摘要：目的通过检测大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白(cytokeratin,CK) 15的动态表达水平,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进慢性难愈合创面愈合的部分作用机制。方法选取SPF级健康成年雄性Wistar大鼠90只适应性喂养7 d后,按照随机数表法随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组与rb-bFGF组,每组18只,其中空白组大鼠只做背部备皮处理,对照组大鼠于背部建立急性创面模型,模型组、MEBO组和rb-bFGF组大鼠于背部建立慢性难愈合创面模型;模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以0.9%氯化钠注射液纱布湿敷,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)药纱换药治疗,rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor,rb-bFGF)药纱换药治疗。分别于治疗第3、7、14天,采用Western blotting技术及Real-time PCR技术检测各组大鼠皮肤或创面组织中CK15蛋白及CK15mRNA的表达水平。结果空白组大鼠皮肤组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平无明显变化(F=0.054、1.333,P=0.948、0.293),其他各组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均呈先降低后升高的趋势(CK15蛋白:F=192.766、58.065、126.888、118.244,P均=0.000;CK15 mRNA:F=580.869、272.569、569.254、736.054,P均=0.000)。治疗第3、7天,对照组、MEBO组、rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均显著低于模型组(P均<0.05),而治疗第14天对照组、MEBO组、rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均显著高于模型组(P均<0.05);治疗第3、7、14天,MEBO组与rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均无明显差异(P均>0.05)。结论通过调控创面组织中CK15的表达水平促进表皮干细胞的增...

摘要：目的:通过氧化应激有关信号通路NRF2/HO-1/NQO1轴探讨皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist Exposedburn Ointment,MEBT/MEBO)促进大鼠慢性难愈合创面的再生修复机制。方法:90只SPF级Wistar大鼠被随机分为空白组、对照组(急性皮肤缺损)、慢性难愈合创面组(模型组、MEBO组、贝复新组),共5组,18只/组,模型组、MEBO组、贝复新组同时构建慢性难愈合创面模型。(1)于造模的第3、7、14日检测各组大鼠的创面愈合率;(2)采集创面组织,并采用HE染色、Masson染色检查各创面组织的细胞、肉芽、血管及胶原纤维等形态学改变;(3)比色法测定创面组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的浓度及超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase,SOD)的活力值;(4)采用免疫组化技术测定各组创面组织中的HO-1、NQO1平均光密度值;(5)采用免疫荧光法测定组织中NRF2蛋白表达量;(6)采用Western-blo法测定组织中HO-1、NQO1的蛋白表达水平;(7)采用Real-time PCR检测法测定组织中HO-1、NQO1m RNA的转录水平。结果:(1)对5组大鼠进行干预治疗第14日后,MEBO组及贝复新组的大鼠创面愈合率优于模型组(P<0.05);(2)对5组大鼠进行干预治疗第7、14日后,MEBO组及贝复新组的新生血管、胶原纤维及成纤维数量较模型组多且整齐(P<0.05);(3)对5组大鼠进行干预治疗第3、7、14日后,除第3日贝复新组外,其余四组创面组织中MDA含量均优于模型组(P<0.05);MEBO组的SOD的活性均优于模型组(P<0.05);(4)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1平均光密度值均比同期模型组高(P<0.05);(5)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的NRF2蛋白表达量均优于模型组(P<0.05);(6)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1蛋白表达水平均优于模型组(P<0.05);(7)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1m RNA转录水平均优于模型组(P<0.05)。结论:MEBT/MEBO通过激...

摘要：目的:通过检测不同干预方案下大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白15(cytokeratin-15 CK15)与细胞角蛋白19(cytokeratin-19 CK19)的动态表达,探讨完善皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进创面愈合的部分分子学机制,从而为其在临床治疗上推广应用提供理论支持。方法:将90只健康成年Wistar雄性大鼠(SPF级)随机分为空白组(18只)、急创对照组(18只)、慢创模型组(18只)、MEBO组(18只)和Rb-b FGF(18只)。其中空白组不做损伤处理,急创对照组做急性全层皮肤缺损创面模型,慢创模型组、MEBO组和Rb-b FGF组在急创对照组基础上注射氢化可的松,制备慢性难愈合创面模型。模型建立后给予创面换药,每日两次。急创对照组与慢创模型组创面给予碘伏消毒,MEBO组碘伏消毒后涂抹MEBO治疗,Rb-b FGF组碘伏消毒后涂抹重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel Rb-b FGF)治疗。最后分别于治疗后第3,7,14天在各组中分别随机抽取6只大鼠,腹腔麻醉后,完整切取创面肉芽组织。一部分组织给予甲醛固定,之后进行HE染色。其余组织投入-80℃冰箱。所有时相点组织收集完毕后,应用Western Blotting技术以及Real Time PCR技术统一检测、对比各组大鼠创面组织中CK15、CK19蛋白表达量及CK15、CK19m RNA的转录水平。结果:(1)HE染色,各组样本HE染色后显微镜下观察,空白组未见变化,均为正常皮肤组织学形态。在造模后的第3天,急创对照组组织水肿,同时可见大量中性粒细胞浸润。慢创模型组,MEBO组,Rb-b FGF组组织间水肿,少量淋巴细胞浸润。在造模后的第7天,急创对照组镜下见中性粒细胞减少,组织间水肿减轻,少量毛细血管再生。MEBO组,Rb-b FGF组淋巴浸润情况亦有所减少,组织间水肿有所改善,除血管新生外,还可见少量毛囊。而慢创模型组淋巴细胞浸润程度未见减轻,组织水肿仍明显,缺乏新生毛细血管。在造模后的第14天,急创对照组,MEBO组,Rb-b FGF组组织无炎性细胞浸润,水肿不明显,可见新生的分层表皮结构,同时可见毛囊、皮脂腺...

摘要：目的 探讨创疡再生医疗技术（MEBT/MEBO）对慢性难愈合创面组织中核因子κB (NF-κB) p65、NF-κB抑制蛋白（IκB）、 IκB激酶（IKK）及其磷酸化蛋白表达水平的影响。方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠90只适应性饲养1周后，按照随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、 MEBO组和贝复新组，每组18只。空白组大鼠仅做备皮处理，对照组大鼠建立急性创面模型，模型组、 MEBO组、贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型。空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面采用生理盐水纱布换药处理，MEBO组大鼠创面采用湿润烧伤膏（MEBO）药纱换药处理，贝复新组大鼠创面采用重组牛碱性成纤维细胞生长因子换药处理，对比各组大鼠干预第3、 7、 14天创面愈合率、组织病理学变化，以及皮肤/创面组织中NF-κB p65、 IκBα、 IKK及p-NF-κB p65、 p-IκBα、 p-IKK蛋白表达水平。结果 （1）干预第3、 7天，各组大鼠创面愈合率均无明显差异（P均> 0.05）；干预第14天，模型组大鼠创面愈合率明显低于对照组、 MEBO组（P均<0.05），其余各组间创面愈合率均无明显差异（P均> 0.05）。（2）干预第7天，MEBO组、贝复新组大鼠创面组织中胶原纤维量均明显增加，可见大量成纤维细胞和新生毛细血管及少量毛囊结构生成；干预第14天，MEBO组、贝复新组大鼠创面组织中胶原纤维量明显多于模型组，可见整齐排列的毛细血管及成熟的毛囊、皮脂腺等组织，而模型组大鼠创面组织中仍可见少量炎症细胞浸润，但已有大量成纤维细胞生成。（3）干预第7、 14天，空白组、对照组、 MEBO组大鼠创面组织中NF-κB p65、 IKK、 p-NF-κB p65、 p-IKK、 p-IκBα蛋白表达水平均明显低于模型组（P均<0.05）；干预第7天，MEBO组大鼠创面组织中NF-κB p65、 IκBα蛋白表达水平均明显高于贝复新组（P均<0.05）, IKK、 p-NF-κB p65、 p-IKK、 p-IκBα蛋白表达水平均明显低于贝复新组（P均<0.05）；干预第14天，MEBO组大鼠创面组织中IKK、 IκBα蛋白表达水平均明显低于贝复新组（P均<0.05）。结论 MEBT/MEBO促进慢性难愈合创面愈合的机制可能与创面组织中NF-κB p65、 IκBα、 IKK及其磷酸化蛋白的表达水平有关。