摘要：第一部分:小鼠慢性创面愈合过程中巨噬细胞极化类型及影响创面愈合关键的信号通路研究目的:经由单细胞转录组测序技术（sc RNA-seq）对小鼠创面内巨噬细胞（Mac）极化类型与成纤维细胞（Fib）、上皮细胞（EC）之间的关系,还有影响创面愈合的主要信号途径展开探讨。方法:经由sc RNA-seq法探究小鼠愈合创面（Wound）与未愈合创面（Un＿wound）组织在细胞亚群通讯强度、数量与互作方面的不同表现;对2类创面组织中特异性信号途径及其配体-受体加以明确,同时开展比较分析;并探讨小鼠Wound与Un＿wound组织中Monocyte亚群类型及其几类关键亚群类型。结果:（1）小鼠2类创面（Wound、Un＿wound）的单细胞质控Counts值皆未显示异常,细胞之间表现出较好的整体关联性。Wound组织中的细胞亚群以皮肤组织干细胞（Tissue SC）、EC、软骨细胞（Chondrocytes）、B细胞（B cells）、单核巨噬细胞（Monocyte）、Fib、内皮细胞（Endo）、角化细胞（KC）与T细胞（T cells）为主;Un＿wound组织中相关的细胞亚群以皮肤组织SC、T细胞（T cells）、波纹管细胞（CMP）、Monocyte、神经元细胞（Neurons）、Endo、EC、KC、Fibroblasts、软骨细胞（Chondrocytes）与B细胞（B cells）为主;在Wound组织中,Monocyte同EC、Fib、Tissue sc细胞亚群之间皆存在紧密联系;在Un＿wound组织内,就Monocyte同EC、Fib细胞亚群的通讯强度与数目而言,相较Wound组织皆偏低;（2）对于小鼠慢性创面组织Fib与Epithelial这2类细胞亚群,皆会受到Monocyte所含EGF信号途径CXCL1-Akr1信号轴的活化效应影响,CXCL信号途径内的不同配体-受体之间的作用性,对于整个信号途径,CXCL16-Akr6以及CXCL1-Akr1配体受体所具备的价值最高。对单个配体受体在不同细胞通信中的调控功能进行分析的结果显示,Cxcl3-Ark1配体受体于Mac与血管内皮细胞（VEC）的信号关联性更为显著,且更为关键;（3）Monocyte亚群由0、1、2、3、4、5这五类构成,前两类在Wound组织中占据主要位置,CD68与CD162特异性表达亚群存在比较明显的优势,同时CD163标记的Mono...
摘要：研究背景和目的糖尿病创面是糖尿病常见并发症,具有病程长、易复发等特点,给患者带来极大困扰,探寻其病理机制及治疗具有重要意义。巨噬细胞和成纤维细胞是创面中的重要效应细胞。现发现ADAM-10调控细胞粘附、生长、迁移等过程。但ADAM-10在糖尿病创面中的具体机制尚不明确。本研究探究ADAM-10在巨噬细胞、成纤维细胞中的调控作用;及其在糖尿病创面愈合过程中的作用机制;结合药物治疗创面,验证研究结果。研究方法1.临床上筛选慢性难愈合创面,随机分组:湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MM)组、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(rb-b FGF)组。在治疗第3、10天,取肉芽及少量上皮组织,免疫荧光(IF)染色ADAM-10、MMP-12,观察蛋白变化特点。2.对sh ADAM-10 RAW264.7细胞进行蛋白组学分析,筛选差异蛋白,并进行生物信息学分析。3.对RAW264.7和J774a.1细胞,进行sh ADAM-10(sh)或EX ADAM-10(EX)干预,随后给予脂多糖(LPS)或MMP-12抑制剂+LPS(MMP-12inh+LPS)刺激,检测细胞活力、基因转录、蛋白表达等情况。4.对L929成纤维细胞进行EX干预,随后LPS刺激,观察细胞活力、ADAM-10以及其它蛋白表达水平。5.正常、糖尿病大鼠分别制备创面,分组为急性(Acute)组、模型(Model)组、MM组以及rb-b FGF组。观察第3、7、10、14天的创面情况;创面率;病理结构;亚细胞结构;ADAM-10转录水平;蛋白表达及定位情况。结果1.慢性难愈合创面治疗第3天,MM组内ADAM-10、MMP-12表达均低于rb-b FGF组。相较于治疗第3天,第10天ADAM-10表达增加;MMP-12降低;MM增加ADAM-10作用低于rb-b FGF;rb-b FGF降低MMP-12作用明显。2.sh RAW264.7细胞蛋白组学检测结果显示:干扰ADAM-10影响创面愈合相关的多种生物学过程,并导致MMP-12和AKT降低。3.巨噬细胞中(1)对较于CON组,1000ng/ml的LPS作用9 h～24 h增加细胞活力(P<0.05);1.5μmol/L的MMP-12inh作用12 h～36 h对细胞活力无影响(P>0.05)。LPS作用12 h显著降低ADAM-10、增加MMP-12基因转录水平(P<0.01);LPS增加MMP-12、i NOS、T...