摘要：目的:我国有超过1.4亿糖尿病人,糖尿病药物研发在我国拥有巨大的市场需求,同时用于糖尿病药物研发的实验动物的需求也与日俱增。我们建立一种使用无脊椎动物家蚕(Bombyx mori)来构建糖尿病创面模型,探讨家蚕糖尿病创面愈合中PI3K-Akt信号通路的调控作用,为研究家蚕糖尿病创面模型提供一定的理论基础,为筛选治疗糖尿病创面的药物或疗法提供低成本的动物模型。方法:(1)不同浓度的葡萄糖混合桑叶饲养家蚕36 h后,每间隔30 min测量家蚕餐后血淋巴葡萄糖水平,观察家蚕血淋巴葡萄糖耐量情况。(2)不同浓度的葡萄糖混合桑叶饲养家蚕,每间隔12 h测量家蚕餐后血淋巴葡萄糖水平,称量家蚕的体重,观察建模后84 h家蚕体型变化,120 h结茧情况,评估不同浓度葡萄糖对家蚕生长的影响。(3)MEBT/MEBO作为阳性治疗对照组,收集家蚕创面组织进行苏木精-伊红染色和改良马松染色,观察家蚕创面组织的生长情况。(4)通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测家蚕创面组织中相关因子的转录及蛋白表达水平。结果:(1)家蚕血淋巴中葡萄糖浓度随着进食总体呈现先升高后降低,空腹时高糖各组血淋巴葡萄糖浓度高于空白组,高糖各组血淋巴葡萄糖达到峰值后快速下降,峰值2 h后血淋巴葡萄糖水平仍高于空腹值,表现出不同程度的糖耐量受损。(2)高糖各组家蚕与空白组的家蚕相比,体重增长缓慢,葡萄糖浓度越高,对生长影响越明显。(3)组织病理学结果显示空白组表皮、皮细胞和基膜层细胞无明显变化;对照组表皮增厚,皮细胞增多和基膜层完整,胶原纤维大量增生且排列致密;模型组表皮薄,基膜层不明显,皮细胞和胶原纤维增生,但是排列紊乱。(4)各组家蚕创面组织PI3K、Akt、m TOR的m RNA转录水平和PI3K、Akt的蛋白表达量均先升高后降低;同时间段空白组表达量最低;12 h时MEBO组m RNA转录水平和蛋白表达量高,对照组高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);36 h时MEBO组PI3K、Akt的m RNA转录水平最高,对照组m TOR的m RNA转录水平和PI3K、Akt的蛋白表达量最高,差异具有统计学意义(P<0.05);84 h时模型组m RNA转录水平和蛋白表达量高,对照组高于MEBO组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)用高浓度(35%和40%)葡萄糖混合桑叶喂养的家蚕更早表现出血淋巴葡萄糖耐量受损和生长受到抑制现象,能表现出稳...

摘要：烧伤创疡再生医疗技术(MEBT/MEBO)创立之初是指湿润烧伤膏(MEBO)通过在创面的暴露应用[即烧伤湿润暴露疗法(MEBT)]实现创面组织再生修复的一项技术,近年来随着该技术的不断发展,其在非热力性皮肤损伤中也得到了广泛应用,且同样取得了较为显著的临床疗效。本研究主要针对MEBT/MEBO在非热力性皮肤损伤中的应用现状及作用机制进行综述,旨在为MEBT/MEBO的进一步临床应用提供参考。

摘要：湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)是一种在湿润的、生理环境治疗的烧伤技术,也是治疗烧伤局部组织对全身各系统影响制定全身治疗方案的烧伤系统医疗技术。不仅作用于局部,更是达到全身治疗作用的目前世界上唯一成熟的烧伤治疗技术和药品。

摘要：目的:(1)通过单细胞测序(single-cell RNA-sequencing,sc RNA-seq)技术分析糖尿病足创面愈合组织(healing diabetic foot ulcer,Healing DFU)和非愈合组织(DFU)中CC类趋化因子配体2(c-c motif ligand 2,CCL2)、非典型趋化因子受体1(atypical chemokine receptors 1,ACKR1)与组织干细胞、内皮细胞的关系,从而进一步探究其影响创面愈合的机制;(2)探讨MEBO湿润烧伤膏在小鼠DFU创面CCL2-ACKR1信号轴的活化作用以及通过影响内皮细胞的活性促进创面愈合的分子作用机制。方法:(1)通过单细胞测序技术分析Healing DFU、DFU创面组织中组织干细胞、内皮细胞基因本体(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析结果;细胞亚群通讯数量、强度及相互作用差异性;进一步确定两种创面组织内特异性信号通路及其配体-受体对比分析;(2)我们将48只C57BL/6Jnifdc小鼠作为研究对象,随机将其分为4组,分别为急性创面组(Acute组,n=12),模型组(Model组,n=12),贝复新组(GF组,n=12),湿润烧伤膏组(MEBO组,n=12)。除外急性创面组,其余3组小鼠连续5天腹腔内注射链脲佐菌素(50mg/kg),连续饲养8周后取尾部静脉血确定模型建立成功性。待糖尿病模型建立成功后,在小鼠背部全层皮肤处制备缺损创伤模型,Acute组和Model组小鼠创面滴加生理盐水(20μL),GF组小鼠创面外用贝复新(20μL),MEBO组外用湿润烧伤膏(20μL),直到药物充分吸收。分别于DFU模型建立后3d、7d、14d取小鼠创面愈合组织。将各时点切取的组织一部分装入冻存管置入液氮中,并及时转移至-80℃冰箱,另一部分冰冻包埋剂处理,-20℃冰箱保存。确定各组小鼠创面愈合比率;观察各组小鼠3d、7d、14d创面愈合情况;免疫荧光化学染色分析14d后各创面组织内CCL2、ACKR1的表达;蛋白印迹法(Western blot,WB)分析各组小鼠3d、7d、14d创面CCL2、ACKR1的表达水平。结果:(1)创面相关的差异基因表达分析显示,愈合创面与未愈合创面的组织干细胞共有1948个差异基因,其中1198个基因被上调,685基因被下调;组织干细胞GO富集功能分析结果表明,其与创面愈合密切相关;组织干细胞中CCL2-ACKR1信号通路活性对内皮细胞亚群生物活性产生影响,最终促进DFU创面的愈合;(2)随着时间的延长,各组小鼠的创面组织体现出逐渐愈合的趋势,急性创面组小鼠愈合情况好于DFU模型组;贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预可以加速DFU小鼠创面的愈合情况,其中MBEO组体现出最好的疗效;(3)DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的荧光强度低于急性创面组;贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预均可以上调DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的强度,MEBO组创面组织内CCL2、ACKR1的荧光强度最高;(4)Acute组随时间变化其创面组织内的CCL2、ACKR1蛋白表达量呈现出持续升高的趋势,表达量明显高于Model组,贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预均可以上调DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的强度。结论:(1)DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1表达失调,MEBO的干预可以逆转DFU组小鼠创面组织内CCL2、ACKR1失调现象;(2)MEBO通过活化组织干细胞激活CCL2-ACKR1信号轴,促进创面组织血管内皮细胞的生成,最终促进创面愈合。