摘要：目的:通过对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,Ca N)以及白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)的表达水平进行研究,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子-钙调神经磷酸酶信号通路表达的影响,以期为MEBT/MEBO在糖尿病创面治疗的相关基础研究与临床应用上提供更多有价值的参考数据。方法:(1)分笼饲养SPF级Wistar雄性大鼠48只,适应性喂养一周后根据随机数字表法将大鼠随机分为4组,依次为对照组、模型组、美宝组(MEBT/MEBO治疗组)、贝复新组,每组12只大鼠。各组大鼠均禁食不禁水12小时,将其中模型组、美宝组和贝复新组造糖尿病大鼠模型,腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液稀释的等剂量链脲佐菌素溶液,而对照组仅注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;注射3天后从大鼠尾端采血检测其空腹血糖,以空腹血糖大于16.7mmol/L为标准制成糖尿病大鼠模型,随后将四组大鼠按全层皮肤缺损法制备创面,建成糖尿病大鼠创面模型(模型组、美宝组、贝复新组)和大鼠急性创面模型(对照组)。(2)各组模型建立完成后先用呋喃西林液清洁创面,将对照组大鼠和模型组大鼠创面外敷两层生理盐水纱布,美宝组大鼠创面外敷两层美宝纱布,贝复新组大鼠创面外敷两层贝复新纱布,随后所有组别大鼠均加盖两层消毒干纱布并以胶布固定,每日进行更换鼠笼及垫料1次、换药操作2次以保持环境与创面清洁。(3)于第3、7、14天共3个时相点各组分别随机取4只大鼠断颈处死并取材,用直尺测量创面直径并作为参照物拍照记录所有大鼠的创面愈合情况,收集所有时相点的照片后用Image J软件测算所有大鼠不同时相的创面大小,以时相为分组进行创面愈合率计算。取距离创缘0.5cm的整个创面及周围组织,取出的组织用组织剪将其剪为两半,其中一半组织用称量纸包裹并置于盛有4%多聚甲醛离心管中,24小时后转移至70%无水乙醇中,再制成组织石蜡蜡块以备后续HE染色实验和免疫荧光实验使用。另一半剪为合适大小的组织块放入冻存管中,随即迅速放置入装有液氮的容器内并转移至-80℃冰箱冻存。(4)HE染色观察创面肉芽组织生长形态及病...

摘要：目的 探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中钙调神经磷酸酶(CaN)/活化T细胞核因子(NFAT)信号通路表达的影响。方法 分笼饲养无特定病原体(SPF)级Wistar雄性大鼠48只，根据随机数字表法分为对照组、模型组(糖尿病大鼠创面模型)、美宝组(糖尿病大鼠创面模型+MEBT/MEBO治疗)、贝复新组(糖尿病大鼠创面模型+贝复新治疗),其中，治疗组于模型制作成功后立即给药。于3、7、14 d时各组随机抽取4只大鼠取材，拍照记录其创面愈合情况，进行创面愈合率计算、苏木精-伊红(HE)染色、实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)、免疫荧光染色检测，采用单因素方差分析法、LSD检验法做统计学分析。结果 3 d时，对照组和模型组创面愈合率有明显差异(P<0.05);7、14 d时，与模型组相比，对照组、美宝组和贝复新组创面愈合率更高(P<0.05)。3、7、14 d时，对照组、美宝组和贝复新组中NFAT、CaN表达水平明显高于模型组，对照组、美宝组中NFAT mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05);14 d时，对照组NFAT mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05)。3、7、14 d时，模型组IL-2表达水平较对照组、美宝组、贝复新组更高。结论 MEBT/MEBO可能通过上调CaN/NFAT信号通路的表达促进糖尿病大鼠创面愈合。

摘要：目的：本课题在中医外科学理论指导下，在前期研究和临床应用的基础上，综合应用分子生物学、超微病理学、生物化学等现代多学科研究技术，进一步探讨烧伤湿性医疗技术/美宝湿润烧伤膏(Moist expose burn therapy/Moist expose burn ointment，MEBT/MEBO)对皮肤溃疡局部血管内皮细胞粗面内质网结构的影响，以期从不同层面揭示MEBT/MEBO改善微循环、祛腐生肌、促进创面再生与修复作用的分子生物学机制，并期望开辟“促进血管、细胞生长，加速创面愈合”的治疗新途径，为皮肤溃疡的治疗提供新的思路和方法，揭示MEBO促进溃疡部血管生长的部分本质。 方法：实验研究...

摘要：目的通过检测大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白(cytokeratin,CK) 15的动态表达水平,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进慢性难愈合创面愈合的部分作用机制。方法选取SPF级健康成年雄性Wistar大鼠90只适应性喂养7 d后,按照随机数表法随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组与rb-bFGF组,每组18只,其中空白组大鼠只做背部备皮处理,对照组大鼠于背部建立急性创面模型,模型组、MEBO组和rb-bFGF组大鼠于背部建立慢性难愈合创面模型;模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以0.9%氯化钠注射液纱布湿敷,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)药纱换药治疗,rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor,rb-bFGF)药纱换药治疗。分别于治疗第3、7、14天,采用Western blotting技术及Real-time PCR技术检测各组大鼠皮肤或创面组织中CK15蛋白及CK15mRNA的表达水平。结果空白组大鼠皮肤组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平无明显变化(F=0.054、1.333,P=0.948、0.293),其他各组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均呈先降低后升高的趋势(CK15蛋白:F=192.766、58.065、126.888、118.244,P均=0.000;CK15 mRNA:F=580.869、272.569、569.254、736.054,P均=0.000)。治疗第3、7天,对照组、MEBO组、rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均显著低于模型组(P均<0.05),而治疗第14天对照组、MEBO组、rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均显著高于模型组(P均<0.05);治疗第3、7、14天,MEBO组与rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均无明显差异(P均>0.05)。结论通过调控创面组织中CK15的表达水平促进表皮干细胞的增...