摘要：目的:通过对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,Ca N)以及白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)的表达水平进行研究,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子-钙调神经磷酸酶信号通路表达的影响,以期为MEBT/MEBO在糖尿病创面治疗的相关基础研究与临床应用上提供更多有价值的参考数据。方法:(1)分笼饲养SPF级Wistar雄性大鼠48只,适应性喂养一周后根据随机数字表法将大鼠随机分为4组,依次为对照组、模型组、美宝组(MEBT/MEBO治疗组)、贝复新组,每组12只大鼠。各组大鼠均禁食不禁水12小时,将其中模型组、美宝组和贝复新组造糖尿病大鼠模型,腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液稀释的等剂量链脲佐菌素溶液,而对照组仅注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;注射3天后从大鼠尾端采血检测其空腹血糖,以空腹血糖大于16.7mmol/L为标准制成糖尿病大鼠模型,随后将四组大鼠按全层皮肤缺损法制备创面,建成糖尿病大鼠创面模型(模型组、美宝组、贝复新组)和大鼠急性创面模型(对照组)。(2)各组模型建立完成后先用呋喃西林液清洁创面,将对照组大鼠和模型组大鼠创面外敷两层生理盐水纱布,美宝组大鼠创面外敷两层美宝纱布,贝复新组大鼠创面外敷两层贝复新纱布,随后所有组别大鼠均加盖两层消毒干纱布并以胶布固定,每日进行更换鼠笼及垫料1次、换药操作2次以保持环境与创面清洁。(3)于第3、7、14天共3个时相点各组分别随机取4只大鼠断颈处死并取材,用直尺测量创面直径并作为参照物拍照记录所有大鼠的创面愈合情况,收集所有时相点的照片后用Image J软件测算所有大鼠不同时相的创面大小,以时相为分组进行创面愈合率计算。取距离创缘0.5cm的整个创面及周围组织,取出的组织用组织剪将其剪为两半,其中一半组织用称量纸包裹并置于盛有4%多聚甲醛离心管中,24小时后转移至70%无水乙醇中,再制成组织石蜡蜡块以备后续HE染色实验和免疫荧光实验使用。另一半剪为合适大小的组织块放入冻存管中,随即迅速放置入装有液氮的容器内并转移至-80℃冰箱冻存。(4)HE染色观察创面肉芽组织生长形态及病...

摘要：目的研究探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。方法将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(12只)、对照组(12只)、模型组(12只)、贝复新组(12只)及MEBO组(12只),其中,空白组大鼠做背部备皮处理后采用生理盐水纱布湿敷;对照组大鼠做深达筋膜层的全层皮肤缺损创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;模型组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;贝复新组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用贝复新治疗;MEBO组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用MEBO治疗。分别于治疗第3、7、14天取各组大鼠相同部位皮肤或创面组织进行HE染色,并用Western blot法检测组织中EGFR的含量,对比观察各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR的表达水平及组织病理变化。结果局部处理后第3、7天,除空白组外,其余各组大鼠创面组织HE染色病理切片均显示炎症细胞增多,有新生血管生成;局部处理后第14天,对照组、贝复新组、MEBO组大鼠创面组织中炎症细胞消失,创面再上皮化。局部处理后第3、7、14天,空白组大鼠背部皮肤组织中EGFR表达水平无明显变化,F=0.667,P>0.05,差异无统计学意义;对照组、模型组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平变化均较明显,F值分别为79.546、89.600、63.036、56.628,P均<0.01,差异具有统计学意义,其中对照组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平组间两两对比,除贝复新组与MEBO组对比,P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组组间两两对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平多个样本均数对比,F值分别为57.036、134.368、92.829,P均<0.01,差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调大鼠慢性难愈合创面组织中EGFR的表达水平,促进慢性难愈合创面的愈合,能够为MEBT/MEBO治疗慢性难愈合...

摘要：目的:通过氧化应激有关信号通路NRF2/HO-1/NQO1轴探讨皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist Exposedburn Ointment,MEBT/MEBO)促进大鼠慢性难愈合创面的再生修复机制。方法:90只SPF级Wistar大鼠被随机分为空白组、对照组(急性皮肤缺损)、慢性难愈合创面组(模型组、MEBO组、贝复新组),共5组,18只/组,模型组、MEBO组、贝复新组同时构建慢性难愈合创面模型。(1)于造模的第3、7、14日检测各组大鼠的创面愈合率;(2)采集创面组织,并采用HE染色、Masson染色检查各创面组织的细胞、肉芽、血管及胶原纤维等形态学改变;(3)比色法测定创面组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的浓度及超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase,SOD)的活力值;(4)采用免疫组化技术测定各组创面组织中的HO-1、NQO1平均光密度值;(5)采用免疫荧光法测定组织中NRF2蛋白表达量;(6)采用Western-blo法测定组织中HO-1、NQO1的蛋白表达水平;(7)采用Real-time PCR检测法测定组织中HO-1、NQO1m RNA的转录水平。结果:(1)对5组大鼠进行干预治疗第14日后,MEBO组及贝复新组的大鼠创面愈合率优于模型组(P<0.05);(2)对5组大鼠进行干预治疗第7、14日后,MEBO组及贝复新组的新生血管、胶原纤维及成纤维数量较模型组多且整齐(P<0.05);(3)对5组大鼠进行干预治疗第3、7、14日后,除第3日贝复新组外,其余四组创面组织中MDA含量均优于模型组(P<0.05);MEBO组的SOD的活性均优于模型组(P<0.05);(4)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1平均光密度值均比同期模型组高(P<0.05);(5)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的NRF2蛋白表达量均优于模型组(P<0.05);(6)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1蛋白表达水平均优于模型组(P<0.05);(7)对5组大鼠进行干预治疗3、7、14日后,MEBO组及贝复新组的HO-1、NQO1m RNA转录水平均优于模型组(P<0.05)。结论:MEBT/MEBO通过激...

摘要：目的:通过检测不同干预方案下大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白15(cytokeratin-15 CK15)与细胞角蛋白19(cytokeratin-19 CK19)的动态表达,探讨完善皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进创面愈合的部分分子学机制,从而为其在临床治疗上推广应用提供理论支持。方法:将90只健康成年Wistar雄性大鼠(SPF级)随机分为空白组(18只)、急创对照组(18只)、慢创模型组(18只)、MEBO组(18只)和Rb-b FGF(18只)。其中空白组不做损伤处理,急创对照组做急性全层皮肤缺损创面模型,慢创模型组、MEBO组和Rb-b FGF组在急创对照组基础上注射氢化可的松,制备慢性难愈合创面模型。模型建立后给予创面换药,每日两次。急创对照组与慢创模型组创面给予碘伏消毒,MEBO组碘伏消毒后涂抹MEBO治疗,Rb-b FGF组碘伏消毒后涂抹重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel Rb-b FGF)治疗。最后分别于治疗后第3,7,14天在各组中分别随机抽取6只大鼠,腹腔麻醉后,完整切取创面肉芽组织。一部分组织给予甲醛固定,之后进行HE染色。其余组织投入-80℃冰箱。所有时相点组织收集完毕后,应用Western Blotting技术以及Real Time PCR技术统一检测、对比各组大鼠创面组织中CK15、CK19蛋白表达量及CK15、CK19m RNA的转录水平。结果:(1)HE染色,各组样本HE染色后显微镜下观察,空白组未见变化,均为正常皮肤组织学形态。在造模后的第3天,急创对照组组织水肿,同时可见大量中性粒细胞浸润。慢创模型组,MEBO组,Rb-b FGF组组织间水肿,少量淋巴细胞浸润。在造模后的第7天,急创对照组镜下见中性粒细胞减少,组织间水肿减轻,少量毛细血管再生。MEBO组,Rb-b FGF组淋巴浸润情况亦有所减少,组织间水肿有所改善,除血管新生外,还可见少量毛囊。而慢创模型组淋巴细胞浸润程度未见减轻,组织水肿仍明显,缺乏新生毛细血管。在造模后的第14天,急创对照组,MEBO组,Rb-b FGF组组织无炎性细胞浸润,水肿不明显,可见新生的分层表皮结构,同时可见毛囊、皮脂腺...