摘要：目的:许多miRNAs对皮肤有特定功能,miRNA广泛参与了机体皮肤发育,包括表皮细胞的增殖、分化、衰老及毛囊的发育,miRNA-203是第一个被发现在表皮及毛囊丰富表达的miRNA, miRNA-203在皮肤中的表达比在其他器官中高出100倍,被称为是"皮肤特异性的miRNA",它可通过直接抑制p63基因表达而促进表皮分化。研究表明,miRNA-203表达与皮肤分化和分层密切相关。临床实践中应MEBT/MEBO治疗慢性难愈合性创面,发现MEBO能显著缩短创面愈合时间,减少瘢痕愈合;进一步研究发现MEBO/MEBO能明显提高创面肉芽组织VEGF、bFGF、EGF基因及蛋白表达,最终加快创面愈合的进程,减少疤痕形成。尽管我们的研究初步揭示了MEBO防治慢性难愈合创面的部分机制,但是MEBO是通过何种途径调节以上基因及蛋白表达的呢?这个问题还有待进行更深入的研究。鉴于miRNA是一类小分子的非编码调控基因,而且人类中大部分的蛋白编码基因受miRNA调控,所以我们研究目的是证明MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。方法:参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型。健康成年SPF级Wistar雄性大鼠250只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组50只、对照组50只、慢性难愈合创面组150只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠按上述模型建立方法在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠按上述方法制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组50只,各组创面制备后立即用药治疗。模型制备完成后,各组于1d、3d、7d、11d、14d共5个时相点随机取10只大鼠,尾静脉注射适量的多功能纳米探针,然后利用小动物活体成像系统,进行miRNA-203的活体原位荧光成像与分析检测。活体原位荧光成像与分析检测完成后,对大鼠作病理切片,Western Blot检测HIF-1α、PTEN、VEGFR2、PI3K、MMP2、p-Akt蛋白表达。结果:MEBO可以通过PTEN/Akt/VEGF信号通路影响血管内皮细胞的生长,调控血管新生;通过PTEN/Akt/EGF信号通路影响表皮细胞的增殖和爬行,调控再上皮化的过程,进而促进细胞生长因子产生和修复创面。而MEBO可以促进miRNA-203的表达,而miRNA-203又可以调节PTEN表达水平的变化。结论:PTEN-Akt-VEGF/EGF通路可以接受miRNAs调节而发挥相应作用,而MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。所以miRNA-203在MEBO发挥防治慢性难愈合创面作用过程中起到重要的作用。

摘要：目的:观察皮肤原位再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足创面组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3、磷酸化smad3(P-smad3)表达及形态学结构的影响。方法:将80只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、贝复济组和MEBT/MEBO组,每组各20只。模型组、MEBT/MEBO组和贝复济组大鼠参照糖尿病模型制备法,采用腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素,建立糖尿病动物模型;空白对照组大鼠则腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。分别于干预治疗后第5、14天各取相同部位创面组织,采用Western blot法检测TGF-β1、Smad3和P-smad3蛋白表达水平,常规病理技术观察溃疡创面组织形态学结构,各组间差异比较采用方差分析和秩和检验。结果:治疗后5 d,各组大鼠Smad3蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(F=1.036,P=0.388);MEBT/MEBO组、贝复济组的大鼠TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平则均明显低于空白对照组(P=0.005、P=0.026,P=0.001、P=0.005);而且,上述2组大鼠的TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平亦明显高于模型组(P=0.000);此外,与第5天结果相比,第14天MEBT/MEBO组与贝复济组的TGF-β1、P-smad3表达水平明显下降,差异均具有统计学意义(P=0.000)。治疗后第5天,MEBT/MEBO组、贝复济组及空白对照组溃疡创面肉芽组织中成纤维细胞形态、毛细血管新生情况优于模型组,但空白对照组成纤维细胞排列紊乱;第14天,MEBO组、贝复济组创面组织成纤维细胞及胶原纤维排列致密成形,空白对照组胶原纤维增生明显但排列紊乱,模型组胶原纤维呈团状增生。结论:MEBT/MEBO在创面愈合早期可激活TGF-β1/Smad3信号通路,促进创面损伤修复,而在愈合晚期则抑制该信号通路的活化,控制创面组织过度增生。

摘要：目的探讨烧伤湿性医疗技术(MEBT/MEBO)及配套产品湿润烧伤膏(MEBO)对大鼠慢性难愈性皮肤溃疡创面肉芽组织表皮生长因子(EGF)、表皮细胞生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法 SPF级SD雄性大鼠45只,参照付小兵大鼠慢性性皮肤溃疡创面模型制作方法制作模型,成模后再采用随机数字表法随机分为模型组(15只)、MEBO组(15只)、贝复剂组(15只),造模后第2天开始用药,观察用药后各组创面愈合情况、肉芽组织生长情况,记录创面愈合时间;常规病理切片观察创面炎症、成纤维细胞数量、血管改变情况;透射电镜观察成纤维细胞及其线粒体形态结构;换药后第7、14天取创面组织,采用免疫组织化学法(SP法)观察MEBO对创面肉芽组织EGF、EGFR表达的影响。结果 MEBO组大鼠的创面愈合情况明显好于模型组与贝复济组;创面愈合时间明显短于模型组及贝复济组(P<0.05;P<0.01);病理学观察:MEBO组与贝复剂组及模型组比较,炎症反应轻、肉芽组织生长良好,纤维增生程度低;换药后第7、14天,MEBO组大鼠创面肉芽组织中EGF和EGFR蛋白表达阳性染色指数分别较模型组和贝复济组大鼠创面肉芽组织中EGF和EGFR蛋白表达阳性染色指数提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MEBO能增加慢性皮肤溃疡创面肉芽组织中EGF、EGFR的表达量,从而促进慢性皮肤溃疡愈合。

摘要：目的:探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响,完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制,为临床应用及推广提供更多的理论依据。方法:(1)取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组(Blank)、急创组(Acute)、美宝组(MEBO)、贝复济组(rb-b FGF)、模型组(Model),每组18只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理,急创组直接进行背部皮肤剪除,建立急性损伤模型,并湿敷生理盐水纱布,其余三组大鼠制备慢性难愈合创面模型,分别用湿润烧伤膏、贝复济,生理盐水湿敷创面治疗。造模后第3、7、14天分别切取创面肉芽组织,部分置于甲醛液及电镜液中固定,待病理HE染色,免疫荧光及电镜实验时取用。其余创面标本置于-80℃冰箱,用于Western Blotting和Real-Time PCR检测,对比各组大鼠创面IL-18及Caspase-1蛋白表达情况及mRNA转录水平。结果:(1)创面愈合情况:治疗后第3天,各组大鼠创面愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第7天和第14天,急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率和模型组比较均明显升高(P<0.05),美宝组与贝复济组比较无差异(P>0.05)。急创组在第14天愈合效果最好。(2)HE染色情况:急创组、贝复济组、美宝组的组织形态学结构均优于模型组。(3)电镜观察情况:电镜观察显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大、细胞破损、胞液稀疏、着色较浅、胞膜不连续,膜孔形成的细胞焦亡特征。(4)免疫荧光染色结果:Caspase-1在造模后第3天的急性组、贝复济组、美宝组,模型组中均有不同程度表达,其中模型组表达明显;造模后第7天和第14天,其余各组表达均明显减少,而模型组相对其他组仍然明显表达。(5)Western Blotting和Real-Time PCR检测情况:(1)治疗后第3、7、14天,空白组各时间点IL-18蛋白表达水平无明显变化,P>0.05,差异无统计学意义;急创组、贝复济组、美宝组、模型组:大鼠创面组织内IL-18蛋白表达水平先升高后降低;各组对比情况:第3天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异P<0.05,急创组、贝复济组、美宝组两两比较无统计学差异。第7天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异...