摘要：目的:体外高糖培养成纤维细胞(fibroblasts,FB),观察美宝湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)对高糖培养的成纤维细胞生长的影响,通过观察MEBO对高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、p62的调控作用,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn ointment/moist exposed burn therapy,MEBO/MEBT)促进高糖状态慢性溃疡创面修复的机制,为临床推广提供理论依据。方法:第一部分:首先建立糖尿病大鼠创面模型,待第11天后分离、培养创面成纤维细胞,并予免疫荧光对分离的成纤维细胞进行鉴定,再配置含有MEBO的高糖培养液,并摸索最适生长浓度,细胞经消化、传代至第3代后,随机将细胞分成两组:对照组、MEBO组,(1)采用CCK-8法检测第12小时、24小时、48小时、72小时、96小时细胞增殖情况;(2)采用细胞划痕试验来观察MEBO对成纤维细胞迁移的影响。第二部分:以上成纤维细胞经消化、传代至第3代后,取对数期(第3天)的细胞分为以下7组:空白组、模型组、MEBO低浓度组、MEBO中浓度组、MEBO高浓度组、雷帕霉素+MEBO组、雷帕霉素组(除了空白组用低糖培养基,其余组均用高糖培养基)。分别予:(1)免疫荧光检测LC3、Beclin-1、p62染色;(2)透射电镜检测细胞自噬体;(3)q RT-PCR检测LC3、Beclin-1、p62的m RNA表达;(4)蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)法检测LC3、Beclin-1、p62的蛋白表达。结果:第一部分:(1)细胞增殖试验:第48小时起MEBO组各个时间点的光密度(optical density,OD)值均高于对照组(P<0.05),细胞增殖率在第72小时最高;(2)划痕实验检测示:MEBO组促进成纤维细胞迁移能力比对照组强,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分:(1)免疫荧光检测示:与空白组相比,各组中LC3、Beclin-1的荧光染色OD值最高为MEBO高浓度组,最低为空白组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐升高,Beclin-1中的雷帕霉素+MEBO组的OD组高于雷帕霉素组;各组中p62荧光染色OD值最高为空白组,最低为MEBO高浓度组,MEBO低、中、高浓度组的OD值逐渐降低,雷帕霉素组的OD值高于雷帕霉素+MEBO组;(2)电镜检测示:与空白组相比,MEBO高浓度组、雷帕霉素组与雷帕霉素+MEBO组的自噬小体数量较多,且结构较为典型,MEBO低、中、高浓度组的自噬小体数量逐渐增多;(3)q RT-PCR显示:与空白组相比,各组中LC3的雷帕霉素+MEBO组与Beclin-1的MEBO高浓度组相对表达量最高,且MEBO组中有浓度升高表达量增大的趋势,LC3的雷帕霉素+MEBO组表达量明显高于雷帕霉素组;p62的雷帕霉素组相对表达量最低,MEBO组内比较有浓度升高表达量降低的趋势;(4)蛋白免疫印迹测定蛋白示:LC3、Beclin-1两者中的雷帕霉素+MEBO与MEBO高浓度组蛋白表达量均明显高各组,MEBO组中各因子表达随浓度升高,加入MEBO后雷帕霉素组的表达量均增高,而p62的蛋白表达情况相反。结论:MEBO可致高糖培养的成纤维细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1表达量增高,p62表达降低,调控细胞自噬,促进成纤维细胞增殖,这可能是MEBT/MEBO促糖尿病慢性创面修复的机制之一。

摘要：湿润烧伤膏(MEBO)培植微粒皮再生疗法是皮肤原位再生复原技术(MEBT/MEBO)的临床过渡外科技术。它针对目前深Ⅲ度烧伤治疗仍以切痂或截肢、切瘢植皮法,对瘢痕体质患者束手无策,应用切削痂技术的外科医生在不能短时间内掌握MEBO/MEBT治疗深Ⅲ度创面的现状来实现的快速封闭深Ⅲ度创面的疗法。。其应J用范围包括:大面积深Ⅲ度烧伤创面、开放性体表创伤缺损创面和电击伤创面等。主要步骤:1.由表入里地削除创面2/3层坏死组织后,使用MEBO液化排除创面坏死组织;2.原位培养新鲜皮下组织;3.新鲜皮下组织平皮后,进行微粒皮种植;4.原位培养种植微粒皮使其形成正常皮肤组织,实现创面愈合。优点:1.缩短封闭创面疗程;2.减少外科创伤和治疗痛苦;3.原位再生复原皮下组织;4.创面皮肤再生愈合;5.质量远远优于切痂植皮术。缺点:愈后质量不及MEBT/MEBO疗法。下图是临床应用典型病例图片,详细病例资料请观看本期杂志所附光盘。

摘要：目的:探寻MEBO在手外伤皮肤缺损中的治疗效果。方法:将所收治的手部损伤皮肤缺损病人创面全部采用皮肤再生医疗技术治疗。结果:38例患者全部愈合,无瘢痕形成,手部功能良好。结论:MEBO对手外伤皮肤缺损有较好的治疗效果。

摘要：目的:探讨MEBO在手外伤术后伤口延期愈合中的治疗效果。方法:将所收治的手外伤术后伤口延期愈合创面全部采用皮肤再生医疗技术治疗。结果:32例患者全部愈合,无瘢痕形成,手部功能良好。结论:MEBO对手外伤术后伤口延期愈合有较好的治疗效果。