摘要：目的 探讨糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化的病理变化及湿润暴露疗法/湿润烧伤膏（MEBT/MEBO）对其干预的机制。方法 80只Wistar雄性大鼠，随机取18只作为急性创面组，其余大鼠建立糖尿病创面模型。将糖尿病创面造模成功的54只大鼠随机分为糖尿病创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组，每组18只。各组大鼠换药前均以呋喃西林液清洁创面，急性创面组和糖尿病创面组均外敷2层生理盐水纱布，MEBT/MEBO组外敷2层MEBO纱条（0.2 g/cm2）,贝复新组外敷2层贝复新浸透纱布（60 IU/cm2）,均每日换药2次。分别于造模后第3,7,14天，统计各组创面愈合率，HE染色和Masson染色观察创面病理变化，免疫荧光观察创面组织中层黏连蛋白3（LAMA3）蛋白表达情况，RT-PCR法检测创面组织中LAMA3、整合素α3（ITGA3）、E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）mRNA表达量。结果 造模后第7,14天，糖尿病创面组创面愈合率均明显低于其他组（P均<0.05）,MEBT/MEBO组和贝复新组比较差异无统计学意义（P均>0.05）。HE染色和Masson染色显示：造模后第3天，各组创面均处于炎症浸润状态；造模后第7天，糖尿病创面组创面处于炎症浸润状态，胶原纤维稀疏，边缘表皮增厚且无明显迁移，其他组炎症浸润均减轻，表皮增厚并明显迁移；造模后第14天，糖尿病创面组创面仍有炎症浸润，表皮再上皮化不全，其他组创面表皮覆盖且再上皮化明显。造模后第3,7,14天，糖尿病创面组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3 mRNA表达量均明显低于其他组（P均<0.05）,ZEB1 mRNA表达量均明显高于其他组（P均<0.05）,MEBT/MEBO组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3、ZEB1mRNA表达量与贝复新组比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化延迟，而MEBT/MEBO能促进创面再上皮化修复，其机制可能与上调再上皮化区LAMA3、ITGA3表达和下调ZEB1表达有关。

摘要：目的:通过对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,Ca N)以及白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)的表达水平进行研究,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子-钙调神经磷酸酶信号通路表达的影响,以期为MEBT/MEBO在糖尿病创面治疗的相关基础研究与临床应用上提供更多有价值的参考数据。方法:(1)分笼饲养SPF级Wistar雄性大鼠48只,适应性喂养一周后根据随机数字表法将大鼠随机分为4组,依次为对照组、模型组、美宝组(MEBT/MEBO治疗组)、贝复新组,每组12只大鼠。各组大鼠均禁食不禁水12小时,将其中模型组、美宝组和贝复新组造糖尿病大鼠模型,腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液稀释的等剂量链脲佐菌素溶液,而对照组仅注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;注射3天后从大鼠尾端采血检测其空腹血糖,以空腹血糖大于16.7mmol/L为标准制成糖尿病大鼠模型,随后将四组大鼠按全层皮肤缺损法制备创面,建成糖尿病大鼠创面模型(模型组、美宝组、贝复新组)和大鼠急性创面模型(对照组)。(2)各组模型建立完成后先用呋喃西林液清洁创面,将对照组大鼠和模型组大鼠创面外敷两层生理盐水纱布,美宝组大鼠创面外敷两层美宝纱布,贝复新组大鼠创面外敷两层贝复新纱布,随后所有组别大鼠均加盖两层消毒干纱布并以胶布固定,每日进行更换鼠笼及垫料1次、换药操作2次以保持环境与创面清洁。(3)于第3、7、14天共3个时相点各组分别随机取4只大鼠断颈处死并取材,用直尺测量创面直径并作为参照物拍照记录所有大鼠的创面愈合情况,收集所有时相点的照片后用Image J软件测算所有大鼠不同时相的创面大小,以时相为分组进行创面愈合率计算。取距离创缘0.5cm的整个创面及周围组织,取出的组织用组织剪将其剪为两半,其中一半组织用称量纸包裹并置于盛有4%多聚甲醛离心管中,24小时后转移至70%无水乙醇中,再制成组织石蜡蜡块以备后续HE染色实验和免疫荧光实验使用。另一半剪为合适大小的组织块放入冻存管中,随即迅速放置入装有液氮的容器内并转移至-80℃冰箱冻存。(4)HE染色观察创面肉芽组织生长形态及病...

摘要：目的:建立糖尿病大鼠创面动物模型,以MMPs/TIMP系统为切入点,探讨皮肤再生医疗技术(湿润暴露疗法/湿润烧伤膏;Moist exposed burn therapy,MEBT/Moist exposed burn ointment,MEBO)促进糖尿病创面愈合的作用机制,为MEBT/MEBO干预糖尿病创面修复提供理论依据,进一步指导临床。方法:110只SPF级雄性SD大鼠,随机选取86只大鼠制备糖尿病模型,其余24只大鼠正常喂养。糖尿病模型采用高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备,高脂高糖饲料喂养4周后,禁食12 h,腹腔注射STZ(40mg/kg,1ml/kg),48h后再一次腹腔注射STZ(40mg/kg,1ml/kg)。糖尿病造模后随机血糖≥16.7 mmol/L,且体重明显下降则视为糖尿病大鼠模型诱导成功。糖尿病模型诱导成功后进行大鼠创面模型的制备,随机选取造模成功的糖尿病大鼠(72只)和正常大鼠(24只)制备创面模型,在大鼠背部印出18mm大小圆形标记,剪除其全层皮肤,深至筋膜,制备创面模型。创面制备结束后,将糖尿病大鼠创面模型分成模型组、MEBO组、贝复济组,每组各24只;正常大鼠创面模型为空白组,24只。各组大鼠每日换药,于干预治疗后第4d、6d和12d分别选取8只大鼠,观察创面情况,并计算创面愈合速率,麻醉后取相同位点的创面组织,用于开展病理检测和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Bolt检测。结果:(1)大鼠体重、血糖水平情况:糖尿病造模前,正常组和糖尿病模型组体重、血糖比较差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病造模后,糖尿病模型组平均血糖大于16.7 mmol/L,血糖水平显著高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01),且体重显著低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)创面愈合率:在第4d、6d和12d,空白组>MEBO组和贝复济组>模型组。第4d、6d和12d,空白组创面愈合率均高于模型组、MEBO组和贝复济组,差异均有统计学意义(P<0.01);MEBO组和贝复济组创面愈合率均高于模型组,差异均有具有统计学意义(P<0.01)。(3)创面病理显示:在第4d和第6d,模型组胶原纤维含量较少,炎性细胞浸润较多;空白组、MEBO组胶原纤维含量较多且炎性细胞浸润较少。第12d,空白组胶原纤维丰富致密、排列规整;...

摘要：目的 观察皮肤再生医疗技术[湿润暴露疗法(moist exposed burn therapy, MEBT)/湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment, MEBO)]对糖尿病大鼠创面骨形成蛋白(BMP)/Smad信号通路中Smad1表达的影响，探讨MEBT/MEBO促进糖尿病创面愈合的机制。方法 将90只Wistar大鼠随机分成对照组、模型组和MEBO组三个组，每组30只，对照组建立普通创面模型，模型组和MEBO组建立糖尿病创面模型，模型组和对照组采用生理盐水纱布湿敷换药，MEBO组采用MEBO干预创面，分别于治疗第1天、第5天、第11天，对比创面的愈合情况，取创面组织采用qRT-PCR技术检测Smad1的表达水平，免疫组化法检测大鼠创面中Smad1蛋白表达水平。结果 (1)治疗第5天、第11天，三组大鼠创面愈合率对比，MEBO组>对照组>模型组(P<0.05);(2)治疗第1天、第5天、第11天，模型组Smad1 mRNA表达均低于对照组，MEBO组Smad1 mRNA表达高于对照组(P<0.05),三组的Smad1 mRNA表达在治疗第5天降低，治疗第11天达到高峰；(3)免疫组化显示Smad1蛋白表达在第5天达到高峰。结论 MEBT/MEBO可促进糖尿病慢性创面愈合，其机制可能是通过调控Smad1表达和BMP/Smad信号通路。