摘要：目的通过动态观察大鼠慢性难愈合皮肤创面肉芽组织中p38、MK2蛋白及基因表达变化,从p38信号通路角度探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合皮肤创面的可能修复机制。方法实验一:以40只SD大鼠为研究对象,随机分为MEBO组、贝复济组、模型组、空白组,每组各10只,依据文献复制了大鼠体表皮肤溃疡模型。造模后第二天用药,观察创面愈合时间及愈合率;实验二:SD大鼠80只,随机分为4个组,每组20只,同实验一造模方法,造模后第3d,7d,14d各组随机处死5只大鼠,取相同部位皮肤溃疡创面肉芽组织,采用Western blotting和Real-Time PCR技术检测p38、MK2蛋白及其mRNA水平表达差异。结果(1)Western blotting检测结果:①在整个创面愈合过程中,纵向比较,P38、MK2总蛋白表达量在同个时相点各组差异无统计学意义(P>0.05),横向比较,在造模后第3天表达最高,其次逐渐下降;②在创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组创面组织中p-p38、p-MK2表达差异无统计学意义(P>0.05);在造模后第7天,各组间的差异开始明显,空白组、MEBO组、贝复济组表达量开始显著下降,模型组下降趋势不明显,各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05);造模后第14天,相比其他三组,模型组表达量仍处于较高水平(P<0.05),MEBO组和贝复济组差异无统计学意义(P>0.05);(2)RT-PCR检测结果:①在整个实验过程中,与空白组相比,MEBO组、贝复济组、模型组的P38 mRNA、MK2 mRNA表达量在第3天时最多,随后持续下降;②造模后第3天,各组差异无统计学意义(P>0.05);造模后第7天,MEBO组、贝复济组的表达量下降趋势明显,两组之间有明显统计学差异(P<0.05);造模后第14天,MEBO组、贝复济组的表达量持续下降,两组之间无统计学差异(P>0.05),但与模型组相比均有差异(P<0.05),模型组仍处于高表达。结论(1)MEBO能明显缩短大鼠慢性难愈合创面的愈合时间,下调p38和MK2磷酸化及其mRNA表达水平。(2)慢性难愈合创面难迟缓愈合与p-p38和p-MK2高水平表达有关,MEBO能促进慢性难愈合创面的作用机制之一可能是通过下调p38MAPK信号通路中p38和MK2磷酸化水平,阻断部分信号转导,抑制p38MAPK信号通路被过度激活的状态,从而促进大鼠慢性难愈合创面的愈合。

摘要：目的 从细胞焦亡有关因子IL-18探讨大鼠慢性难愈合创面的修复机制。方法 取健康成年雄性大鼠60只，分笼饲养于右江民族医学院SPF级动物实验室1周后随机分为：空白组、急创组、贝复济组、美宝组、模型组，每组12只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理，急创组直接进行背部创面造模，并湿敷生理盐水纱布。其余各组作慢性难愈合创面造模，分别用湿润烧伤膏（MEBO）、贝复济、生理盐水进行治疗。结果 治疗后第7天和第14天，急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率均明显高于模型组（P <0.05），美宝组与贝复济组比较差异无统计学意义（P>0.05）。电镜结果显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大，细胞破损，细胞内容物释放的细胞焦亡特征。分子生物学实验显示，造模后第3天、第7天、第14天，空白组大鼠皮肤组织中IL-18蛋白均无明显变化（P>0.05）。急创组、贝复济组、美宝组、模型组中IL-18表达水平变化明显（P <0.05），其中急创组、贝复济组、美宝组中IL-18表达水平呈先升高后降低趋势，模型组中IL-18表达水平在7d时先升高，14d后可维持在较高水平。但是急创组、贝复济组、美宝组IL-18表达水平均低于模型组，差异有统计学意义（P <0.05）。结论 MEBO可以促进慢性难愈合创面的修复，愈合过程可能涉及创面细胞焦亡，其机制可能与调控IL-18蛋白表达水平有关。

摘要：体表慢性难愈合创面(俗称溃疡)是由一系列创伤和疾病所致,这类创面具有病程长、对外观影响大以及并发症多等特点。中医外治溃疡历史悠久,近年来,我们在临床上应用MEBT/MEBO治疗多种慢性难愈合皮肤创面,取得了较好的疗效[1]。本实验进一步探讨MEBT/MEBO对皮肤溃疡局部血管内皮细胞粗面内质网结构的影响,以期可以从不同侧面揭示

摘要：研究背景和目的糖尿病创面是糖尿病常见并发症,具有病程长、易复发等特点,给患者带来极大困扰,探寻其病理机制及治疗具有重要意义。巨噬细胞和成纤维细胞是创面中的重要效应细胞。现发现ADAM-10调控细胞粘附、生长、迁移等过程。但ADAM-10在糖尿病创面中的具体机制尚不明确。本研究探究ADAM-10在巨噬细胞、成纤维细胞中的调控作用;及其在糖尿病创面愈合过程中的作用机制;结合药物治疗创面,验证研究结果。研究方法1.临床上筛选慢性难愈合创面,随机分组:湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MM)组、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(rb-b FGF)组。在治疗第3、10天,取肉芽及少量上皮组织,免疫荧光(IF)染色ADAM-10、MMP-12,观察蛋白变化特点。2.对sh ADAM-10 RAW264.7细胞进行蛋白组学分析,筛选差异蛋白,并进行生物信息学分析。3.对RAW264.7和J774a.1细胞,进行sh ADAM-10(sh)或EX ADAM-10(EX)干预,随后给予脂多糖(LPS)或MMP-12抑制剂+LPS(MMP-12inh+LPS)刺激,检测细胞活力、基因转录、蛋白表达等情况。4.对L929成纤维细胞进行EX干预,随后LPS刺激,观察细胞活力、ADAM-10以及其它蛋白表达水平。5.正常、糖尿病大鼠分别制备创面,分组为急性(Acute)组、模型(Model)组、MM组以及rb-b FGF组。观察第3、7、10、14天的创面情况;创面率;病理结构;亚细胞结构;ADAM-10转录水平;蛋白表达及定位情况。结果1.慢性难愈合创面治疗第3天,MM组内ADAM-10、MMP-12表达均低于rb-b FGF组。相较于治疗第3天,第10天ADAM-10表达增加;MMP-12降低;MM增加ADAM-10作用低于rb-b FGF;rb-b FGF降低MMP-12作用明显。2.sh RAW264.7细胞蛋白组学检测结果显示:干扰ADAM-10影响创面愈合相关的多种生物学过程,并导致MMP-12和AKT降低。3.巨噬细胞中(1)对较于CON组,1000ng/ml的LPS作用9 h～24 h增加细胞活力(P<0.05);1.5μmol/L的MMP-12inh作用12 h～36 h对细胞活力无影响(P>0.05)。LPS作用12 h显著降低ADAM-10、增加MMP-12基因转录水平(P<0.01);LPS增加MMP-12、i NOS、T...