摘要：目的:许多miRNAs对皮肤有特定功能,miRNA广泛参与了机体皮肤发育,包括表皮细胞的增殖、分化、衰老及毛囊的发育,miRNA-203是第一个被发现在表皮及毛囊丰富表达的miRNA, miRNA-203在皮肤中的表达比在其他器官中高出100倍,被称为是"皮肤特异性的miRNA",它可通过直接抑制p63基因表达而促进表皮分化。研究表明,miRNA-203表达与皮肤分化和分层密切相关。临床实践中应MEBT/MEBO治疗慢性难愈合性创面,发现MEBO能显著缩短创面愈合时间,减少瘢痕愈合;进一步研究发现MEBO/MEBO能明显提高创面肉芽组织VEGF、bFGF、EGF基因及蛋白表达,最终加快创面愈合的进程,减少疤痕形成。尽管我们的研究初步揭示了MEBO防治慢性难愈合创面的部分机制,但是MEBO是通过何种途径调节以上基因及蛋白表达的呢?这个问题还有待进行更深入的研究。鉴于miRNA是一类小分子的非编码调控基因,而且人类中大部分的蛋白编码基因受miRNA调控,所以我们研究目的是证明MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。方法:参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型。健康成年SPF级Wistar雄性大鼠250只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组50只、对照组50只、慢性难愈合创面组150只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠按上述模型建立方法在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠按上述方法制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组50只,各组创面制备后立即用药治疗。模型制备完成后,各组于1d、3d、7d、11d、14d共5个时相点随机取10只大鼠,尾静脉注射适量的多功能纳米探针,然后利用小动物活体成像系统,进行miRNA-203的活体原位荧光成像与分析检测。活体原位荧光成像与分析检测完成后,对大鼠作病理切片,Western Blot检测HIF-1α、PTEN、VEGFR2、PI3K、MMP2、p-Akt蛋白表达。结果:MEBO可以通过PTEN/Akt/VEGF信号通路影响血管内皮细胞的生长,调控血管新生;通过PTEN/Akt/EGF信号通路影响表皮细胞的增殖和爬行,调控再上皮化的过程,进而促进细胞生长因子产生和修复创面。而MEBO可以促进miRNA-203的表达,而miRNA-203又可以调节PTEN表达水平的变化。结论:PTEN-Akt-VEGF/EGF通路可以接受miRNAs调节而发挥相应作用,而MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。所以miRNA-203在MEBO发挥防治慢性难愈合创面作用过程中起到重要的作用。

摘要：目的:从PTEN/AKT/VEGF信号通路进一步探讨MEBT/MEBO促进大鼠难慢性难愈合创面修复的机制。方法:健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白对照组18只、对照组（急性全层皮肤缺损组）18只、模型组54只。空白对照组大鼠不作任何有损伤处理;对照组大鼠在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;模型组大鼠在造模部位行全层皮肤切除后注射氢化可的松制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组18只。各组创面制备后立即用药治疗。在造模后第3天、第7天、第14天每组各处死6只,取新鲜创面组织,立即放于液氮罐中,并在取材完毕后迅速转入﹣80℃超低温冰箱。待标本全部收集完成后进行Western Blotting、RT-PCR方法检测PTEN、p-AKT、VEGFR2因子的表达。结果:（1）PCR结果:（1）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中PTEN表达量都呈现出降低-升高的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递减趋势（P<0.05）;MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的PTEN表达量均有显著差异（P<0.05）;空白对照组大鼠三个时相点的PTEN表达量未有明显变化（P>0.05）。（2）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中VEGFR2表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）;MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的VEGFR2表达量均有显著差异（P<0.05）;空白对照组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故VEGFR2表达量未有明显变化（P>0.05）。（3）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中p-AKT表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）;MEBO组、贝复济组和对照组各组三个时相点的p-AKT表达量均有显著差异（P<0.05）;空白对照组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故p-AKT表达量未有明显变化。（2）WB结果:（1）MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中PTEN表达量都呈现出降低-升高的趋势（P<0.05）;模型组则显示呈递减趋势（P<0.05）;M...

摘要：目的:观察皮肤原位再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足创面组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3、磷酸化smad3(P-smad3)表达及形态学结构的影响。方法:将80只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、贝复济组和MEBT/MEBO组,每组各20只。模型组、MEBT/MEBO组和贝复济组大鼠参照糖尿病模型制备法,采用腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素,建立糖尿病动物模型;空白对照组大鼠则腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。分别于干预治疗后第5、14天各取相同部位创面组织,采用Western blot法检测TGF-β1、Smad3和P-smad3蛋白表达水平,常规病理技术观察溃疡创面组织形态学结构,各组间差异比较采用方差分析和秩和检验。结果:治疗后5 d,各组大鼠Smad3蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(F=1.036,P=0.388);MEBT/MEBO组、贝复济组的大鼠TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平则均明显低于空白对照组(P=0.005、P=0.026,P=0.001、P=0.005);而且,上述2组大鼠的TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平亦明显高于模型组(P=0.000);此外,与第5天结果相比,第14天MEBT/MEBO组与贝复济组的TGF-β1、P-smad3表达水平明显下降,差异均具有统计学意义(P=0.000)。治疗后第5天,MEBT/MEBO组、贝复济组及空白对照组溃疡创面肉芽组织中成纤维细胞形态、毛细血管新生情况优于模型组,但空白对照组成纤维细胞排列紊乱;第14天,MEBO组、贝复济组创面组织成纤维细胞及胶原纤维排列致密成形,空白对照组胶原纤维增生明显但排列紊乱,模型组胶原纤维呈团状增生。结论:MEBT/MEBO在创面愈合早期可激活TGF-β1/Smad3信号通路,促进创面损伤修复,而在愈合晚期则抑制该信号通路的活化,控制创面组织过度增生。

摘要：目的 研究探讨创疡再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病溃疡创面组织中血管新生的影响。方法 选取SPF级雄性SD大鼠60只适应性饲养1周后,按照随机数表法将其随机分为模型对照组、MEBO组和VSD组,每组20只,建立糖尿病溃疡模型,模型对照组大鼠创面予以凡士林油纱换药处理,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)换药处理,VSD组大鼠创面予以负压封闭引流(VSD)处理,对比各组大鼠创面愈合率及创面组织中微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达水平。结果 (1)干预第3、7、10、14天,模型对照组大鼠创面愈合率均明显低于MEBO组与VSD组(P均<0.05);干预第14天,MEBO组大鼠创面愈合率明显高于VSD组(P<0.05),其余各时间点MEBO组与VSD组间无明显差异(P均>0.05)。(2)干预第7、14天,模型对照组大鼠创面组织中MVD均明显低于MEBO组与VSD组(P均<0.05),且VSD组大鼠创面组织中MVD又明显低于MEBO组(P均<0.05)。干预第7天,模型对照组大鼠创面组织中可见极少量散在分布的棕黄色颗粒,而MEBO组与VSD组大鼠创面组织中均可见较多密集分布的棕黄色颗粒;干预第14天,模型对照组、MEBO组、VSD组大鼠创面组织中均可见大量密集分布的棕黄色颗粒,且MEBO组与VSD组棕黄色颗粒量明显多于模型对照组。(3)干预第7、14天,模型对照组大鼠创面组织中VEGF mRNA表达水平均明显低于MEBO组与VSD组(P均<0.05),且VSD组大鼠创面组织中VEGF mRNA表达水平又明显低于MEBO组(P均<0.05)。结论 MEBT/MEBO可通过提高VEGF mRNA的表达水平促进血管生成,进而促进糖尿病溃疡创面愈合,效果明显优于凡士林油纱与VSD。