摘要:目的 探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)是否通过调控糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞,影响α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL-1)的表达水平,从而促进创面愈合。方法 90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为5组,空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组,每组18只,适应性喂养7 d后构建糖尿病模型,成模后统一制备创面。创面形成后第0天、第3天、第7天、第14天拍照记录创面愈合情况,每组随机取6只大鼠创面组织,进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化,免疫荧光观察创面组织α-SMA、COL-1的分布及表达情况,Western Blot检测创面组织α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。结果 (1)同一时间点组织学观察各组病理形态改善均优于模型组,治疗后期创面愈合率MEBO组、贝复新组优于模型组。(2)WB:与对照组比较,创面发生第3天、第7天、第14天过程中,模型组创面组织α-SMA、COL-1蛋白表达均明显下降(P<0.05);与模型组比较,创面第7天、第14天,MEBO组、贝复新组创面组织α-SMA、COL-1表达显著升高(P<0.05)。(3)免疫荧光:与对照组比较,第3天、第7天、第14天的模型组α-SMA蛋白表达均较低,其中第7天时具有显著性差异(P<0.05);模型组COL-1蛋白表达均显著偏低(P<0.05)。与模型组比较,第7天、第14天MEBO组、贝复新组α-SMA表达均较高(P<0.05),两用药组COL-1表达也较高,而贝复新组与模型组的比较差异有统计学意义(P<0.05),MEBO组COL-1表达介于模型组与对照组之间,但与模型组的比较差异不明显(P>0.05)。结论 MEBT/MEBO可能通过提高α-SMA和COL-1的蛋白表达水平,促进肌成纤维细胞转化及细胞外基质的沉积,从而加速糖尿病难愈合创面修复。
摘要:目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(Moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病难愈合创面的作用,并以α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平反映糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞转化程度,影响细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原蛋白(Collagen I,COL-1)的生成为切入点,通过动物及细胞实验探讨MEBT/MEBO促进糖尿病难愈合创面的具体机制,为MEBT/MEBO的临床应用及推广提供理论依据。方法:(1)90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为五组,空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组,每组18只,适应性喂养7天后应用STZ腹腔注射法诱导糖尿病大鼠模型,成模后再以全层皮肤缺损法统一制备创面。观察创面愈合情况,拍照记录创面形成后第0、3、7、14天的大鼠创面,并随机切取每组6只大鼠创面肉芽组织,进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化,免疫荧光观察α-SMA、COL-1的分布及表达情况,Western blot检测α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。(2)探讨MEBT/MEBO对大鼠真皮成纤维细胞(rat dermal fibroblasts,RDFs)的作用。首先用双酶法(中性蛋白酶+胰酶)分离提取Wistar大鼠幼崽皮肤真皮成纤维细胞,以HE染色观察细胞形态,免疫荧光法鉴定其波形蛋白(Vimentin)表达情况。以CCK8法摸索MEBO对RDFs的合适剂量,细胞实验分为低糖组、高糖组、溶剂组、低剂量MEBO组、高剂量MEBO组,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,实时定量PCR法检测α-SMA、COL-1的基因转录水平,Western blot法检测RDFs的α-SMA、COL-1蛋白表达水平。结果:(1)大鼠经STZ法诱导糖尿病模型后,出现典型“三多一少”症状,血糖明显升高达到糖尿病标准。与其他组相比,模型组大鼠出现创面愈合延迟(P<0.05),创面肉芽组织持续炎症浸润、血管新生不足、成纤维细胞数量低下及细胞外基质沉积减少等特征;治疗中后期创面愈合率:对照组(29)MEBO组=贝复新组(29)模型组。(2)WB:与对照组比较,创面发生第7、14天过程中,模型组创面组织α-...
摘要:目的探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)治疗面颈部烧伤的疗效。方法随机抽取2010~2013年间36例面颈部烧伤患者分两组进行对比治疗,其中26例采用MEBT/MEBO治疗,10例磺胺嘧啶银(SD-Ag)暴露治疗,观察两组患者的创面治疗效果。结果 MEBT/MEBO治疗的面颈部烧伤创面愈合快、色素轻、不易形成瘢痕或瘢痕增生轻微。结论 MEBT/MEBO治疗面颈部烧伤其疗效优于SD-Ag疗法,方法简单,疗效可靠,便于在基层推广应用。
摘要:目的 探讨糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化的病理变化及湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)对其干预的机制。方法 80只Wistar雄性大鼠,随机取18只作为急性创面组,其余大鼠建立糖尿病创面模型。将糖尿病创面造模成功的54只大鼠随机分为糖尿病创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组,每组18只。各组大鼠换药前均以呋喃西林液清洁创面,急性创面组和糖尿病创面组均外敷2层生理盐水纱布,MEBT/MEBO组外敷2层MEBO纱条(0.2 g/cm2),贝复新组外敷2层贝复新浸透纱布(60 IU/cm2),均每日换药2次。分别于造模后第3,7,14天,统计各组创面愈合率,HE染色和Masson染色观察创面病理变化,免疫荧光观察创面组织中层黏连蛋白3(LAMA3)蛋白表达情况,RT-PCR法检测创面组织中LAMA3、整合素α3(ITGA3)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)mRNA表达量。结果 造模后第7,14天,糖尿病创面组创面愈合率均明显低于其他组(P均<0.05),MEBT/MEBO组和贝复新组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。HE染色和Masson染色显示:造模后第3天,各组创面均处于炎症浸润状态;造模后第7天,糖尿病创面组创面处于炎症浸润状态,胶原纤维稀疏,边缘表皮增厚且无明显迁移,其他组炎症浸润均减轻,表皮增厚并明显迁移;造模后第14天,糖尿病创面组创面仍有炎症浸润,表皮再上皮化不全,其他组创面表皮覆盖且再上皮化明显。造模后第3,7,14天,糖尿病创面组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3 mRNA表达量均明显低于其他组(P均<0.05),ZEB1 mRNA表达量均明显高于其他组(P均<0.05),MEBT/MEBO组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3、ZEB1mRNA表达量与贝复新组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化延迟,而MEBT/MEBO能促进创面再上皮化修复,其机制可能与上调再上皮化区LAMA3、ITGA3表达和下调ZEB1表达有关。