摘要：目的:通过检测不同干预方案下大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白15(cytokeratin-15 CK15)与细胞角蛋白19(cytokeratin-19 CK19)的动态表达,探讨完善皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进创面愈合的部分分子学机制,从而为其在临床治疗上推广应用提供理论支持。方法:将90只健康成年Wistar雄性大鼠(SPF级)随机分为空白组(18只)、急创对照组(18只)、慢创模型组(18只)、MEBO组(18只)和Rb-b FGF(18只)。其中空白组不做损伤处理,急创对照组做急性全层皮肤缺损创面模型,慢创模型组、MEBO组和Rb-b FGF组在急创对照组基础上注射氢化可的松,制备慢性难愈合创面模型。模型建立后给予创面换药,每日两次。急创对照组与慢创模型组创面给予碘伏消毒,MEBO组碘伏消毒后涂抹MEBO治疗,Rb-b FGF组碘伏消毒后涂抹重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel Rb-b FGF)治疗。最后分别于治疗后第3,7,14天在各组中分别随机抽取6只大鼠,腹腔麻醉后,完整切取创面肉芽组织。一部分组织给予甲醛固定,之后进行HE染色。其余组织投入-80℃冰箱。所有时相点组织收集完毕后,应用Western Blotting技术以及Real Time PCR技术统一检测、对比各组大鼠创面组织中CK15、CK19蛋白表达量及CK15、CK19m RNA的转录水平。结果:(1)HE染色,各组样本HE染色后显微镜下观察,空白组未见变化,均为正常皮肤组织学形态。在造模后的第3天,急创对照组组织水肿,同时可见大量中性粒细胞浸润。慢创模型组,MEBO组,Rb-b FGF组组织间水肿,少量淋巴细胞浸润。在造模后的第7天,急创对照组镜下见中性粒细胞减少,组织间水肿减轻,少量毛细血管再生。MEBO组,Rb-b FGF组淋巴浸润情况亦有所减少,组织间水肿有所改善,除血管新生外,还可见少量毛囊。而慢创模型组淋巴细胞浸润程度未见减轻,组织水肿仍明显,缺乏新生毛细血管。在造模后的第14天,急创对照组,MEBO组,Rb-b FGF组组织无炎性细胞浸润,水肿不明显,可见新生的分层表皮结构,同时可见毛囊、皮脂腺...

摘要：目的:通过观察研究不同治疗方案下大鼠创面组织CK10、CK14的蛋白及mRNA表达量。阐述皮肤原位再生医疗技术(Moist expose burn ointment/moist expose burn therapy,MEBT/MEBO)对慢性难愈合创面的治疗效果。同时进一步揭示MEBT/MEBO在改善慢性难愈合创面的部分作用机制。方法:本研究通过将90只SPF级wistar大鼠随机分为5组,分别为空白组(18只)、急创组(18只)、慢创组(18只)、rb-bFGF组(18只)及MEBO组(18只)。分别按照各组的要求对创面进行处理,于造模治疗后第3、7、14天采取大鼠创面组织。对3个时相点相同部位大鼠创面组织进行石蜡切片和Masson染色,观察对其各组大鼠创面组织形态学差异。运用western blot及RT-PCR法对第3、7、14天的大鼠创面组织的CK10、CK14的蛋白及mRNA表达量进行检测并对比其差异。结果:(1)空白组大鼠创面组织镜下形态学未见明显改变。随着治疗周期的延长,大鼠创面组织水肿逐渐消退,新生血管明显增多,皮肤附属器官逐渐形成。在愈合过程中,急创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织明显优于慢创组大鼠创面组织。(2)Western Blotting:空白组大鼠在实验过程中未对其做任何干预处理,我们所取组织中CK10、CK14的蛋白表达在实验所采用的3个时相点上并无实质性差异,经统计学计算后也证实了其间的差异是没有统计学意义的(P>0.05)。余下4组大鼠创面组织中CK10、CK14蛋白的表达量在不同的时相点存在差异,对比发现3天、7天、14天同组大鼠之间存在较明显的差异,不仅具有统计学意义(P<0.05),而且还呈现出一个逐渐增多的趋势。我们观察实验中第7天和第14天这两个时相点结果发现,rb-bFGF组和MEBO组这两组大鼠创面组织中所测得结果明显要优于慢创组,同样经过统计分析证明了其具有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR:其表达结果和Western Blotting相符合,空白组大鼠在实验过程中未对其做任何干预处理,我们所取组织中CK10、CK14 mRNA的表达在实验所采用的3个时相点上并无实质性差异,经统计学计算后也证实了其间的差异是没有统计学意义的(P>0.05)。余下4组大鼠创面组织中CK10、CK14 mRNA的表达量在不同的时相点存在差异,对比发现3天、7...

摘要：目的:通过对细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)的表达水平研究,来探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)能否通过影响CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达水平,加快治疗慢性难愈合性创面修复进程,探讨MEBT/MEBO的部分作用机制,为其临床推广应用于慢性难愈合创面的治疗提供参考数据。方法:(1)健康成年SPF级Wistar雄性大鼠60只,用随机数字表法分为:空白组(KB组)12只、急性组(JX组)12只、模型组(MX组)12只、MEBO组(MB组)12只和贝复新组(BFX组)12只。KB组只剃毛,JX组只切除皮肤,后三组建立大鼠慢性难愈合创面模型。每日换药2次。(2)分别在造模后第3、7、14天,每组处死4只大鼠后,再取标本,观察各组大鼠的创面情况,并计算其愈合率,通过HE染色及Masson染色来观察创面组织形态学变化。(3)采用Western Blot、Real-time qPCR检测各组CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达变化及CollagenⅠ和CollagenⅢ的mRNA转录水平的差异。结果:(1)疗效观察:MB组和BFX组创面修复效果好,创面修复情况与JX组无显著性差异(P>0.05)。HE染色及Masson染色:与MX组相比,JX组、MB组和BFX组的毛细血管、胶原纤维、皮肤及皮肤附属器新生较快。(2)各组大鼠创面组织中Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达:造模后第14天,JX组的CollagenⅠ和Collagen Ⅲ蛋白表达水平与KB组无统计学差异(P>0.05),JX组接近愈合状态。造模后第3天,JX组的两种蛋白表达水平最低(P<0.05);造模后第7天,MX组、MB组和BFX组三组的Collagen Ⅰ蛋白表达水平上升,JX组表达仍最低(P<0.05);造模后第14天,JX组的Collagen Ⅰ蛋白表达水平继续保持上升,而MX组、MB组呈下降趋势(P<0.05)。造模后第14天,MX组的CollagenⅢ蛋白表达水平下降,另外三组呈现上升趋势(P<0.05)。到愈合后期,计算Collagen Ⅰ:Collagen Ⅲ的比值,MX组高于MB组...

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