摘要：目的:本研究通过对比单纯使用皮肤再生医疗技术(MEBO/MEBT),观察“补托法”结合MEBO/MEBT处理压疮的疗效、安全性及基础机制。方法:选取符合标准的压疮患者60例,将其均随机分为治疗组和对照组,每组各30例。两组均予以常规治疗,对照组创面规范按照MEBO/MEBT处理,每日2次,并根据情况适当清创。治疗组在对照组基础上服用八珍汤加减,总疗程4周。于治疗前后治疗记录创面面积、渗液量及创面组织类型后进行PUSH评分,评价愈合情况,记录创面新生新生上皮出现时间,记录不良反应,评价其安全性;于第7、14、21、28日取创缘组织,一部分HE染色后观察组织病理形态变化,一部分用western blot法检测压疮组织中CK19的表达水平;对临床观察结果及CK19检测结果进行统计学分析。结果:本次研究脱失或剔除治疗组7个、对照组8个,最终治疗组23人、对照组22人,共45人纳入试验结果。(1)临床观察结果治疗前后两组内压疮PUSH评分进行比较,有统计学差异(两组P均<0.05),两组患者压疮PUSH评分在治疗前后均有变化,即两组压疮较治疗前好转;治疗后两组间PUSH评分比较,有统计学差异(P<0.05),治疗组低于对照组,即治疗组压疮愈合情况优于对照组。(2)基于PUSH评分评价“补托法”结合MEBO/MEBT治疗III、IV期(气血亏虚证)压疮的效果,治疗组有效22例、无效1例,总有效率95.65%,对照组有效12例、无效10例,总有效率54.55%,治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间治疗后新生表皮出现时间差异有统计学意义(P<0.05),新生表皮出现时间:治疗组早于对照组。安全性比较,治疗组及对照组分别出现2例、1例轻度不良反应,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)实验观察结果观察压疮创面组织HE染色后组织病理形态学变化:治疗前两组压疮组织病理情况基本相同,均可见组织疏松水肿,部分区域变性坏死,纤维模糊断裂,部分血管坏死,真皮内出血,巨噬细胞、嗜中性粒细胞及大量淋巴细胞等炎性细胞浸润。研究过程中治疗组新生血管及纤维量生长更快,并在14d时即出现新生上皮,21d时出现毛囊、腺体结构,对照组相同结构新生时间晚于治疗组1周。对压疮组织中CK19表达量进行组间比较:在0d、7d时治疗组及对照组创面中CK19表达量的差异无统计学意义(P>0.05),14d、21d、28d时组间差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组高于对照组。两组创面在不同时间点CK19的表达总体上有差异(P<0.05),两组创面CK19表达量7d与14d、0d与14d之间,治疗组7d与28d之间,对照组0d与21d之间,无明显差异(P>0.05),其余任意同组内两时间点存在统计学差异(P<0.05),并且两组创面中CK19表达量呈现随时间先降低后升高最后再降低的趋势(28d<7d<0d、28d<14d<21d)。结论:(1)MEBO/MEBT联合“补托法”可促进III、IV期(气血亏虚证)压疮患者创面的愈合,且比较安全,其机制可能与促进表皮干细胞的分化及其标志物CK19表达相关。(2)MEBO/MEBT联合“补托法”可促进III、IV期(气血亏虚证)压疮患者创面中表皮组织、肉芽组织及附属器生成。(3)MEBO/MEBT治疗III期、IV期(气血亏虚证)压疮患者过程中,创面中CK19表达量呈先降低后升高再降低的趋势,加用“补托法”不改变其基本趋势,但可在使用2周后促进创面组织中表皮干细胞标志物CK19的表达。

摘要：研究背景和目的糖尿病创面是糖尿病常见并发症,具有病程长、易复发等特点,给患者带来极大困扰,探寻其病理机制及治疗具有重要意义。巨噬细胞和成纤维细胞是创面中的重要效应细胞。现发现ADAM-10调控细胞粘附、生长、迁移等过程。但ADAM-10在糖尿病创面中的具体机制尚不明确。本研究探究ADAM-10在巨噬细胞、成纤维细胞中的调控作用;及其在糖尿病创面愈合过程中的作用机制;结合药物治疗创面,验证研究结果。研究方法1.临床上筛选慢性难愈合创面,随机分组:湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MM)组、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(rb-b FGF)组。在治疗第3、10天,取肉芽及少量上皮组织,免疫荧光(IF)染色ADAM-10、MMP-12,观察蛋白变化特点。2.对sh ADAM-10 RAW264.7细胞进行蛋白组学分析,筛选差异蛋白,并进行生物信息学分析。3.对RAW264.7和J774a.1细胞,进行sh ADAM-10(sh)或EX ADAM-10(EX)干预,随后给予脂多糖(LPS)或MMP-12抑制剂+LPS(MMP-12inh+LPS)刺激,检测细胞活力、基因转录、蛋白表达等情况。4.对L929成纤维细胞进行EX干预,随后LPS刺激,观察细胞活力、ADAM-10以及其它蛋白表达水平。5.正常、糖尿病大鼠分别制备创面,分组为急性(Acute)组、模型(Model)组、MM组以及rb-b FGF组。观察第3、7、10、14天的创面情况;创面率;病理结构;亚细胞结构;ADAM-10转录水平;蛋白表达及定位情况。结果1.慢性难愈合创面治疗第3天,MM组内ADAM-10、MMP-12表达均低于rb-b FGF组。相较于治疗第3天,第10天ADAM-10表达增加;MMP-12降低;MM增加ADAM-10作用低于rb-b FGF;rb-b FGF降低MMP-12作用明显。2.sh RAW264.7细胞蛋白组学检测结果显示:干扰ADAM-10影响创面愈合相关的多种生物学过程,并导致MMP-12和AKT降低。3.巨噬细胞中(1)对较于CON组,1000ng/ml的LPS作用9 h～24 h增加细胞活力(P<0.05);1.5μmol/L的MMP-12inh作用12 h～36 h对细胞活力无影响(P>0.05)。LPS作用12 h显著降低ADAM-10、增加MMP-12基因转录水平(P<0.01);LPS增加MMP-12、i NOS、T...