摘要：目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(Moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病难愈合创面的作用,并以α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平反映糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞转化程度,影响细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原蛋白(Collagen I,COL-1)的生成为切入点,通过动物及细胞实验探讨MEBT/MEBO促进糖尿病难愈合创面的具体机制,为MEBT/MEBO的临床应用及推广提供理论依据。方法:(1)90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为五组,空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组,每组18只,适应性喂养7天后应用STZ腹腔注射法诱导糖尿病大鼠模型,成模后再以全层皮肤缺损法统一制备创面。观察创面愈合情况,拍照记录创面形成后第0、3、7、14天的大鼠创面,并随机切取每组6只大鼠创面肉芽组织,进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化,免疫荧光观察α-SMA、COL-1的分布及表达情况,Western blot检测α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。(2)探讨MEBT/MEBO对大鼠真皮成纤维细胞(rat dermal fibroblasts,RDFs)的作用。首先用双酶法(中性蛋白酶+胰酶)分离提取Wistar大鼠幼崽皮肤真皮成纤维细胞,以HE染色观察细胞形态,免疫荧光法鉴定其波形蛋白(Vimentin)表达情况。以CCK8法摸索MEBO对RDFs的合适剂量,细胞实验分为低糖组、高糖组、溶剂组、低剂量MEBO组、高剂量MEBO组,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,实时定量PCR法检测α-SMA、COL-1的基因转录水平,Western blot法检测RDFs的α-SMA、COL-1蛋白表达水平。结果:(1)大鼠经STZ法诱导糖尿病模型后,出现典型“三多一少”症状,血糖明显升高达到糖尿病标准。与其他组相比,模型组大鼠出现创面愈合延迟(P<0.05),创面肉芽组织持续炎症浸润、血管新生不足、成纤维细胞数量低下及细胞外基质沉积减少等特征;治疗中后期创面愈合率:对照组(29)MEBO组=贝复新组(29)模型组。(2)WB:与对照组比较,创面发生第7、14天过程中,模型组创面组织α-...

摘要：目的:观察应用MEBT/MEBO治疗糖尿病足溃疡创面的临床疗效;运用Western-blot及常规病理技术探讨MEBT/MEBO促进大鼠糖尿病足溃疡创面愈合的机制。方法:(1)临床研究:将符合糖尿病足溃疡诊断的患者60例,随机分为观察组和对照组,每组30例。观察组外敷美宝湿润烧伤膏,对照组外敷贝复济。分别记录两组患者治疗第7天、第14天、第28天创面愈合率,观察治疗42天后两组患者临床疗效及两组患者创面愈合时间,评价其疗效、安全性。(2)动物实验:将100只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组(20只)与糖尿病造模组(80只)。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠糖尿病模型,选取60只造模成功大鼠随机分为MEBO组、贝复济组、模型组(各20只)。各组大鼠均建立足溃疡模型,空白对照组、模型组外敷生理盐水,MEBO组外敷美宝湿润烧伤膏,贝复济组外敷贝复济。用药第5天、14天,各组分别处死10只大鼠,利用光镜观察溃疡创面组织形态学结构,Western-blot法测定TGF-β1、Smad3、P-smad3蛋白的表达量。结果:(1)临床研究:治疗第14天、第28天,观察组与对照组对比,患者创面愈合率提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在经过42天治疗后,观察组患者临床疗效优于对照组(P<0.05)。观察组患者创面愈合时间比对照组患者创面愈合时间短(P<0.05)。MEBO组未见明显毒副作用或不良反应。(2)动物实验:连续换药第5天,四组大鼠Smad3蛋白表达量相比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比较,MEBO组TGF-β1、P-smad3蛋白的表达量均显著提高(P<0.01);与贝复济组相比较,MEBO组TGF-β1、P-smad3蛋白的表达量略高(P>0.05)。第14天,四组大鼠Smad3蛋白表达量相比较,差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,MEBO组TGF-β1、P-smad3蛋白表达量均显著降低(P<0.01);且与贝复济组相比较,MEBO组TGF-β1、P-smad3蛋白表达量略高,但差异无统计学意义(P>0.05)。用药第5天,MEBO组、贝复济组及空白对照组溃疡创面肉芽组织中成纤维细胞、毛细血管新生情况优于模型组,炎症细胞较模型组少,但空白对照组成纤维细胞排列紊乱;用药第14天,MEBO组、贝复济组创面组织成纤维细胞及胶原纤维排列致密成形,可见皮肤附属器,空白对照...

摘要：目的:通过对比观察创面愈合面积、创面渗出情况、肉芽生长情况、疼痛评分及创面组织扫描电镜结果以评估皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)治疗慢性难愈创面的临床疗效。方法:采用随机数字法,将符合纳入标准的100例慢性难愈创面患者分为治疗组和对照组,每组50例,记录入组患者姓名、性别、年龄、创面部位、创面面积及深度、基础疾病情况。治疗组以MEBT/MEBO处理创面换药,对照组以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(贝复新)创面换药,进行临床实验观察,观察治疗前、治疗第7天、14天、21天、28天两组患者创面情况,在换药28天后分别取MEBT/MEBO组和贝复新组各1例未愈患者的创面组织进行扫描电子显微镜观察,观察创面肉芽组织生长情况、组织排列形态、皮肤结构恢复情况,综合创面渗出情况、肉芽生长情况、疼痛评分、创面愈合率及创面组织扫描电镜结果对MEBT/MEBO进行临床疗效评价。结果:1.MEBT/MEBO治疗28天后未愈合的创面组织,扫描电子显微镜下表面可见大量细密、卷曲的精细胶原纤维,呈明暗交替的周期性横纹,构成较致密的网格状结构,截面可见粗大、卷曲的结缔组织胶原纤维束,胶原纤维束之间构成较疏松的空间结构,束间可见新生毛细血管,组织间以成熟红细胞为主,见散在未成熟的中、晚幼红细胞。贝复新治疗28天后未愈合的创面组织扫描电镜下观察,表面可见纤维排列较松散且不规则,纤维间见散在淋巴细胞,截面结缔组织胶原纤维束间仍见较多散在疏松纤维,组织间以未成熟的中、晚幼红细胞为主。2.(1)治疗7天后,两组创面渗出评分、创面面积比较无统计学意义(P>0.05),肉芽评分及疼痛评分对比在第7天具有统计学意义(P<0.05),表明在治疗第7天两组药物减少创面渗出情况及创面愈合速度相当,治疗组在促进肉芽良性生长和减少创面疼痛方面效果优于对照组。(2)治疗14天,创面渗出评分、肉芽评分、疼痛评分具有统计学意义(P<0.05),创面愈合面积比较无统计学意义,表明在治疗的第14天,治疗组在减少创面渗出、缓解创面疼痛和促进肉芽良性生长方面治疗组优于对照组,两组创面愈合速度相当。(3)治疗21天,创面渗出评分、创面愈合面积对比具有统计学意义(P<0.05),创面疼痛评分、肉芽评分无统计学意义(P>0.05),表明在治疗21天后,治疗组减少创面渗出效...

摘要：目的 探讨糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化的病理变化及湿润暴露疗法/湿润烧伤膏（MEBT/MEBO）对其干预的机制。方法 80只Wistar雄性大鼠，随机取18只作为急性创面组，其余大鼠建立糖尿病创面模型。将糖尿病创面造模成功的54只大鼠随机分为糖尿病创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组，每组18只。各组大鼠换药前均以呋喃西林液清洁创面，急性创面组和糖尿病创面组均外敷2层生理盐水纱布，MEBT/MEBO组外敷2层MEBO纱条（0.2 g/cm2）,贝复新组外敷2层贝复新浸透纱布（60 IU/cm2）,均每日换药2次。分别于造模后第3,7,14天，统计各组创面愈合率，HE染色和Masson染色观察创面病理变化，免疫荧光观察创面组织中层黏连蛋白3（LAMA3）蛋白表达情况，RT-PCR法检测创面组织中LAMA3、整合素α3（ITGA3）、E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）mRNA表达量。结果 造模后第7,14天，糖尿病创面组创面愈合率均明显低于其他组（P均<0.05）,MEBT/MEBO组和贝复新组比较差异无统计学意义（P均>0.05）。HE染色和Masson染色显示：造模后第3天，各组创面均处于炎症浸润状态；造模后第7天，糖尿病创面组创面处于炎症浸润状态，胶原纤维稀疏，边缘表皮增厚且无明显迁移，其他组炎症浸润均减轻，表皮增厚并明显迁移；造模后第14天，糖尿病创面组创面仍有炎症浸润，表皮再上皮化不全，其他组创面表皮覆盖且再上皮化明显。造模后第3,7,14天，糖尿病创面组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3 mRNA表达量均明显低于其他组（P均<0.05）,ZEB1 mRNA表达量均明显高于其他组（P均<0.05）,MEBT/MEBO组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3、ZEB1mRNA表达量与贝复新组比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化延迟，而MEBT/MEBO能促进创面再上皮化修复，其机制可能与上调再上皮化区LAMA3、ITGA3表达和下调ZEB1表达有关。