检验,给出检验统计量及其对应的P值,以P<0.05作为有统计学意义,以P<0.01作为有高度统计学意义。4.疗效评价疗效标准痊愈:白斑全部消退,恢复正常肤色。显效:白斑部分消退或缩小,恢复正常肤色的面积占皮损面积≥50%。好转:白斑部分消退或缩小,恢复正常肤色小,恢复正常肤色的面积占皮损面积≥10%,<50%。无效:白斑无变化或缩小,恢复正常肤色的面积占皮损面积<10%。结果:二、结果使用黑色素细胞原位再生医疗技术的患者在痊愈率、显效率、好转率均高于对照组,差异均有统计学意义。表120例白癜风患者治疗后与对照组的6个月疗效比较痊愈显效好转无效组别n(%)n(%)n(%)n(%)n(%)治疗组307(23.3)8(26.6)9(30.0)6(20.0)80.0对照组306(20.0)7(23.3)7(23.3)10(33.3)76.6P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05结论:研究表明人黑色素细胞(MC)在妊娠5-6周自胚胎神经嵴开始移行,第7周到达表皮,在胚胎移行途中,有少数成黑色素细胞(MB)中途停滞或转化为无黑色素静止MC。这些在胚胎发育中停止或迷走MC,他们能从外毛鞘重新移行至脱色表皮区,积极参与白癜风脱色斑复色。移行入表皮的MC最终定居在基底膜,每个MC与其毗邻的大约36个角质形成细胞(KC)在形态和功能上密切关联构成表皮黑素单元。而白癜风脱色斑是否能修复还取决于局部微环境的多种细胞或分子水平的调节,如基底层KC、KC衍生细胞因子、基底膜成分、细胞黏附分子和细胞外基质(ECM)等因素,不利的环境因子很可能阻止或破坏MC向色素脱失斑移行[9]。原位再生皮肤技术是在创伤表面外涂湿润烧伤膏,在治疗创面会形成生理性的湿润环境,激活创面深层的潜能再生细胞,使其转化成具有分化为三个配层功能的干细胞即角蛋白19型细胞,并在创面区启动皮肤的胚胎发育过程和胚胎式组合,最终增殖、分化为正常皮肤组织结构,达到再生皮肤的临床治疗效果[10]。在该临床实验中,我们首先将白斑表皮通过磨削术去除,破坏已经异常的微环境因素,形成一个创面,在创面上使用湿润烧伤膏,可以保障创面有一个生理性修复所必需的湿润环境,修复功能受损的MC;激活创面深层的潜能再生细胞,使其转化成具有分化为三个胚层功能的干细胞即角蛋白19型细胞,使其增殖分化、为正常皮肤组织结构,其中就包括MC的分化;使用湿润烧伤膏通过微针技术在表皮打出数以万计的细小通道,使促进组织生长的药物湿润烧伤膏通过这些孔道持续进入表皮基底膜和外毛鞘附近,进一步改善局部微环境的同时诱导外毛鞘处的MB增值分化,并向脱色区移行,同时修复在白斑区已经功能受损的黑色素细胞,使其向正常黑色素细胞转化。实验中发现,首先黑色素恢复的区域是脱色区毛囊周围和白斑周围的皮肤黑色素增加,进而黑色素向白斑中心扩展。黑色素出现最早在一个月左右,由四周白斑边缘向中心生长,由毛囊周围向四周扩散。这和白癜风发病机制及修复机制是吻合的[11],是由于该处存在较多的无黑色素静止MC,在刺激的作用下转变为正常的MC。同时发现,2个月左右在白斑无毛囊区域也可见到点状黑色素形成,说明此部分的黑色素形成并不是由毛囊根部或皮损外周移行而来。可能存在两种机制:皮肤再生疗法修复了白斑区功能受损但结构尚未破坏的黑色素细胞,使其转变为产黑色素颗粒的黑色素细胞;在表皮磨削部位深层的角蛋白19型细胞,向正常皮肤组织转化的结果,其中就包括角蛋白19型细胞向黑色素细胞转化。在该实验中发现,对于白癜风皮损出就行磨削及微针针刺后患者无一例发生同形反应,原因在于表皮磨削术,去除了白斑区皮肤,破坏了局部异常的微环境状态,去除了局部异常的免疫反应;湿润烧伤膏有抑制白癜风表皮区异常免疫反应的作用。该实验说明,通过破坏局部白斑区的微环境,皮肤再生疗法刺激角蛋白19型细胞、无黑色素静止MC增殖分化,修复功能受损的MB的治疗方法,对于白癜风白斑的修复时有效的。但实验中发现,对于泛发型型白癜风、肢端型白癜风、节段型白癜风、完全型白癜风效果不理想,可能是患者机体内存在持续性的特异性体液免疫和细胞免疫功能异常相关。对于局限型面积大于于10cm2的白癜风疗效不好。这也是我们将来要研究的方向,即在口服药物或其他的治疗方法的协同治疗下,该方法对于难治性、顽固性白癜风的疗效是否能提高。

摘要：目的探讨高海拔地区应用皮肤原位再生复原技术(MEBT/MEBO)治疗电弧光烧伤的效果。方法将2006年～2011年在海拔2260 m的高原上住院的烧伤患者中采用MEBT/MEBO治疗的138例电弧光烧伤病例资料进行回顾性分析,对创面愈合时间、疼痛感、瘢痕增生情况进行评价。结果皮肤原位再生复原技术对创面止痛效果好,创面无干燥加深,浅Ⅱ度创面平均7 d生理性愈合,深Ⅱ度创面平均22 d生理性愈合,Ⅲ度创面平均36 d愈合且无增生性瘢痕。结论应用皮肤原位再生复原技术在高海拔地区治疗电弧光烧伤,治愈率高、致残率低、方法简便易行,适合在高海拔地区推广使用。

摘要：目的探讨高寒地区应用原位再生医疗技术(MEBT/MEBO)治疗冻伤的临床疗效。方法对分别应用原位再生医疗技术和传统疗法治疗的100例冻伤患者的病例资料进行回顾性总结分析,评价两种方法治疗的创面愈合时间、创面感染率、止痛效果、愈后瘢痕增生情况(6个月后随访)。结果原位再生医疗技术在止痛、控制感染、缩短创面愈合时间、减少关节僵硬及肌肉萎缩发生率、减轻愈后瘢痕增生方面均优于传统治疗方法。结论原位再生医疗技术治疗高寒地区冻伤患者具有减少疼痛、治愈率高、致残率低、感染发生率低、操作简便等特点,适合在高寒地区推广使用。