摘要：目的:通过对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,Ca N)以及白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)的表达水平进行研究,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子-钙调神经磷酸酶信号通路表达的影响,以期为MEBT/MEBO在糖尿病创面治疗的相关基础研究与临床应用上提供更多有价值的参考数据。方法:(1)分笼饲养SPF级Wistar雄性大鼠48只,适应性喂养一周后根据随机数字表法将大鼠随机分为4组,依次为对照组、模型组、美宝组(MEBT/MEBO治疗组)、贝复新组,每组12只大鼠。各组大鼠均禁食不禁水12小时,将其中模型组、美宝组和贝复新组造糖尿病大鼠模型,腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液稀释的等剂量链脲佐菌素溶液,而对照组仅注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;注射3天后从大鼠尾端采血检测其空腹血糖,以空腹血糖大于16.7mmol/L为标准制成糖尿病大鼠模型,随后将四组大鼠按全层皮肤缺损法制备创面,建成糖尿病大鼠创面模型(模型组、美宝组、贝复新组)和大鼠急性创面模型(对照组)。(2)各组模型建立完成后先用呋喃西林液清洁创面,将对照组大鼠和模型组大鼠创面外敷两层生理盐水纱布,美宝组大鼠创面外敷两层美宝纱布,贝复新组大鼠创面外敷两层贝复新纱布,随后所有组别大鼠均加盖两层消毒干纱布并以胶布固定,每日进行更换鼠笼及垫料1次、换药操作2次以保持环境与创面清洁。(3)于第3、7、14天共3个时相点各组分别随机取4只大鼠断颈处死并取材,用直尺测量创面直径并作为参照物拍照记录所有大鼠的创面愈合情况,收集所有时相点的照片后用Image J软件测算所有大鼠不同时相的创面大小,以时相为分组进行创面愈合率计算。取距离创缘0.5cm的整个创面及周围组织,取出的组织用组织剪将其剪为两半,其中一半组织用称量纸包裹并置于盛有4%多聚甲醛离心管中,24小时后转移至70%无水乙醇中,再制成组织石蜡蜡块以备后续HE染色实验和免疫荧光实验使用。另一半剪为合适大小的组织块放入冻存管中,随即迅速放置入装有液氮的容器内并转移至-80℃冰箱冻存。(4)HE染色观察创面肉芽组织生长形态及病...

摘要：目的 探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中钙调神经磷酸酶(CaN)/活化T细胞核因子(NFAT)信号通路表达的影响。方法 分笼饲养无特定病原体(SPF)级Wistar雄性大鼠48只，根据随机数字表法分为对照组、模型组(糖尿病大鼠创面模型)、美宝组(糖尿病大鼠创面模型+MEBT/MEBO治疗)、贝复新组(糖尿病大鼠创面模型+贝复新治疗),其中，治疗组于模型制作成功后立即给药。于3、7、14 d时各组随机抽取4只大鼠取材，拍照记录其创面愈合情况，进行创面愈合率计算、苏木精-伊红(HE)染色、实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)、免疫荧光染色检测，采用单因素方差分析法、LSD检验法做统计学分析。结果 3 d时，对照组和模型组创面愈合率有明显差异(P<0.05);7、14 d时，与模型组相比，对照组、美宝组和贝复新组创面愈合率更高(P<0.05)。3、7、14 d时，对照组、美宝组和贝复新组中NFAT、CaN表达水平明显高于模型组，对照组、美宝组中NFAT mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05);14 d时，对照组NFAT mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05)。3、7、14 d时，模型组IL-2表达水平较对照组、美宝组、贝复新组更高。结论 MEBT/MEBO可能通过上调CaN/NFAT信号通路的表达促进糖尿病大鼠创面愈合。

摘要：目的:观察皮肤再生医疗技术(湿润暴露疗法,Moist exposed burn therapy,MEBT/湿润烧伤膏,Moist exposed burn ointment,MEBO)对糖尿病大鼠创面组织Smad信号通路中Smad1、Smad5表达的影响,探讨MEBT/MEBO促糖尿病创面愈合的机制。方法:将100只Wistar雄性大鼠随机分成空白组、对照组各20只,高血糖组60只,空白组不做干预,对照组建立创面模型,高血糖组先建立糖尿病模型,再建立创面模型,建模完成后随机分为模型组、贝复剂组和MEBO组各20只,模型组和对照组创面用生理盐水纱布湿敷,贝复济组创面使用重组牛碱性生长因子纱布湿敷,MEBO组使用MEBO药纱湿敷创面,分别在模型建立完成后的第1、5、11、18天,对比创面的愈合情况,记录创面体积大小,取创面肉芽组织进行实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)技术检测Smad1、Smad5m RNA的表达水平,蛋白印迹法(Western blot)技术测定了创面肉芽组织中Smad1、Smad5蛋白表达。结果:(1)创面愈合情况:对照组、MEBO组、贝复济组创面在造模第18天完全愈合,模型组造模第18天仍有部分创面未愈,对照组、MEBO组、贝复济组创面修复优于模型组,MEBO组较其余3组创面干燥,渗出较少。比较创面愈合率:造模第5天,MEBO组、贝复济组>对照组>模型组(P<0.05),造模第11天,MEBO组、贝复济组>对照组>模型组(P<0.05),造模第18天,MEBO组、贝复济组、对照组>模型组(P<0.05),对照组、MEBO组及贝复济组创面愈合率均高于模型组(P<0.05),对照组、MEBO组及贝复济组的创面愈合率在造模第5天达最高。(2)RT-PCR及Western blot结果显示,对照组、MEBO组及贝复济组的Smad1、Smad5m RNA及蛋白表达在造模第5天达高峰,表达量均高于模型组(P<0.05),后随时间逐渐降低,模型组Smad1、Smad5m RNA及蛋白表达随时间逐渐上升,造模第18天表达量最高(P<0.05)。结论:MEBT/MEBO可有效促进糖尿病慢性创面愈合,其机制可能是MEBT/MEBO通过调控Smad1、Smad5表达,调控Smad信号通路,促进创面愈合。

摘要：目的:建立糖尿病大鼠创面动物模型,以MMPs/TIMP系统为切入点,探讨皮肤再生医疗技术(湿润暴露疗法/湿润烧伤膏;Moist exposed burn therapy,MEBT/Moist exposed burn ointment,MEBO)促进糖尿病创面愈合的作用机制,为MEBT/MEBO干预糖尿病创面修复提供理论依据,进一步指导临床。方法:110只SPF级雄性SD大鼠,随机选取86只大鼠制备糖尿病模型,其余24只大鼠正常喂养。糖尿病模型采用高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备,高脂高糖饲料喂养4周后,禁食12 h,腹腔注射STZ(40mg/kg,1ml/kg),48h后再一次腹腔注射STZ(40mg/kg,1ml/kg)。糖尿病造模后随机血糖≥16.7 mmol/L,且体重明显下降则视为糖尿病大鼠模型诱导成功。糖尿病模型诱导成功后进行大鼠创面模型的制备,随机选取造模成功的糖尿病大鼠(72只)和正常大鼠(24只)制备创面模型,在大鼠背部印出18mm大小圆形标记,剪除其全层皮肤,深至筋膜,制备创面模型。创面制备结束后,将糖尿病大鼠创面模型分成模型组、MEBO组、贝复济组,每组各24只;正常大鼠创面模型为空白组,24只。各组大鼠每日换药,于干预治疗后第4d、6d和12d分别选取8只大鼠,观察创面情况,并计算创面愈合速率,麻醉后取相同位点的创面组织,用于开展病理检测和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Bolt检测。结果:(1)大鼠体重、血糖水平情况:糖尿病造模前,正常组和糖尿病模型组体重、血糖比较差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病造模后,糖尿病模型组平均血糖大于16.7 mmol/L,血糖水平显著高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01),且体重显著低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)创面愈合率:在第4d、6d和12d,空白组>MEBO组和贝复济组>模型组。第4d、6d和12d,空白组创面愈合率均高于模型组、MEBO组和贝复济组,差异均有统计学意义(P<0.01);MEBO组和贝复济组创面愈合率均高于模型组,差异均有具有统计学意义(P<0.01)。(3)创面病理显示:在第4d和第6d,模型组胶原纤维含量较少,炎性细胞浸润较多;空白组、MEBO组胶原纤维含量较多且炎性细胞浸润较少。第12d,空白组胶原纤维丰富致密、排列规整;...