摘要:目的:1.系统地探讨湿润烧伤膏(Moist Exppsed Burn Ointment,MEBO)治疗糖尿病足溃疡(Diabetic Foot Ulcer,DFU)潜在的分子作用机制。2.对分期分级规范化使用皮肤再生医疗技术(Skin regenerative medical technology,MEBT/MEBO)治疗DFU进行临床经验总结。方法:1.网络药理学研究及分子对接验证:从TCMSP数据库中筛选出MEBO中的黄连、黄柏、黄芩、罂粟壳四味中药的主要药物活性成分(MW<500U和DL≥0.18)及其对应靶点。通过Gene Cards、Pharm Gkb、TTD等数据库,筛选出DFU的相关疾病靶点,通过靶点映射获得MEBO治疗DFU的靶点,通过Degree值筛选出MEBO发挥治疗作用的核心靶点,将核心靶点导入STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用网络。使用Metascape数据库对核心靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,预测MEBO治疗DFU的作用机制。将药物核心有效成分与核心靶点进行分子对接以验证预测结果。2.对2021年9月至2022年12月广西中医药大学第一附属医院创面修复周围血管科的DFU住院患者进行回顾性分析,探讨分级分期使用规范使用MEBT/MEBO治疗DFU的效果并进行经验总结。结果:1.共筛选出MEBO有效成分131个,相关作用靶点261个,共收集DFU相关靶点蛋白2844个。MEBO与DFU的共同靶点蛋白165个,其中预测的核心靶点为HSP90AA1(热休克蛋白90α家族A类成员1)、TP53(细胞肿瘤抗原53)、AKT1(α-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)、TNF(肿瘤坏死因子)、IL-6(白介素-6)等,GO富集共分析出5274条生物过程,468条细胞组分,846条分子功能,KEGG通路富集得到261条通路的结果。分子对接结果显示Apigenin(芹菜素)和wogonin(汉黄芩素)与HSP90AA1、quercetin(槲皮素)与ESR1均能稳定对接。2.40例纳入研究的病例中Wagner II级黑期者1例,Wagner II级黄期者8例,Wagner II级黑期和黄期者1例,Wagner III级黑期5例,Wagner III级黄期者13例,Wagner III级黑期和黄期者1例,Wagner IV级黑期者7例,Wagner IV级黄期者4例。创面数量和部位统计中,40例患者...
摘要:目的 通过网络药理学和分子对接技术探究湿润烧伤膏治疗放射性皮炎的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和HERB数据库中检索湿润烧伤膏的所有成分。使用UniProt和GeneCards、OMIM、TTD数据库检索靶点对应的基因。使用Cytoscape 3.10.0构建网络图。使用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络。使用基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析湿润烧伤膏的核心靶点。将湿润烧伤膏的主要活性成分与核心靶点进行分子对接。结果 活性成分-靶点网络主要包含98个成分和412靶点。关键靶点包括肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤蛋白53(TP53)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)。生物过程(BP)主要包括程序性细胞死亡的正向调控、对外来化学物质的反应、炎症反应的调节、对伤口的反应等;细胞组分(CC)主要包括膜筏、质膜的外侧、囊泡腔室、蛋白酶抑制复合体等;分子功能(MF)主要包括转录因子结合、激酶结合、蛋白质特定区域结合、蛋白质激酶活性、泛素样蛋白连接酶结合、整合素结合、细胞因子受体结合。KEGG通路主要包括癌症中的信号通路、脂质代谢与动脉粥样硬化、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、核因子-κB(NF-κB)、FoxO转录因子、Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK-STAT)等信号通路。Degree值前5位的活性成分包括槲皮素、黄芩素、棕榈酸甲酯、尿黑酸和汉黄芩素,分子对接结果显示湿润烧伤膏的活性成分与放射性皮炎核心靶点的结合活性较好。结论 湿润烧伤膏可能通过IL-6、IL-1β、TNF、TP53、CASP3等靶点,调控JAK/STAT、NF-κB、PI3K/Akt等信号通路发挥治疗放射性皮炎的作用。
摘要:目的 探讨皮肤再生医疗技术/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)影响Wnt/β-catenin信号通路中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、Wnt3a表达以促进慢性难愈合创面修复的机制。方法将60只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、急性创面组、慢性难愈合创面组、MEBT/MEBO组、贝复济组,每组12只。空白组大鼠不进行损伤性处理;其余组大鼠均在统一部位进行全层皮肤切除建立创面,之后慢性难愈合创面组、MEBT/MEBO组、贝复济组大鼠注射醋酸氢化可的松建立慢性难愈合创面。然后每天进行2次清创换药,MEBT/MEBO组、贝复新组创面分别外敷2层创面大小的MEBO纱条、贝复新浸透纱布,其余组外敷2层创面大小的生理盐水纱布,最后覆盖2层消毒的干纱布。统计各组大鼠换药第3,7,14天的创面愈合率,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各组大鼠换药第3,7,14天创面组织中GSK-3β、Wnt3a mRNA和蛋白表达情况,免疫组化染色观察慢性难愈合创面组和MEBT/MEBO组换药第14天创面组织中GSK-3β、Wnt3a阳性表达情况。结果 急性创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组各时间点的创面愈合率均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05);MEBT/MEBO组、贝复新组换药第7天的创面愈合率和MEBT/MEBO组换药第14天的创面愈合率均明显高于急性创面组(P均<0.05)。换药第3天,MEBT/MEBO组和贝复新组创面组织中GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量均明显低于慢性难愈合创面组(P均<0.05);换药第7天,MEBT/MEBO组、贝复新组GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量与慢性难愈合创面组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);换药第14天,MEBT/MEBO组和贝复新组GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05)。换药第3,7天,MEBT/MEBO组、贝复新组Wnt3a mRNA和蛋白相对表达量均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05);换药第14天,MEBT/MEBO组、贝复新组Wnt3a mRNA和蛋白相对表达量均明显低于慢性难愈合创面组(P均<0.05)。换药第14天,MEBT/MEBO组的细胞形态较完整,存在较多新生血管,GSK-3β蛋白表达分布多于慢性难愈合创面组,Wnt3a蛋白表达分布少于慢性难愈合创面组。结论 MEBT/MEBO可能...
摘要:目的:本研究将从环鸟苷酸腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(Cyclic guanine nucleotide adenine nucleotide synthetase-Stimulator of interferon genes,cGAS-STING)通路入手,明确湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)能否通过调控cGAS-STING信号通路减轻创面组织炎症反应状态,从而加快糖尿病创面修复的进程,为之后的临床治疗和科学研究提供可靠的参考数据。方法:1.通过网络药理学数据库筛选出MEBT/MEBO治疗糖尿病创面的活性成分和关键靶点,并对其进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析和蛋白质相互作用网络(Protein-protein interaction,PPI)分析,对活性成分和关键靶点进行分子对接验证其结合能力。2.动物实验验证:(1)选取48只Wistar雄性大鼠随机分为4组:空白组、MEBO组、贝复新组、对照组,其中空白组构建正常大鼠急性创面模型,MEBO组、贝复新组和对照组构建糖尿病大鼠创面模型。(2)通过HE染色观察各组大鼠造模后第3、7、14天创面愈合情况、组织形态学变化。(3)采用Western Blot、Real-time qPCR检测cGAS-STING通路相关蛋白表达变化差异及mRNA转录水平差异。结果:(1)通过网络药理学方法筛选出77个湿润烧伤膏和糖尿病创面的交集靶点,显示刺槐素、汉黄芩素、槲皮素、吴茱萸次碱等为湿润烧伤膏核心活性成分,对交集靶点进行PPI网络分析筛选出TP53、TNF、HSP90AA1等关键靶点,KEGG富集分析结果显示TNF、PI3K-Akt、AGE-RAGE信号通路在湿润烧伤膏对糖尿病创面的治疗中起到重要作用,GO富集分析结果显示这些交集靶点的生物过程主要涉及炎症反应调节和血管新生过程。我们进一步对核心活性成分和关键靶点进行分子对接,结果显示均具有较强结合活性。(2)创面愈合情况:造模后第3天,各组之间的创面愈合率无明显差异(P>0.05);造模后第7、14天,与对照组相比,空白组、MEBO组和贝复新组的创面愈合...