摘要：目的:(1)通过单细胞测序(single-cell RNA-sequencing,sc RNA-seq)技术分析糖尿病足创面愈合组织(healing diabetic foot ulcer,Healing DFU)和非愈合组织(DFU)中CC类趋化因子配体2(c-c motif ligand 2,CCL2)、非典型趋化因子受体1(atypical chemokine receptors 1,ACKR1)与组织干细胞、内皮细胞的关系,从而进一步探究其影响创面愈合的机制;(2)探讨MEBO湿润烧伤膏在小鼠DFU创面CCL2-ACKR1信号轴的活化作用以及通过影响内皮细胞的活性促进创面愈合的分子作用机制。方法:(1)通过单细胞测序技术分析Healing DFU、DFU创面组织中组织干细胞、内皮细胞基因本体(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析结果;细胞亚群通讯数量、强度及相互作用差异性;进一步确定两种创面组织内特异性信号通路及其配体-受体对比分析;(2)我们将48只C57BL/6Jnifdc小鼠作为研究对象,随机将其分为4组,分别为急性创面组(Acute组,n=12),模型组(Model组,n=12),贝复新组(GF组,n=12),湿润烧伤膏组(MEBO组,n=12)。除外急性创面组,其余3组小鼠连续5天腹腔内注射链脲佐菌素(50mg/kg),连续饲养8周后取尾部静脉血确定模型建立成功性。待糖尿病模型建立成功后,在小鼠背部全层皮肤处制备缺损创伤模型,Acute组和Model组小鼠创面滴加生理盐水(20μL),GF组小鼠创面外用贝复新(20μL),MEBO组外用湿润烧伤膏(20μL),直到药物充分吸收。分别于DFU模型建立后3d、7d、14d取小鼠创面愈合组织。将各时点切取的组织一部分装入冻存管置入液氮中,并及时转移至-80℃冰箱,另一部分冰冻包埋剂处理,-20℃冰箱保存。确定各组小鼠创面愈合比率;观察各组小鼠3d、7d、14d创面愈合情况;免疫荧光化学染色分析14d后各创面组织内CCL2、ACKR1的表达;蛋白印迹法(Western blot,WB)分析各组小鼠3d、7d、14d创面CCL2、ACKR1的表达水平。结果:(1)创面相关的差异基因表达分析显示,愈合创面与未愈合创面的组织干细胞共有1948个差异基因,其中1198个基因被上调,685基因被下调;组织干细胞GO富集功能分析结果表明,其与创面愈合密切相关;组织干细胞中CCL2-ACKR1信号通路活性对内皮细胞亚群生物活性产生影响,最终促进DFU创面的愈合;(2)随着时间的延长,各组小鼠的创面组织体现出逐渐愈合的趋势,急性创面组小鼠愈合情况好于DFU模型组;贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预可以加速DFU小鼠创面的愈合情况,其中MBEO组体现出最好的疗效;(3)DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的荧光强度低于急性创面组;贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预均可以上调DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的强度,MEBO组创面组织内CCL2、ACKR1的荧光强度最高;(4)Acute组随时间变化其创面组织内的CCL2、ACKR1蛋白表达量呈现出持续升高的趋势,表达量明显高于Model组,贝复新及MEBO湿润烧伤膏的干预均可以上调DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1的强度。结论:(1)DFU小鼠创面组织内CCL2、ACKR1表达失调,MEBO的干预可以逆转DFU组小鼠创面组织内CCL2、ACKR1失调现象;(2)MEBO通过活化组织干细胞激活CCL2-ACKR1信号轴,促进创面组织血管内皮细胞的生成,最终促进创面愈合。

摘要：第一部分:小鼠慢性创面愈合过程中巨噬细胞极化类型及影响创面愈合关键的信号通路研究目的:经由单细胞转录组测序技术（sc RNA-seq）对小鼠创面内巨噬细胞（Mac）极化类型与成纤维细胞（Fib）、上皮细胞（EC）之间的关系,还有影响创面愈合的主要信号途径展开探讨。方法:经由sc RNA-seq法探究小鼠愈合创面（Wound）与未愈合创面（Un＿wound）组织在细胞亚群通讯强度、数量与互作方面的不同表现;对2类创面组织中特异性信号途径及其配体-受体加以明确,同时开展比较分析;并探讨小鼠Wound与Un＿wound组织中Monocyte亚群类型及其几类关键亚群类型。结果:（1）小鼠2类创面（Wound、Un＿wound）的单细胞质控Counts值皆未显示异常,细胞之间表现出较好的整体关联性。Wound组织中的细胞亚群以皮肤组织干细胞（Tissue SC）、EC、软骨细胞（Chondrocytes）、B细胞（B cells）、单核巨噬细胞（Monocyte）、Fib、内皮细胞（Endo）、角化细胞（KC）与T细胞（T cells）为主;Un＿wound组织中相关的细胞亚群以皮肤组织SC、T细胞（T cells）、波纹管细胞（CMP）、Monocyte、神经元细胞（Neurons）、Endo、EC、KC、Fibroblasts、软骨细胞（Chondrocytes）与B细胞（B cells）为主;在Wound组织中,Monocyte同EC、Fib、Tissue sc细胞亚群之间皆存在紧密联系;在Un＿wound组织内,就Monocyte同EC、Fib细胞亚群的通讯强度与数目而言,相较Wound组织皆偏低;（2）对于小鼠慢性创面组织Fib与Epithelial这2类细胞亚群,皆会受到Monocyte所含EGF信号途径CXCL1-Akr1信号轴的活化效应影响,CXCL信号途径内的不同配体-受体之间的作用性,对于整个信号途径,CXCL16-Akr6以及CXCL1-Akr1配体受体所具备的价值最高。对单个配体受体在不同细胞通信中的调控功能进行分析的结果显示,Cxcl3-Ark1配体受体于Mac与血管内皮细胞（VEC）的信号关联性更为显著,且更为关键;（3）Monocyte亚群由0、1、2、3、4、5这五类构成,前两类在Wound组织中占据主要位置,CD68与CD162特异性表达亚群存在比较明显的优势,同时CD163标记的Mono...

摘要：目的：探讨 MEBO对烧伤病人血管内皮细胞的保护作用及其机理。方法：将烧伤血清加入 M199培养液配成 20％烧伤血清培养液 (BSM)，加入培养融合的人脐静脉内皮细胞中，设立 1、 3、 6、 12h 4个时间点，光镜下观察各时相点人脐静脉内皮细胞的形态学变化， MTT法测定细胞活力。结论： MEBO能明显改善烧伤血清所致的血管内皮细胞形态学变化，维持血管内皮细胞的完整性和连续性，并能明显降低烧伤血清对血管内皮细胞活力的影响。

摘要：体表慢性难愈合创面(俗称溃疡)是由一系列创伤和疾病所致,这类创面具有病程长、对外观影响大以及并发症多等特点。中医外治溃疡历史悠久,近年来,我们在临床上应用MEBT/MEBO治疗多种慢性难愈合皮肤创面,取得了较好的疗效[1]。本实验进一步探讨MEBT/MEBO对皮肤溃疡局部血管内皮细胞粗面内质网结构的影响,以期可以从不同侧面揭示