摘要：目的:探讨皮肤医疗再生技术对慢性难愈合创面组织中核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶(IKK)及其磷酸化蛋白表达水平的影响,来探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏影响慢性难愈合创面进程中是否涉及到NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα表达的相互作用,探讨MEBT/MEBO的部分作用机制,为临床应用MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面提供理论依据与技术壁垒。方法:(1)方法:选取SPF级别健康2月龄Wistar雄性大鼠,90只,体重范围235±15g,适应性喂养一周。用随机数法将90只大鼠分为5组,每组18只,分别是:空白组、对照组(急性全层皮肤缺损组)、模型组、MEBO组、贝复新组。慢性难愈合创面组包括模型组、MEBO组和贝复新组。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠根据付小兵教授制备全层皮肤缺损模型结合沈氏改良塑料环肉芽肿定量法,经改进,建立大鼠慢性难愈合创面模型。所有组别除空白组外在造模后立刻用药处理。换药前,每组每天用1/5000呋西林溶液清洗两次。(2)在建立模型后的第3天、第7天、第14天分别每组麻醉6只大鼠取单侧标本,继续观察大鼠创面达到完全愈合时间,观察各组大鼠的创面情况、愈合时间及愈合率,通过HE染色观察大鼠模型创面内的炎症细胞变化及数量和Masson染色观察大鼠模型创面肉芽组织病理形态学变化、胶原蛋白的生成、组织中纤维以及炎性因子。(3)采用Western Blot检测细胞外基质成分中的NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα蛋白表达变化差异,观察各组受干预后对创面中NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα的表达的影响。(4)采用免疫荧光测定NF-κB p65入核荧光强度,间接性半定量观察炎症因子的表达趋势。结果:(1)干预第3、7天,各组大鼠创面愈合率均无明显差异(P>0.05);干预第14天,模型组大鼠创面愈合率明显低于对照组、MEBO组(P<0.05),其余各组间创面愈合率均无明显差异(P>0.05)。MEBO与对照组和贝复新组对比,创面愈合时间无明显差别(P>0.05),与模型组相比,MEBO组愈合时间明显短于模型组(P...

摘要：目的观察原位再生医疗技术(Moist Exposed Bum Therapy/Moist Exposed Burn Ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面磷酸化ERK1及c-mye蛋白表达的影响。方法将80只SD大鼠随机分为空白对照组(20只)、MEBO组(20只)、贝复济组(20只)和模型组(20只),其中空白对照组大鼠仅作皮肤全层切除,不予药物干预;MEBO组、贝复济组及模型组在皮肤全层切除后,建立慢性难愈合创面模型,其中模型组建模后不予药物治疗,MEBO组及贝复济组建模后分别采用MEBO及贝复济换药治疗,并于治疗第3、7、14天,通过Western Blotting技术检测4组大鼠相同部位创面肉芽组织中磷酸化ERK1及c-myc蛋白的表达水平。结果创面愈合过程中,4组大鼠创面肉芽组织中磷酸化ERK1及c-myc蛋白表达水平均呈先上升后下降的趋势。其中,治疗第3、7、14天,空白对照组创面肉芽组织中p-ERK1及p-c-mye的表达水平均明显高于其他3组,P均<0.001,差异具有统计学意义;治疗第7、14天,MEBO组与贝复济组创面肉芽组织中p-ERK1及p-c-myc的表达水平均高于模型组,P均<0.05,差异具有统计学意义,但MEBO组和贝复济组组间对比,P>0.05,差异无统计学意义。结论 MEBT/MEBO可能是通过提高磷酸化ERK1及c-myc蛋白的表达水平,促进慢性难愈合创面的修复。

摘要：目的:许多miRNAs对皮肤有特定功能,miRNA广泛参与了机体皮肤发育,包括表皮细胞的增殖、分化、衰老及毛囊的发育,miRNA-203是第一个被发现在表皮及毛囊丰富表达的miRNA, miRNA-203在皮肤中的表达比在其他器官中高出100倍,被称为是"皮肤特异性的miRNA",它可通过直接抑制p63基因表达而促进表皮分化。研究表明,miRNA-203表达与皮肤分化和分层密切相关。临床实践中应MEBT/MEBO治疗慢性难愈合性创面,发现MEBO能显著缩短创面愈合时间,减少瘢痕愈合;进一步研究发现MEBO/MEBO能明显提高创面肉芽组织VEGF、bFGF、EGF基因及蛋白表达,最终加快创面愈合的进程,减少疤痕形成。尽管我们的研究初步揭示了MEBO防治慢性难愈合创面的部分机制,但是MEBO是通过何种途径调节以上基因及蛋白表达的呢?这个问题还有待进行更深入的研究。鉴于miRNA是一类小分子的非编码调控基因,而且人类中大部分的蛋白编码基因受miRNA调控,所以我们研究目的是证明MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。方法:参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型。健康成年SPF级Wistar雄性大鼠250只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组50只、对照组50只、慢性难愈合创面组150只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠按上述模型建立方法在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠按上述方法制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组50只,各组创面制备后立即用药治疗。模型制备完成后,各组于1d、3d、7d、11d、14d共5个时相点随机取10只大鼠,尾静脉注射适量的多功能纳米探针,然后利用小动物活体成像系统,进行miRNA-203的活体原位荧光成像与分析检测。活体原位荧光成像与分析检测完成后,对大鼠作病理切片,Western Blot检测HIF-1α、PTEN、VEGFR2、PI3K、MMP2、p-Akt蛋白表达。结果:MEBO可以通过PTEN/Akt/VEGF信号通路影响血管内皮细胞的生长,调控血管新生;通过PTEN/Akt/EGF信号通路影响表皮细胞的增殖和爬行,调控再上皮化的过程,进而促进细胞生长因子产生和修复创面。而MEBO可以促进miRNA-203的表达,而miRNA-203又可以调节PTEN表达水平的变化。结论:PTEN-Akt-VEGF/EGF通路可以接受miRNAs调节而发挥相应作用,而MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。所以miRNA-203在MEBO发挥防治慢性难愈合创面作用过程中起到重要的作用。

摘要：目的探究烧伤创疡再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)对烧伤创面组织中角蛋白19 (keratin 19, K19)表达的影响及可能的作用机制。方法选取15只健康雄性昆明小鼠,按照随机数表法随机选取5只作为对照组,10只建立深Ⅱ度烫伤模型后随机分为模型组与治疗组,其中治疗组小鼠创面采用湿润烧伤膏进行处理、模型组小鼠创面采用生理盐水进行处理、对照组小鼠背部脱毛后不做任何处理,1周后取皮肤或创面组织并通过免疫组织化学染色、蛋白质印迹(Western blot)及定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, Q-PCR)等技术检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及K19的表达水平。结果治疗第1-7天,治疗组小鼠创面清洁,并始终保持湿润状态,且随着治疗时间的延长逐渐呈现上皮化状态;模型组小鼠创面逐渐加深,并出现感染征象。治疗1周后,免疫组织化学染色法及Western blot法检测结果显示,3组小鼠皮肤或创面组织中Beclin-1、LC3及K19表达水平对比,治疗组>模型组>对照组,P均<0.01,差异具有统计学意义;除Western blot法检测结果显示治疗组与模型组小鼠创面组织中LC3表达水平对比,P>0.05外,其余各检测结果均显示小鼠皮肤或创面组织中Beclin-1、LC3及K19表达水平两两对比,P<0.01,差异具有统计学意义。Q-PCR技术检测结果显示,3组小鼠皮肤或创面组织中K19 mRNA表达水平对比,治疗组>模型组>对照组,P <0.01,差异具有统计学意义;3组小鼠皮肤或创面组织中K19mRNA表达水平两两对比,P均<0. 01,差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO促进烧伤创面愈合可能与增加创面组织中K19的表达有关,而诱导自噬相关蛋白的高表达可能是其具体机制之一。