摘要：第一部分:小鼠慢性创面愈合过程中巨噬细胞极化类型及影响创面愈合关键的信号通路研究目的:经由单细胞转录组测序技术（sc RNA-seq）对小鼠创面内巨噬细胞（Mac）极化类型与成纤维细胞（Fib）、上皮细胞（EC）之间的关系,还有影响创面愈合的主要信号途径展开探讨。方法:经由sc RNA-seq法探究小鼠愈合创面（Wound）与未愈合创面（Un＿wound）组织在细胞亚群通讯强度、数量与互作方面的不同表现;对2类创面组织中特异性信号途径及其配体-受体加以明确,同时开展比较分析;并探讨小鼠Wound与Un＿wound组织中Monocyte亚群类型及其几类关键亚群类型。结果:（1）小鼠2类创面（Wound、Un＿wound）的单细胞质控Counts值皆未显示异常,细胞之间表现出较好的整体关联性。Wound组织中的细胞亚群以皮肤组织干细胞（Tissue SC）、EC、软骨细胞（Chondrocytes）、B细胞（B cells）、单核巨噬细胞（Monocyte）、Fib、内皮细胞（Endo）、角化细胞（KC）与T细胞（T cells）为主;Un＿wound组织中相关的细胞亚群以皮肤组织SC、T细胞（T cells）、波纹管细胞（CMP）、Monocyte、神经元细胞（Neurons）、Endo、EC、KC、Fibroblasts、软骨细胞（Chondrocytes）与B细胞（B cells）为主;在Wound组织中,Monocyte同EC、Fib、Tissue sc细胞亚群之间皆存在紧密联系;在Un＿wound组织内,就Monocyte同EC、Fib细胞亚群的通讯强度与数目而言,相较Wound组织皆偏低;（2）对于小鼠慢性创面组织Fib与Epithelial这2类细胞亚群,皆会受到Monocyte所含EGF信号途径CXCL1-Akr1信号轴的活化效应影响,CXCL信号途径内的不同配体-受体之间的作用性,对于整个信号途径,CXCL16-Akr6以及CXCL1-Akr1配体受体所具备的价值最高。对单个配体受体在不同细胞通信中的调控功能进行分析的结果显示,Cxcl3-Ark1配体受体于Mac与血管内皮细胞（VEC）的信号关联性更为显著,且更为关键;（3）Monocyte亚群由0、1、2、3、4、5这五类构成,前两类在Wound组织中占据主要位置,CD68与CD162特异性表达亚群存在比较明显的优势,同时CD163标记的Mono...

摘要：从1990年6月至1993年5月对14例的MEBT和14例N－MEBT治疗的烧伤病人作了烧伤创面的临床及病理学观察。放大100倍光镜下可见MEBT组肉芽组织中胶原纤维聚合成束，平行排列，具有一定的规律性；成纤维细胞计数明显少于N－MEBT组，P＜0.05；毛细血管计数略多于N－MEBT组，但无统计学意义。提示MEBO对成纤维细胞的形成、分裂、增殖及胶原纤维的分泌与排列有调节作用。肉芽创面pH值、植皮成活率的检测及创面培养结果显示。MEBT疗效优于N－MEBT。

摘要：目的 分析美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment, MEBO)对高糖培养的成纤维细胞外泌体分泌的影响，探究MEBO促进糖尿病慢性创面愈合的机制。方法 首先将Wistar大鼠表皮于无菌环境中分离。培养分离后的成纤维细胞，等到第四代，根据课题组前期研究将细胞分成四组，分别为对照组(高糖培养基)、MEBO低浓度组(20 g/L)、MEBO中浓度组(40 g/L)、MEBO高浓度组(80 g/L)。药物干预3天后，收集细胞上清用超滤管浓缩后，用SBI试剂盒提取外泌体，采用Western blotting检测外泌体标记蛋白CD81、TSG101。结果 外泌体标记蛋白CD81、TSG101在MEBO组和对照组中均有表达。MEBO各浓度组外泌体分泌量均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),MEBO中浓度组(40 g/L)分泌外泌体最多，与MEBO低浓度组(20 g/L)、MEBO高浓度组(80 g/L)相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 MEBO可以促进高糖培养的成纤维细胞分泌外泌体。

摘要：目的:体外高糖培养成纤维细胞(fibroblasts,FB),观察美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)对高糖培养的成纤维细胞生长的影响,通过观察MEBO对高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、p62的调控作用,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn ointment/moist exposed burn therapy,MEBO/MEBT)促进高糖状态慢性溃疡创面修复的机制,为临床推广提供理论依据。方法:第一部分:首先建立糖尿病大鼠创面模型,待第11天后分离、培养创面成纤维细胞,并予免疫荧光对分离的成纤维细胞进行鉴定,再配置含有MEBO的高糖培养液,并摸索最适生长浓度,细胞经消化、传代至第3代后,随机将细胞分成两组:对照组、MEBO组,(1)采用CCK-8法检测第12小时、24小时、48小时、72小时、96小时细胞增殖情况;(2)采用细胞划痕试验来观察MEBO对成纤维细胞迁移的影响。第二部分:以上成纤维细胞经消化、传代至第3代后,取对数期(第3天)的细胞分为以下7组:空白组、模型组、MEBO低浓度组、MEBO中浓度组、MEBO高浓度组、雷帕霉素+MEBO组、雷帕霉素组(除了空白组用低糖培养基,其余组均用高糖培养基)。分别予:(1)免疫荧光检测LC3、Beclin-1、p62染色;(2)透射电镜检测细胞自噬体;(3)q RT-PCR检测LC3、Beclin-1、p62的m RNA表达;(4)蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)法检测LC3、Beclin-1、p62的蛋白表达。结果:第一部分:(1)细胞增殖试验:第48小时起MEBO组各个时间点的光密度(optical density,OD)值均高于对照组(P<0.05),细胞增殖率在第72小时最高;(2)划痕实验检测示:MEBO组促进成纤维细胞迁移能力比对照组强,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分:(1)免疫荧光检测示:与空白组相比,各组中LC3、Beclin-1的荧光染色OD值最高为MEBO高浓度组,最低为空白组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐升高,Beclin-1中的雷帕霉素+MEBO组的OD组高于雷帕霉素组;各组中p62荧光染色OD值最高为空白组,最低为MEBO高浓度组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐降低,雷帕霉素组的OD值高于雷帕霉素+MEBO组;(2)电镜检测示:与空白组相比,MEBO高浓度组、雷帕霉素组与雷帕霉素+MEBO组的自噬小体数量较多,且结构较为典型,MEBO低、中、高浓度组的自噬小体数量逐渐增多;(3)q RT-PCR显示:与空白组相比,各组中LC3的雷帕霉素+MEBO组与Beclin-1的MEBO高浓度组相对表达量最高,且MEBO组中有浓度升高表达量增大的趋势,LC3的雷帕霉素+MEBO组表达量明显高于雷帕霉素组;p62的雷帕霉素组相对表达量最低,MEBO组内比较有浓度升高表达量降低的趋势;(4)蛋白免疫印迹测定蛋白示:LC3、Beclin-1两者中的雷帕霉素+MEBO与MEBO高浓度组蛋白表达量均明显高各组,MEBO组中各因子表达随浓度升高,加入MEBO后雷帕霉素组的表达量均增高,而p62的蛋白表达情况相反。结论:MEBO可致高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1表达量增高,p62表达降低,调控细胞自噬,促进成纤维细胞增殖,这可能是MEBT/MEBO促糖尿病慢性创面修复的机制之一。