摘要：目的:1.观察皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进体表慢性难愈合创面(简称“慢创”)愈合的药效作用。2.观察MEBT/MEBO对体表慢性难愈合创面组织的苏木精-伊红染色(HE)染色病理形态学的改善作用;并观察全层皮肤愈合过程中,其真皮再生模式及与表皮层、基底膜层再生的关系。3.探究MEBT/MEBO干预PI3K/Akt/mTOR信号通路调控创面蛋白质合成促进体表慢性难愈合创面愈合的修复机制。4.探讨MEBT/MEBO作用IGF-1/PI3K/Akt信号通路调控创面血管生成促进慢创修复的机制。方法:1.将160只雄性SD大鼠随机分为空白组24只、对照组(急性全层皮肤缺损组)34只和体表慢性难愈合创面组102只,慢性难愈合创面组(全层皮肤缺损+注射醋酸氢化可的松)造模成功后再随机分为模型组34只、贝复新组(阳性对照组)34只和MEBT/MEBO组34只。并同时于第3、7、14 d取创面组织。各组分别干预治疗后,观察创面愈合情况,记录统计创面愈合时间;于干预治疗后第3 d、7 d和14 d固定焦距拍照创面计算愈合率。HE染色法观察病理学改变、PAS染色法观察创面基底膜层的生长情况。提取第3、7、14 d创面组织总RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot法检测PI3K、Akt(S473)、mTOR(Ser2448)、p70 S6K(Thr389)、4E BP1(Thr37/46)的mRNA和蛋白转录及表达水平。2.145只雄性SD大鼠,随机分为空白组21只、对照组31只和慢创组93只,慢创组造模成功后再随机分为模型组、贝复新组和MEBT/MEBO组各31只,于干预治疗后第3 d、7 d和14 d取创面组织。碱性水浸泡法扫描电子显微镜技术(SEM)观察创面组织愈合过程中真皮全层再生过程。提取第3 d、7 d和14 d创面组织,分离上清液,ELISA法检测IGF-1含量;提取创面组织总RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot法检测PI3K、Akt(S473)、eNOS(S1177)、VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平。结果:1.与模型组比较,MEBT/MEBO组显著缩短大鼠创面愈合时间和提高创面愈合率(P<0.01)。2.造模及干预治疗14 d后,MEBT/...

摘要：目的:本研究以糖尿病大鼠创面模型、临床糖尿病足创面为研究对象,观察皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病创面愈合情况的影响,并通过创面组织中BMP-2、BMP-7、BMPR-IA的检测,探讨其对糖尿病创面愈合作用的机理,为临床推广应用MEBO治疗糖尿病创面提供可靠的理论依据。方法:(1)糖尿病大鼠创面模型:按照随机数表法将125只Wistar雄性大鼠分为空白组(n=25)、对照组(n=25)、模型组(n=25)重组牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)组(n=25)以及湿润烧伤膏(MEBO)组(n=25)。空白组大鼠备皮,不建立创面模型;对照组大鼠构建常规创面模型;模型组、贝复济组及MEBO组构建糖尿病模型。生理盐水外敷对照组及模型组创面,MEBO组和贝复济组创面分别予MEBO、贝复济外敷。各组于治疗后的第1、5、11、18、25天观察:(1)观察不同时点大鼠溃疡创面愈合情况,比较愈合率;(2)创面组织病理HE染色观察各组纤维细胞、创面组织炎症、肉芽生长、上皮化等情况。(3)免疫组化法观察溃疡创面BMP-2、BMP-7动态变化的影响。(4)Western Blot法测定BMP-2、BMP-7、BMPR-IA及BMPR-IA磷酸化蛋白表达。(5)q RT-PCR法测定BMP-2、BMP-7、BMPR-IA的表达。(2)临床糖尿病足创面:收集30例2型糖尿病足(T2DMF)患者治疗前和MEBO治疗两周的创面组织。资料收集主要包括以下两个部分:(1)跟踪测量、拍照记录每位患者创面愈合情况;(2)提取创面组织用福尔马林固定液收集并制成蜡块。蜡块切片行HE染色观察病理形态;免疫组化观察BMP-2、BMP-7的表达;免疫荧光定量测量治疗前后BMP-2、BMP-7的OD值。结果:(1)糖尿病大鼠创面模型:(1)创面愈合情况及愈合率:第5天四组的创面愈合率无明显差别。第11天模型组创面平均愈合率低于对照组、贝复济组、MEBO组;MEBO组与贝复济组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第18天模型组创面平均愈合率仍低于对照组、贝复济组、MEBO组。第25天模型组尚可看到个别大鼠创面未完全愈合,模型组创面平均愈合率低于对照组、贝复济组、MEBO组(P<0.05)。(2)治疗第5天,与对照组比较,模型组可见大量炎症细胞...

摘要：目的:探讨皮肤医疗再生技术对慢性难愈合创面组织中核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶(IKK)及其磷酸化蛋白表达水平的影响,来探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏影响慢性难愈合创面进程中是否涉及到NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα表达的相互作用,探讨MEBT/MEBO的部分作用机制,为临床应用MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面提供理论依据与技术壁垒。方法:(1)方法:选取SPF级别健康2月龄Wistar雄性大鼠,90只,体重范围235±15g,适应性喂养一周。用随机数法将90只大鼠分为5组,每组18只,分别是:空白组、对照组(急性全层皮肤缺损组)、模型组、MEBO组、贝复新组。慢性难愈合创面组包括模型组、MEBO组和贝复新组。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠根据付小兵教授制备全层皮肤缺损模型结合沈氏改良塑料环肉芽肿定量法,经改进,建立大鼠慢性难愈合创面模型。所有组别除空白组外在造模后立刻用药处理。换药前,每组每天用1/5000呋西林溶液清洗两次。(2)在建立模型后的第3天、第7天、第14天分别每组麻醉6只大鼠取单侧标本,继续观察大鼠创面达到完全愈合时间,观察各组大鼠的创面情况、愈合时间及愈合率,通过HE染色观察大鼠模型创面内的炎症细胞变化及数量和Masson染色观察大鼠模型创面肉芽组织病理形态学变化、胶原蛋白的生成、组织中纤维以及炎性因子。(3)采用Western Blot检测细胞外基质成分中的NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα蛋白表达变化差异,观察各组受干预后对创面中NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα的表达的影响。(4)采用免疫荧光测定NF-κB p65入核荧光强度,间接性半定量观察炎症因子的表达趋势。结果:(1)干预第3、7天,各组大鼠创面愈合率均无明显差异(P>0.05);干预第14天,模型组大鼠创面愈合率明显低于对照组、MEBO组(P<0.05),其余各组间创面愈合率均无明显差异(P>0.05)。MEBO与对照组和贝复新组对比,创面愈合时间无明显差别(P>0.05),与模型组相比,MEBO组愈合时间明显短于模型组(P...

摘要：目的分析湿润烧伤膏(MEBO)对创面组织自噬信号因子Beclin1、LC3、p62的调控作用及其促进创面愈合的机制。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠250只,随机分为空白组、对照组、模型组、康复新组、MEBO组各50只。对照组建立常规创面模型,模型组、康复新组、MEBO组建立糖尿病创面模型,对照组、模型组大鼠创面予生理盐水外敷治疗,康复新组、MEBO组分别予康复新和MEBO外敷治疗。分别于干预第1、5、11、18、25天观察创面愈合情况、苏木素-伊红(HE)染色病理及自噬体的变化;免疫荧光法及Western印迹检测创面组织Beclin1、LC3、p62的变化;qRT-PCR分析Beclin1、LC3、p62 mRNA的表达。结果治疗过程中,对照组愈合最快,模型组愈合最慢,早期各组创面愈合率无显著差异(P>0.05),晚期各组创面愈合率:对照组>MEBO组>康复新组>模型组(P<0.05)。对照组、康复新组、MEBO组创面组织病理形态改善优于模型组。对照组、模型组、康复新组、MEBO组创面组织中Beclin1、LC3平均光密度(OD)值上升后下降,p62 OD值下降后上升;细胞内自噬体数目升高后下降;创面组织Beclin1、p-Beclin1表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升后下降,p62表达下降后上升;Beclin1、LC3 mRNA表达上升后下降,p62表达下降后上升差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MEBT/MEBO可有效促进糖尿病创面愈合,细胞自噬激活可能是其作用机制之一。