摘要：目的:通过对S D大鼠默克尔细胞（merkel cell,MCs）的提取、分离、培养及鉴定,观察局部注射MCs联合美宝湿润烧伤膏（MEBO）外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法:1)取新生SD大鼠（1～3d）足垫、须垫及背部皮肤,采用酶消化法分离提取MCs,接种于多聚赖氨酸（PLL）包被的培养瓶内,通过细胞免疫组织化学法测定细胞角蛋白CK20的表达,qPCR检测MCs中Piezo2 mRNA的表达,ELISA法检测培养第2d、4d、6d、8d、10d细胞分泌CGRP情况。2)建立SD大鼠足底创面模型,按照干预方式的不同分为如下五组:A组（MCs注射+MEBO组）;B组（MCs局部注射组）;C组（MEBO外用组）;D组（阴性对照组）;E组（鼠神经生长因子注射阳性对照组）。细胞组用MCs 1×106个/mL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处,24小时后追加1次,每次每个部位25μL;MEBO组按相应分组给予MEBO外用,每日换药一次,直至创面愈合。阳性及空白对照组分别予等体积鼠神经生长因子及PBS注射。观察创面愈合时间,计算各组创面各时间点愈合率,棉拭子检测足底感觉恢复情况,分别于干预后7d、14d、21d三个时相各组分别随机抽取6只大鼠,切取组织,制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维生长情况。3)每组大鼠均于造模后第7d、14d、21d时用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录、统计缩足次数并计算百分比。结果:1)采用中性蛋白酶和胰酶依次消化SD大鼠足底及须垫部位所取皮肤组织可得到较多MCs,以CK20做细胞免疫化学染色可见MCs呈阳性反应。2)实验中应用中性蛋白酶及胰酶双酶消化法可得到MCs,以Ham,s F-12培养基为基础培养基,加入20ng/ml bFGF可使MCs稳定增殖;qPCR结果示MCs中Piezo2 mRNA的表达量为:0.0270±0.0042;酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测检测MCs上清液中降钙素基因相关肽（CGRP）在培养第2、4、6、8、10天浓度随培养时间的延长逐渐增加,培养第6d到8d时增加速率更快,间接提示默克尔细胞增殖情况。3)创面愈合方面,大体观察肿胀程度及炎性反应程度无明显区别,总愈合时间上应用MEBO的两组创面较其他实验组提前,A组E组愈合时间分别为14.33±0.69天、16.44±0.86天、14.83±0.71天、1...
摘要：目的观察湿润烧伤膏(MEBO)外用对大鼠足底创面触觉功能重建的影响并初步探讨其机制。方法将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为5组:正常组(N组)、创面7d组(D7组)、创面14d组(D14组)、MEBO治疗7d组(MEBO7组)和MEBO治疗14d组(MEBO14组),每组12只。N组大鼠不做任何处理;D7组、D14组、MEBO7组和MEBO14组建立足底全层皮肤缺损开放性创面大鼠模型,D7组和D14组建模后不予药物治疗,分别观察7d和14d;MEBO7组和MEBO14组在建模后分别给予创面涂抹MEBO治疗7d和14d。Von Frey纤维丝检测各建模组大鼠建模侧后足底创面触觉阈值;分别取正常或建模后7d和14d时间点大鼠足底创面新生肉芽组织,采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测正常或建模大鼠建模侧足底创面细胞角蛋白20(CK-20)阳性细胞数及CK-20蛋白的表达水平。结果大鼠建模后,足底创面触觉阈值升高,触觉功能减退,新生肉芽组织中CK-20阳性细胞数减少,CK-20蛋白水平降低,与N组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);MEBO7组和MEBO14组大鼠足底创面经MEBO治疗后,创面触觉阈值下降,触觉功能增强,新生肉芽组织中CK-20阳性细胞数增多,CK-20蛋白水平升高,与同时间点D7组和D14组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外用MEBO能促进大鼠足底创面触觉功能的重建,其机制与增加创面新生肉芽组织中CK-20阳性细胞的表达有关。
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摘要：目的观察局部注射Merkel细胞(Merkel cells,MCs)联合美宝湿润烧伤膏(MEBO)外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法取成年大鼠共90只(210±10)g,于左后足检测缩足反射后垂直切取左足底皮肤直至皮下,形成直径为1 cm圆形创面,保留深筋膜。将建模后大鼠随机分为5组:MCs+MEBO组、MCs组、MEBO组、PBS组及m NGF(鼠神经生长因子)组。细胞组用MCs(1×10～6个/m L)每个点25μL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处;m NGF组及PBS组分别予等体积(每个点25μL)的重组β鼠神经生长因子(0. 1μg/m L)和PBS液注射。造模后所有模型鼠均用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录并统计缩足次数,计算其百分比;在建模第7、14、21天3个时间点每组随机抽取6只大鼠,切取组织并制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维的生长情况。结果缩足反射对比,MCs+MEBO组比MCs组、MEBO组、PBS组反射阈值更低、对刺激更敏感(P <0. 05),与m NGF组相近;MCs+MEBO组在神经纤维数量、排列有序性等方面都优于阴性对照或单一处理组,与m NGF组相近。结论 MCs局部注射联合MEBO外用可促进创面皮肤神经的再生。