摘要：目的 探讨皮肤再生医疗技术/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)影响Wnt/β-catenin信号通路中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、Wnt3a表达以促进慢性难愈合创面修复的机制。方法将60只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、急性创面组、慢性难愈合创面组、MEBT/MEBO组、贝复济组，每组12只。空白组大鼠不进行损伤性处理；其余组大鼠均在统一部位进行全层皮肤切除建立创面，之后慢性难愈合创面组、MEBT/MEBO组、贝复济组大鼠注射醋酸氢化可的松建立慢性难愈合创面。然后每天进行2次清创换药，MEBT/MEBO组、贝复新组创面分别外敷2层创面大小的MEBO纱条、贝复新浸透纱布，其余组外敷2层创面大小的生理盐水纱布，最后覆盖2层消毒的干纱布。统计各组大鼠换药第3,7,14天的创面愈合率，分别采用RT-PCR和Western blot法检测各组大鼠换药第3,7,14天创面组织中GSK-3β、Wnt3a mRNA和蛋白表达情况，免疫组化染色观察慢性难愈合创面组和MEBT/MEBO组换药第14天创面组织中GSK-3β、Wnt3a阳性表达情况。结果 急性创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组各时间点的创面愈合率均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05);MEBT/MEBO组、贝复新组换药第7天的创面愈合率和MEBT/MEBO组换药第14天的创面愈合率均明显高于急性创面组(P均<0.05)。换药第3天，MEBT/MEBO组和贝复新组创面组织中GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量均明显低于慢性难愈合创面组(P均<0.05);换药第7天，MEBT/MEBO组、贝复新组GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量与慢性难愈合创面组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);换药第14天，MEBT/MEBO组和贝复新组GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05)。换药第3,7天，MEBT/MEBO组、贝复新组Wnt3a mRNA和蛋白相对表达量均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05);换药第14天，MEBT/MEBO组、贝复新组Wnt3a mRNA和蛋白相对表达量均明显低于慢性难愈合创面组(P均<0.05)。换药第14天，MEBT/MEBO组的细胞形态较完整，存在较多新生血管，GSK-3β蛋白表达分布多于慢性难愈合创面组，Wnt3a蛋白表达分布少于慢性难愈合创面组。结论 MEBT/MEBO可能...
摘要：目的:本研究将从环鸟苷酸腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(Cyclic guanine nucleotide adenine nucleotide synthetase-Stimulator of interferon genes,cGAS-STING)通路入手,明确湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)能否通过调控cGAS-STING信号通路减轻创面组织炎症反应状态,从而加快糖尿病创面修复的进程,为之后的临床治疗和科学研究提供可靠的参考数据。方法:1.通过网络药理学数据库筛选出MEBT/MEBO治疗糖尿病创面的活性成分和关键靶点,并对其进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析和蛋白质相互作用网络(Protein-protein interaction,PPI)分析,对活性成分和关键靶点进行分子对接验证其结合能力。2.动物实验验证:(1)选取48只Wistar雄性大鼠随机分为4组:空白组、MEBO组、贝复新组、对照组,其中空白组构建正常大鼠急性创面模型,MEBO组、贝复新组和对照组构建糖尿病大鼠创面模型。(2)通过HE染色观察各组大鼠造模后第3、7、14天创面愈合情况、组织形态学变化。(3)采用Western Blot、Real-time qPCR检测cGAS-STING通路相关蛋白表达变化差异及mRNA转录水平差异。结果:(1)通过网络药理学方法筛选出77个湿润烧伤膏和糖尿病创面的交集靶点,显示刺槐素、汉黄芩素、槲皮素、吴茱萸次碱等为湿润烧伤膏核心活性成分,对交集靶点进行PPI网络分析筛选出TP53、TNF、HSP90AA1等关键靶点,KEGG富集分析结果显示TNF、PI3K-Akt、AGE-RAGE信号通路在湿润烧伤膏对糖尿病创面的治疗中起到重要作用,GO富集分析结果显示这些交集靶点的生物过程主要涉及炎症反应调节和血管新生过程。我们进一步对核心活性成分和关键靶点进行分子对接,结果显示均具有较强结合活性。(2)创面愈合情况:造模后第3天,各组之间的创面愈合率无明显差异(P>0.05);造模后第7、14天,与对照组相比,空白组、MEBO组和贝复新组的创面愈合...
摘要：目的:探究原位再生法联合壮医毒论通过激活Wnt/β-catenin与Hippo/YAP通路加速干细胞原位再生促进慢性难愈合创面修复的机制。方法:将无特定病原体动物(Specific Pathogen Free,SPF)级Wistar大鼠60只随机分为空白组、模型组、美宝组、壮药组、联合组,每组12只。空白组剪除皮肤后不建立慢性难愈合创面模型,其余各组剪除皮肤后注射氢化可的松建立慢性难愈合创面模型。空白组、模型组自由采食饮水,美宝组每日换药一次,壮药组每日灌胃一次,联合组使用内外联治每日一次。连续干预12天,在第1天、第4天、第8天、第12天取创面皮肤组织,以Western Blot检测β-链蛋白(β-catenin)、Yes相关蛋白1(YAP1)、C1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、存活蛋白(Survivin)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)的表达情况。结果:与第1天相比,第12天的各组大鼠β-catenin、YAP1、Cyclin D1、Survivin的表达随时间递推而增大,MST1的表达随时间递推而减小,差异均有统计学意义(P <0.05)。与第8天相比,第12天各组大鼠蛋白表达无差异(P> 0.05)。结论:原位再生法联合壮医毒论能有效激活Wnt/β-catenin与Hippo/YAP通路,促进干细胞原位再生,缩短创面愈合时间,在防治慢性难愈合创面方面具有较好的优势。
摘要：目的通过观察湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)是否通过同源性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)通路影响慢性难愈合创面中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,探讨MEBT/MEBO的作用机制。方法 150只Wistar雄性大鼠被随机分为5组,美宝组(30只)、贝复新组(30只)、模型组(30只)、急性组(30只)和空白组(30只),并构建创面模型。于造模的第3、7、14天观察创面愈合情况,并采取创面标本组织,进行HE染色及Masson染色观察各组创面组织形态学变化和Western Blot检测各组PTEN、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白表达情况。结果(1)贝复新组及美宝组创面愈合时间显著短于模型组(P<0.05),创面愈合率高于模型组(P<0.05),且创面组织染色结果更好;(2)在造模第3天,贝复新组及美宝组中PTEN蛋白表达量明显低于模型组(P<0.05),p-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白表达高于模型组(P<0.05);第14天,与模型组比较,贝复新组及美宝组中PTEN蛋白表达增高(P<0.05),p-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论MEBT/MEBO可促进慢性难愈合创面的愈合,其可能作用机制是通过激活PTEN/AKT信号通路影响创面组织中MMP-2、MMP-9表达,及基底膜(BM)的降解与重塑。