摘要：目的探讨烧伤湿性医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面肉芽组织的影响及其可能的作用机制。方法 SPF级SD雄性大鼠45只,简单随机抽样方法分为MEBO组、贝复济组、模型组,每组15只。用药后第8d观察创面愈合情况:①肉芽组织生长情况;②光镜下创面组织变化情况;③电镜下观察创面组织变化情况。结果 MEBO组创面愈合时间为20.13 d±1.41 d,短于贝复济组的22.07 d±1.62 d,明显短于模型组的30.40 d±1.18 d,均有统计学意义(P<0.01);光学显微镜下观察:与贝复济组及模型组比较,MEBO组创面毛细血管计数较多,MEBO组、贝复济组、模型组毛细血管分别为(12.13±2.26)条、(9.87±1.99)条、(7.60±1.50)条,MEBO组与贝复济组及模型组比较有统计学意义(P<0.01);透射电镜结果示:MEBO组治疗的创面成纤维细胞、成纤维细胞线粒体结构情况明显好于贝复济组及模型组。结论 MEBT/MEBO能明显促进大鼠慢性难愈合创面成纤维细胞的增殖,促进新生毛细血管的增殖,调节创面修复基质的形成等作用而发挥MEBO的综合调控机制,最终促进肉芽组织形成,加速创面愈合。

摘要：目的:探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响,完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制,为临床应用及推广提供更多的理论依据。方法:(1)取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组(Blank)、急创组(Acute)、美宝组(MEBO)、贝复济组(rb-b FGF)、模型组(Model),每组18只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理,急创组直接进行背部皮肤剪除,建立急性损伤模型,并湿敷生理盐水纱布,其余三组大鼠制备慢性难愈合创面模型,分别用湿润烧伤膏、贝复济,生理盐水湿敷创面治疗。造模后第3、7、14天分别切取创面肉芽组织,部分置于甲醛液及电镜液中固定,待病理HE染色,免疫荧光及电镜实验时取用。其余创面标本置于-80℃冰箱,用于Western Blotting和Real-Time PCR检测,对比各组大鼠创面IL-18及Caspase-1蛋白表达情况及mRNA转录水平。结果:(1)创面愈合情况:治疗后第3天,各组大鼠创面愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第7天和第14天,急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率和模型组比较均明显升高(P<0.05),美宝组与贝复济组比较无差异(P>0.05)。急创组在第14天愈合效果最好。(2)HE染色情况:急创组、贝复济组、美宝组的组织形态学结构均优于模型组。(3)电镜观察情况:电镜观察显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大、细胞破损、胞液稀疏、着色较浅、胞膜不连续,膜孔形成的细胞焦亡特征。(4)免疫荧光染色结果:Caspase-1在造模后第3天的急性组、贝复济组、美宝组,模型组中均有不同程度表达,其中模型组表达明显;造模后第7天和第14天,其余各组表达均明显减少,而模型组相对其他组仍然明显表达。(5)Western Blotting和Real-Time PCR检测情况:(1)治疗后第3、7、14天,空白组各时间点IL-18蛋白表达水平无明显变化,P>0.05,差异无统计学意义;急创组、贝复济组、美宝组、模型组:大鼠创面组织内IL-18蛋白表达水平先升高后降低;各组对比情况:第3天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异P<0.05,急创组、贝复济组、美宝组两两比较无统计学差异。第7天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异...

摘要：目的 :从组织学角度验证MEBT/MEBO治疗浅Ⅲ度烧伤创面 ,能够达到生理性再生修复 ,及其不同时期组织学变化。方法 :分别于MEBT/MEBO治疗后 1天、 3天、 7天、 2 0天、及 30～ 4 0天创面愈合后取标本 ,常规光镜、电镜制样 ,进行光镜、透射电镜对创面各期内进行组织形态观察。结果 :浅Ⅲ度烧伤创面经MEBT/MEBO正规治疗 ,历经早期真皮组织变性坏死 ,中后期棘细胞、纤维母细胞、毛细血管增生等阶段 ,最后再生修复的上皮组织形态可以恢复正常。结论 :MEBT/MEBO治疗浅Ⅲ度烧伤创面再生修复属完全性生理再生 ,其愈合后创面组织形态可以恢复正常。

摘要：目的:体外高糖培养成纤维细胞(fibroblasts,FB),观察美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)对高糖培养的成纤维细胞生长的影响,通过观察MEBO对高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、p62的调控作用,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn ointment/moist exposed burn therapy,MEBO/MEBT)促进高糖状态慢性溃疡创面修复的机制,为临床推广提供理论依据。方法:第一部分:首先建立糖尿病大鼠创面模型,待第11天后分离、培养创面成纤维细胞,并予免疫荧光对分离的成纤维细胞进行鉴定,再配置含有MEBO的高糖培养液,并摸索最适生长浓度,细胞经消化、传代至第3代后,随机将细胞分成两组:对照组、MEBO组,(1)采用CCK-8法检测第12小时、24小时、48小时、72小时、96小时细胞增殖情况;(2)采用细胞划痕试验来观察MEBO对成纤维细胞迁移的影响。第二部分:以上成纤维细胞经消化、传代至第3代后,取对数期(第3天)的细胞分为以下7组:空白组、模型组、MEBO低浓度组、MEBO中浓度组、MEBO高浓度组、雷帕霉素+MEBO组、雷帕霉素组(除了空白组用低糖培养基,其余组均用高糖培养基)。分别予:(1)免疫荧光检测LC3、Beclin-1、p62染色;(2)透射电镜检测细胞自噬体;(3)q RT-PCR检测LC3、Beclin-1、p62的m RNA表达;(4)蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)法检测LC3、Beclin-1、p62的蛋白表达。结果:第一部分:(1)细胞增殖试验:第48小时起MEBO组各个时间点的光密度(optical density,OD)值均高于对照组(P<0.05),细胞增殖率在第72小时最高;(2)划痕实验检测示:MEBO组促进成纤维细胞迁移能力比对照组强,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分:(1)免疫荧光检测示:与空白组相比,各组中LC3、Beclin-1的荧光染色OD值最高为MEBO高浓度组,最低为空白组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐升高,Beclin-1中的雷帕霉素+MEBO组的OD组高于雷帕霉素组;各组中p62荧光染色OD值最高为空白组,最低为MEBO高浓度组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐降低,雷帕霉素组的OD值高于雷帕霉素+MEBO组;(2)电镜检测示:与空白组相比,MEBO高浓度组、雷帕霉素组与雷帕霉素+MEBO组的自噬小体数量较多,且结构较为典型,MEBO低、中、高浓度组的自噬小体数量逐渐增多;(3)q RT-PCR显示:与空白组相比,各组中LC3的雷帕霉素+MEBO组与Beclin-1的MEBO高浓度组相对表达量最高,且MEBO组中有浓度升高表达量增大的趋势,LC3的雷帕霉素+MEBO组表达量明显高于雷帕霉素组;p62的雷帕霉素组相对表达量最低,MEBO组内比较有浓度升高表达量降低的趋势;(4)蛋白免疫印迹测定蛋白示:LC3、Beclin-1两者中的雷帕霉素+MEBO与MEBO高浓度组蛋白表达量均明显高各组,MEBO组中各因子表达随浓度升高,加入MEBO后雷帕霉素组的表达量均增高,而p62的蛋白表达情况相反。结论:MEBO可致高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1表达量增高,p62表达降低,调控细胞自噬,促进成纤维细胞增殖,这可能是MEBT/MEBO促糖尿病慢性创面修复的机制之一。