摘要：目的:体外高糖培养成纤维细胞(fibroblasts,FB),观察美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)对高糖培养的成纤维细胞生长的影响,通过观察MEBO对高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、p62的调控作用,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn ointment/moist exposed burn therapy,MEBO/MEBT)促进高糖状态慢性溃疡创面修复的机制,为临床推广提供理论依据。方法:第一部分:首先建立糖尿病大鼠创面模型,待第11天后分离、培养创面成纤维细胞,并予免疫荧光对分离的成纤维细胞进行鉴定,再配置含有MEBO的高糖培养液,并摸索最适生长浓度,细胞经消化、传代至第3代后,随机将细胞分成两组:对照组、MEBO组,(1)采用CCK-8法检测第12小时、24小时、48小时、72小时、96小时细胞增殖情况;(2)采用细胞划痕试验来观察MEBO对成纤维细胞迁移的影响。第二部分:以上成纤维细胞经消化、传代至第3代后,取对数期(第3天)的细胞分为以下7组:空白组、模型组、MEBO低浓度组、MEBO中浓度组、MEBO高浓度组、雷帕霉素+MEBO组、雷帕霉素组(除了空白组用低糖培养基,其余组均用高糖培养基)。分别予:(1)免疫荧光检测LC3、Beclin-1、p62染色;(2)透射电镜检测细胞自噬体;(3)q RT-PCR检测LC3、Beclin-1、p62的m RNA表达;(4)蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)法检测LC3、Beclin-1、p62的蛋白表达。结果:第一部分:(1)细胞增殖试验:第48小时起MEBO组各个时间点的光密度(optical density,OD)值均高于对照组(P<0.05),细胞增殖率在第72小时最高;(2)划痕实验检测示:MEBO组促进成纤维细胞迁移能力比对照组强,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分:(1)免疫荧光检测示:与空白组相比,各组中LC3、Beclin-1的荧光染色OD值最高为MEBO高浓度组,最低为空白组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐升高,Beclin-1中的雷帕霉素+MEBO组的OD组高于雷帕霉素组;各组中p62荧光染色OD值最高为空白组,最低为MEBO高浓度组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐降低,雷帕霉素组的OD值高于雷帕霉素+MEBO组;(2)电镜检测示:与空白组相比,MEBO高浓度组、雷帕霉素组与雷帕霉素+MEBO组的自噬小体数量较多,且结构较为典型,MEBO低、中、高浓度组的自噬小体数量逐渐增多;(3)q RT-PCR显示:与空白组相比,各组中LC3的雷帕霉素+MEBO组与Beclin-1的MEBO高浓度组相对表达量最高,且MEBO组中有浓度升高表达量增大的趋势,LC3的雷帕霉素+MEBO组表达量明显高于雷帕霉素组;p62的雷帕霉素组相对表达量最低,MEBO组内比较有浓度升高表达量降低的趋势;(4)蛋白免疫印迹测定蛋白示:LC3、Beclin-1两者中的雷帕霉素+MEBO与MEBO高浓度组蛋白表达量均明显高各组,MEBO组中各因子表达随浓度升高,加入MEBO后雷帕霉素组的表达量均增高,而p62的蛋白表达情况相反。结论:MEBO可致高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1表达量增高,p62表达降低,调控细胞自噬,促进成纤维细胞增殖,这可能是MEBT/MEBO促糖尿病慢性创面修复的机制之一。

摘要：目的体外观察湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)对糖尿病大鼠慢性创面纤维细胞生长的影响,探讨MEBO促进糖尿病慢性创面愈合的机制。方法首先建立糖尿病创面大鼠模型,待第11天后分离、培养创面成纤维细胞,经消化、传代至第3代后,随机将细胞分成对照组、MEBO组(1 g/L),采用CCK-8法检测12、24、48、72、96 h细胞增殖情况,采用细胞划痕来观察MEBO对成纤维细胞迁移的影响。结果 48 h起MEBO组各个时间点的OD值均高于对照组(P<0.05或0.001),细胞增殖率在72 h达到高峰;划痕实验检测显示,MEBO组促进成纤维细胞迁移能力比对照组强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MEBO可促进糖尿病大鼠慢性创面成纤维细胞增殖与迁移能力。

摘要：目的 从细胞焦亡有关因子IL-18探讨大鼠慢性难愈合创面的修复机制。方法 取健康成年雄性大鼠60只，分笼饲养于右江民族医学院SPF级动物实验室1周后随机分为：空白组、急创组、贝复济组、美宝组、模型组，每组12只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理，急创组直接进行背部创面造模，并湿敷生理盐水纱布。其余各组作慢性难愈合创面造模，分别用湿润烧伤膏（MEBO）、贝复济、生理盐水进行治疗。结果 治疗后第7天和第14天，急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率均明显高于模型组（P <0.05），美宝组与贝复济组比较差异无统计学意义（P>0.05）。电镜结果显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大，细胞破损，细胞内容物释放的细胞焦亡特征。分子生物学实验显示，造模后第3天、第7天、第14天，空白组大鼠皮肤组织中IL-18蛋白均无明显变化（P>0.05）。急创组、贝复济组、美宝组、模型组中IL-18表达水平变化明显（P <0.05），其中急创组、贝复济组、美宝组中IL-18表达水平呈先升高后降低趋势，模型组中IL-18表达水平在7d时先升高，14d后可维持在较高水平。但是急创组、贝复济组、美宝组IL-18表达水平均低于模型组，差异有统计学意义（P <0.05）。结论 MEBO可以促进慢性难愈合创面的修复，愈合过程可能涉及创面细胞焦亡，其机制可能与调控IL-18蛋白表达水平有关。

摘要：目的回顾性分析总结湿润烧伤膏(MEBO)联合口服表疡丸治疗各种慢性体表溃疡临床疗效,为临床治疗提供依据。方法对2005年-2011年间97例体表慢性溃疡全程应用MEBO和表疡丸治疗。结果 97例病人痊愈93例,治愈率95.9%;有效3例,有效率3.1%;无效1例,无效率1.0%。结论 MEBO外用联合口服表疡丸治疗各种原因所致的体表溃疡疗效显著、方法简便,能使创面的肉芽组织生长迅速,愈合时间缩短。