摘要：目的 探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗大鼠糖尿病性创面的作用及部分作用机制。方法 采用高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型，成模后将糖尿病大鼠随机分为模型组、MEBO组及重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用液(贝复济)组，与空白组同时制备创面模型后，分别予以相应药物干预治疗，MEBO组予以MEBO创面外敷，贝复济组予以贝复济创面外敷，空白组与模型组予以凡士林无菌纱布创面外敷。各组于干预治疗后第4、6、12天观察创面情况计算创面愈合率，分别取相同位点创面组织采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miRNA-21和转化生长因子(TGF)-β1 mRNA表达，应用Western印迹检测创面组织中TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3和Smad7蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组第4、6、12天创面愈合率、创面组织中miRNA-21、TGF-β1 mRNA及TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3蛋白表达显著降低，Smad7蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组比较，MEBO组干预第6、12天创面愈合率、创面组织中miRNA-21、TGF-β1 mRNA表达及TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3蛋白表达显著升高，Smad7蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论 MEBO可能通过miRNA-21调控TGF-β1/Smads信号通路促进成纤维细胞迁移、增殖，促进糖尿病性创面修复。

摘要：研究背景和目的糖尿病创面是糖尿病常见并发症,具有病程长、易复发等特点,给患者带来极大困扰,探寻其病理机制及治疗具有重要意义。巨噬细胞和成纤维细胞是创面中的重要效应细胞。现发现ADAM-10调控细胞粘附、生长、迁移等过程。但ADAM-10在糖尿病创面中的具体机制尚不明确。本研究探究ADAM-10在巨噬细胞、成纤维细胞中的调控作用;及其在糖尿病创面愈合过程中的作用机制;结合药物治疗创面,验证研究结果。研究方法1.临床上筛选慢性难愈合创面,随机分组:湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MM)组、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(rb-b FGF)组。在治疗第3、10天,取肉芽及少量上皮组织,免疫荧光(IF)染色ADAM-10、MMP-12,观察蛋白变化特点。2.对sh ADAM-10 RAW264.7细胞进行蛋白组学分析,筛选差异蛋白,并进行生物信息学分析。3.对RAW264.7和J774a.1细胞,进行sh ADAM-10(sh)或EX ADAM-10(EX)干预,随后给予脂多糖(LPS)或MMP-12抑制剂+LPS(MMP-12inh+LPS)刺激,检测细胞活力、基因转录、蛋白表达等情况。4.对L929成纤维细胞进行EX干预,随后LPS刺激,观察细胞活力、ADAM-10以及其它蛋白表达水平。5.正常、糖尿病大鼠分别制备创面,分组为急性(Acute)组、模型(Model)组、MM组以及rb-b FGF组。观察第3、7、10、14天的创面情况;创面率;病理结构;亚细胞结构;ADAM-10转录水平;蛋白表达及定位情况。结果1.慢性难愈合创面治疗第3天,MM组内ADAM-10、MMP-12表达均低于rb-b FGF组。相较于治疗第3天,第10天ADAM-10表达增加;MMP-12降低;MM增加ADAM-10作用低于rb-b FGF;rb-b FGF降低MMP-12作用明显。2.sh RAW264.7细胞蛋白组学检测结果显示:干扰ADAM-10影响创面愈合相关的多种生物学过程,并导致MMP-12和AKT降低。3.巨噬细胞中(1)对较于CON组,1000ng/ml的LPS作用9 h～24 h增加细胞活力(P<0.05);1.5μmol/L的MMP-12inh作用12 h～36 h对细胞活力无影响(P>0.05)。LPS作用12 h显著降低ADAM-10、增加MMP-12基因转录水平(P<0.01);LPS增加MMP-12、i NOS、T...