摘要：目的:观察皮肤原位再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足创面组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3、磷酸化smad3(P-smad3)表达及形态学结构的影响。方法:将80只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、贝复济组和MEBT/MEBO组,每组各20只。模型组、MEBT/MEBO组和贝复济组大鼠参照糖尿病模型制备法,采用腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素,建立糖尿病动物模型;空白对照组大鼠则腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。分别于干预治疗后第5、14天各取相同部位创面组织,采用Western blot法检测TGF-β1、Smad3和P-smad3蛋白表达水平,常规病理技术观察溃疡创面组织形态学结构,各组间差异比较采用方差分析和秩和检验。结果:治疗后5 d,各组大鼠Smad3蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(F=1.036,P=0.388);MEBT/MEBO组、贝复济组的大鼠TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平则均明显低于空白对照组(P=0.005、P=0.026,P=0.001、P=0.005);而且,上述2组大鼠的TGF-β1和P-smad3蛋白表达水平亦明显高于模型组(P=0.000);此外,与第5天结果相比,第14天MEBT/MEBO组与贝复济组的TGF-β1、P-smad3表达水平明显下降,差异均具有统计学意义(P=0.000)。治疗后第5天,MEBT/MEBO组、贝复济组及空白对照组溃疡创面肉芽组织中成纤维细胞形态、毛细血管新生情况优于模型组,但空白对照组成纤维细胞排列紊乱;第14天,MEBO组、贝复济组创面组织成纤维细胞及胶原纤维排列致密成形,空白对照组胶原纤维增生明显但排列紊乱,模型组胶原纤维呈团状增生。结论:MEBT/MEBO在创面愈合早期可激活TGF-β1/Smad3信号通路,促进创面损伤修复,而在愈合晚期则抑制该信号通路的活化,控制创面组织过度增生。

摘要：目的通过动态观察大鼠慢性难愈合皮肤创面肉芽组织中p38、MK2蛋白及基因表达变化,从p38信号通路角度探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合皮肤创面的可能修复机制。方法实验一:以40只SD大鼠为研究对象,随机分为MEBO组、贝复济组、模型组、空白组,每组各10只,依据文献复制了大鼠体表皮肤溃疡模型。造模后第二天用药,观察创面愈合时间及愈合率;实验二:SD大鼠80只,随机分为4个组,每组20只,同实验一造模方法,造模后第3d,7d,14d各组随机处死5只大鼠,取相同部位皮肤溃疡创面肉芽组织,采用Western blotting和Real-Time PCR技术检测p38、MK2蛋白及其mRNA水平表达差异。结果(1)Western blotting检测结果:①在整个创面愈合过程中,纵向比较,P38、MK2总蛋白表达量在同个时相点各组差异无统计学意义(P>0.05),横向比较,在造模后第3天表达最高,其次逐渐下降;②在创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组创面组织中p-p38、p-MK2表达差异无统计学意义(P>0.05);在造模后第7天,各组间的差异开始明显,空白组、MEBO组、贝复济组表达量开始显著下降,模型组下降趋势不明显,各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05);造模后第14天,相比其他三组,模型组表达量仍处于较高水平(P<0.05),MEBO组和贝复济组差异无统计学意义(P>0.05);(2)RT-PCR检测结果:①在整个实验过程中,与空白组相比,MEBO组、贝复济组、模型组的P38 mRNA、MK2 mRNA表达量在第3天时最多,随后持续下降;②造模后第3天,各组差异无统计学意义(P>0.05);造模后第7天,MEBO组、贝复济组的表达量下降趋势明显,两组之间有明显统计学差异(P<0.05);造模后第14天,MEBO组、贝复济组的表达量持续下降,两组之间无统计学差异(P>0.05),但与模型组相比均有差异(P<0.05),模型组仍处于高表达。结论(1)MEBO能明显缩短大鼠慢性难愈合创面的愈合时间,下调p38和MK2磷酸化及其mRNA表达水平。(2)慢性难愈合创面难迟缓愈合与p-p38和p-MK2高水平表达有关,MEBO能促进慢性难愈合创面的作用机制之一可能是通过下调p38MAPK信号通路中p38和MK2磷酸化水平,阻断部分信号转导,抑制p38MAPK信号通路被过度激活的状态,从而促进大鼠慢性难愈合创面的愈合。