摘要：目的:白癜风是皮肤科常见难治性皮肤病,全世界人群发病率平均在1%-2%[1]。且现阶段发病原因上不十分明了,涉及到的方方面面均是推测性和探讨性的,现多倾向于是黑色素细胞产生黑色素的能力进行性较少或消失,其中包括如遗传因素、免疫因素精神神经因素、内分泌因素、表皮角质形成细胞功能异常、药物因素、黑色素细胞因素等诸多方面的病理性改变导致白癜风的发生[2]。现白癜风的治疗方法很多,常用的药物口服及外用要治疗,光疗法,自体表皮黑色素细胞移植术,中医中药治疗等。方法很多但总的来说,现阶段还没有一种较为理想、疗效确切的药物或方法,现有的文献报道率较为乐观,但真正能解决问题的痊愈率低,基本在20%左右,且远期疗效尚不能肯定[3]。我科自2013年开始由本人主持临床科研课题"黑色素细胞原位再生的研究",采用该技术治疗白癜风。我科在采用湿润烧伤法治疗组织缺损的患者的时候发现,患者缺损的组织不但能完全再生,其创面愈合后表皮色素细胞也能完全恢复,黑色素细胞功能完全恢复。就设计采用再生医疗的方法对白癜风患者皮损缺失的黑色素细胞进行修复。再生医疗技术的核心就在于,使用药物(湿润烧伤膏)刺激正常组织中的原位干细胞(角蛋白19型细胞)向正常细胞分化,进而修复缺失的组织及细胞[4]。而白癜风患者的皮损区存在黑色素细胞缺失和功能减退的病理表现[5]。本技术的新颖性在于采用皮肤原位再生疗法治疗白癜风,通过表皮磨削(去除病损的组织)[6]后用微针在皮损处打孔(每周一次)[7],在皮损处外敷湿润烧伤膏,使药物能通过皮肤的孔道持续渗透至真皮浅层、表皮基底层,再生类药物能持续刺激此处的原位干细胞(角蛋白19型细胞),促使其增值分化为原位黑色素细胞,在向有功能的黑色素细胞进行转化,进而修复白癜风皮损。该方法采用再生医学的理论、皮肤干细胞的理论,结合表皮磨削、微针技术,使用具有再生功能的中药对白斑进行修复。湿润烧伤膏中不含有传统中医药中有促进黑色素增值、提高酪氨酸酶活性的物质,而是直接刺激角蛋白19型细胞进行修复,与国内外现有的研究方法有明显的不同。方法:一)研究对象病例来源随机完成60例观察病例,来自于邛崃市医疗中心医院皮肤科门诊病人。借助SPSS13统计分析系统产生受试者所接受处理的随机安排。1.符合以白癜风的诊断标准。2.年龄在3～70周岁之间,性别不限。3.皮损为局限型、散发型、肢端型白癜风。4.从未接受过任何治疗的白癜风患者(包括药物口服、外擦、中医治疗、外科治疗、物理治疗)。5.自愿接受并配合表皮磨削、微针治疗。(二)仪器及材料1.表皮磨削机山东神思医疗设备有限公司型号BY-11 2.上海兰尤生物科技有限公司生产微针2.2mm 3.汕头市美宝制药有限公司生产湿润烧伤膏(三)方法 1.治疗组1.1选取白癜风患者白班区皮损,1.2操作方法:外用75%医用酒精常规消毒,消毒的面积应大于皮损的范围5cm。待皮肤完全干燥后,手指绷紧皮肤,使用表皮磨削机,400转速/分钟,在白癜风皮损表面磨削,同时用生理盐水冲洗,以磨削区见到点状渗血即停止,磨削面积应大于白斑区约2cm,压迫止血,使用湿润烧伤膏外涂微针打孔区皮肤,涂药厚度约1～2mm。剪取比皮损面积略大的消毒纱布三层,用湿润烧伤膏将其制作成油纱,覆盖在皮损区,外覆干燥消毒棉纱4层,并包扎固定。在操作中要求湿润烧伤膏的厚度要足够,要保持皮肤24小时不间断的接触药物。约10天后,磨削区表皮已覆盖创面,但色素细胞功能尚未恢复,进而使用微针在白斑区打孔。手指绷紧皮肤,使用2.2mm的微针在白斑区皮肤做"米"字形来回滚动,微针滚动覆盖的面积应大于白斑区约2cm。每个方向滚动5次,大约做5分钟。以看到皮肤发红,并有点状渗血点后停止滚动,并用消毒干棉签将渗血轻轻拭去。使用湿润烧伤膏外涂微针打孔区皮肤,使用方法同上。疗程中微针皮肤打孔每周进行一次,药物外敷包扎每天进行两次。3个月为1疗程。每周微针打孔前皮损区进行拍片存档,2个疗程后观察疗效。治疗期间停用一切与本病相关的药物及其他治疗。2.对照组对照组:白癜风患者白斑区皮损外擦卤米松乳膏每天1次、卡泊三醇软膏每天1次[8]。3个月为1疗程,2个疗程后观察疗效。3.统计学方法用Excel软件对临床观察表进行数据录入后,利用统计学软件SPSS13.0进行数据统计,数据以均数±标准差(x±S)来表示,计量资料采用T检验,计数资料采用四格表卡方检验,等级资料采用Mann-Whitney U检验,假设检验统一使用双侧检验,给出检验统计量及其对应的P值,以P<0.05作为有统计学意义,以P<0.01作为有高度统计学意义。4.疗效评价疗效标准痊愈:白斑全部消退,恢复正常肤色。显效:白斑部分消退或缩小,恢复正常肤色的面积占皮损面积≥50%。好转:白斑部分消退或缩小,恢复正常肤色小,恢复正常肤色的面积占皮损面积≥10%,<50%。无效:白斑无变化或缩小,恢复正常肤色的面积占皮损面积<10%。结果:二、结果使用黑色素细胞原位再生医疗技术的患者在痊愈率、显效率、好转率均高于对照组,差异均有统计学意义。表120例白癜风患者治疗后与对照组的6个月疗效比较痊愈显效好转无效组别n(%)n(%)n(%)n(%)n(%)治疗组307(23.3)8(26.6)9(30.0)6(20.0)80.0对照组306(20.0)7(23.3)7(23.3)10(33.3)76.6P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05结论:研究表明人黑色素细胞(MC)在妊娠5-6周自胚胎神经嵴开始移行,第7周到达表皮,在胚胎移行途中,有少数成黑色素细胞(MB)中途停滞或转化为无黑色素静止MC。这些在胚胎发育中停止或迷走MC,他们能从外毛鞘重新移行至脱色表皮区,积极参与白癜风脱色斑复色。移行入表皮的MC最终定居在基底膜,每个MC与其毗邻的大约36个角质形成细胞(KC)在形态和功能上密切关联构成表皮黑素单元。而白癜风脱色斑是否能修复还取决于局部微环境的多种细胞或分子水平的调节,如基底层KC、KC衍生细胞因子、基底膜成分、细胞黏附分子和细胞外基质(ECM)等因素,不利的环境因子很可能阻止或破坏MC向色素脱失斑移行[9]。原位再生皮肤技术是在创伤表面外涂湿润烧伤膏,在治疗创面会形成生理性的湿润环境,激活创面深层的潜能再生细胞,使其转化成具有分化为三个配层功能的干细胞即角蛋白19型细胞,并在创面区启动皮肤的胚胎发育过程和胚胎式组合,最终增殖、分化为正常皮肤组织结构,达到再生皮肤的临床治疗效果[10]。在该临床实验中,我们首先将白斑表皮通过磨削术去除,破坏已经异常的微环境因素,形成一个创面,在创面上使用湿润烧伤膏,可以保障创面有一个生理性修复所必需的湿润环境,修复功能受损的MC;激活创面深层的潜能再生细胞,使其转化成具有分化为三个胚层功能的干细胞即角蛋白19型细胞,使其增殖分化、为正常皮肤组织结构,其中就包括MC的分化;使用湿润烧伤膏通过微针技术在表皮打出数以万计的细小通道,使促进组织生长的药物湿润烧伤膏通过这些孔道持续进入表皮基底膜和外毛鞘附近,进一步改善局部微环境的同时诱导外毛鞘处的MB增值分化,并向脱色区移行,同时修复在白斑区已经功能受损的黑色素细胞,使其向正常黑色素细胞转化。实验中发现,首先黑色素恢复的区域是脱色区毛囊周围和白斑周围的皮肤黑色素增加,进而黑色素向白斑中心扩展。黑色素出现最早在一个月左右,由四周白斑边缘向中心生长,由毛囊周围向四周扩散。这和白癜风发病机制及修复机制是吻合的[11],是由于该处存在较多的无黑色素静止MC,在刺激的作用下转变为正常的MC。同时发现,2个月左右在白斑无毛囊区域也可见到点状黑色素形成,说明此部分的黑色素形成并不是由毛囊根部或皮损外周移行而来。可能存在两种机制:皮肤再生疗法修复了白斑区功能受损但结构尚未破坏的黑色素细胞,使其转变为产黑色素颗粒的黑色素细胞;在表皮磨削部位深层的角蛋白19型细胞,向正常皮肤组织转化的结果,其中就包括角蛋白19型细胞向黑色素细胞转化。在该实验中发现,对于白癜风皮损出就行磨削及微针针刺后患者无一例发生同形反应,原因在于表皮磨削术,去除了白斑区皮肤,破坏了局部异常的微环境状态,去除了局部异常的免疫反应;湿润烧伤膏有抑制白癜风表皮区异常免疫反应的作用。该实验说明,通过破坏局部白斑区的微环境,皮肤再生疗法刺激角蛋白19型细胞、无黑色素静止MC增殖分化,修复功能受损的MB的治疗方法,对于白癜风白斑的修复时有效的。但实验中发现,对于泛发型型白癜风、肢端型白癜风、节段型白癜风、完全型白癜风效果不理想,可能是患者机体内存在持续性的特异性体液免疫和细胞免疫功能异常相关。对于局限型面积大于于10cm2的白癜风疗效不好。这也是我们将来要研究的方向,即在口服药物或其他的治疗方法的协同治疗下,该方法对于难治性、顽固性白癜风的疗效是否能提高。

摘要：慢性难愈合创面多见于创伤导致的长期卧床患者及糖尿病等慢性疾病患者,具有病程较长、迁延难愈等特点。近年来部分研究学者发现,细胞外微环境中存在的细胞角蛋白、细胞外基质对创面修复具有一定的促进作用。但对慢性难愈合创面具有显著疗效的皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO),其作用机制是否也与细胞外微环境相关,则未见相关研究报道。为此,笔者于本研究中阐述了细胞外微环境中的细胞角蛋白、细胞外基质对慢性难愈合创面修复的意义,并分析了MEBT/MEBO促进慢性难愈合创面修复与改善细胞外微环境,进而调控细胞分化方向的相关性及可能作用机制,旨在为MEBT/MEBO的临床应用提供部分理论依据。

摘要：目的 探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)是否通过调控糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞，影响α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL-1)的表达水平，从而促进创面愈合。方法 90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为5组，空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组，每组18只，适应性喂养7 d后构建糖尿病模型，成模后统一制备创面。创面形成后第0天、第3天、第7天、第14天拍照记录创面愈合情况，每组随机取6只大鼠创面组织，进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化，免疫荧光观察创面组织α-SMA、COL-1的分布及表达情况，Western Blot检测创面组织α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。结果 (1)同一时间点组织学观察各组病理形态改善均优于模型组，治疗后期创面愈合率MEBO组、贝复新组优于模型组。(2)WB:与对照组比较，创面发生第3天、第7天、第14天过程中，模型组创面组织α-SMA、COL-1蛋白表达均明显下降(P<0.05);与模型组比较，创面第7天、第14天，MEBO组、贝复新组创面组织α-SMA、COL-1表达显著升高(P<0.05)。(3)免疫荧光：与对照组比较，第3天、第7天、第14天的模型组α-SMA蛋白表达均较低，其中第7天时具有显著性差异(P<0.05);模型组COL-1蛋白表达均显著偏低(P<0.05)。与模型组比较，第7天、第14天MEBO组、贝复新组α-SMA表达均较高(P<0.05),两用药组COL-1表达也较高，而贝复新组与模型组的比较差异有统计学意义(P<0.05),MEBO组COL-1表达介于模型组与对照组之间，但与模型组的比较差异不明显(P>0.05)。结论 MEBT/MEBO可能通过提高α-SMA和COL-1的蛋白表达水平，促进肌成纤维细胞转化及细胞外基质的沉积，从而加速糖尿病难愈合创面修复。

摘要：目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(Moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病难愈合创面的作用,并以α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平反映糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞转化程度,影响细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原蛋白(Collagen I,COL-1)的生成为切入点,通过动物及细胞实验探讨MEBT/MEBO促进糖尿病难愈合创面的具体机制,为MEBT/MEBO的临床应用及推广提供理论依据。方法:(1)90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为五组,空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组,每组18只,适应性喂养7天后应用STZ腹腔注射法诱导糖尿病大鼠模型,成模后再以全层皮肤缺损法统一制备创面。观察创面愈合情况,拍照记录创面形成后第0、3、7、14天的大鼠创面,并随机切取每组6只大鼠创面肉芽组织,进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化,免疫荧光观察α-SMA、COL-1的分布及表达情况,Western blot检测α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。(2)探讨MEBT/MEBO对大鼠真皮成纤维细胞(rat dermal fibroblasts,RDFs)的作用。首先用双酶法(中性蛋白酶+胰酶)分离提取Wistar大鼠幼崽皮肤真皮成纤维细胞,以HE染色观察细胞形态,免疫荧光法鉴定其波形蛋白(Vimentin)表达情况。以CCK8法摸索MEBO对RDFs的合适剂量,细胞实验分为低糖组、高糖组、溶剂组、低剂量MEBO组、高剂量MEBO组,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,实时定量PCR法检测α-SMA、COL-1的基因转录水平,Western blot法检测RDFs的α-SMA、COL-1蛋白表达水平。结果:(1)大鼠经STZ法诱导糖尿病模型后,出现典型“三多一少”症状,血糖明显升高达到糖尿病标准。与其他组相比,模型组大鼠出现创面愈合延迟(P<0.05),创面肉芽组织持续炎症浸润、血管新生不足、成纤维细胞数量低下及细胞外基质沉积减少等特征;治疗中后期创面愈合率:对照组(29)MEBO组=贝复新组(29)模型组。(2)WB:与对照组比较,创面发生第7、14天过程中,模型组创面组织α-...