摘要：目的:通过观察研究不同治疗方案下大鼠创面组织CK10、CK14的蛋白及mRNA表达量。阐述皮肤原位再生医疗技术(Moist expose burn ointment/moist expose burn therapy,MEBT/MEBO)对慢性难愈合创面的治疗效果。同时进一步揭示MEBT/MEBO在改善慢性难愈合创面的部分作用机制。方法:本研究通过将90只SPF级wistar大鼠随机分为5组,分别为空白组(18只)、急创组(18只)、慢创组(18只)、rb-bFGF组(18只)及MEBO组(18只)。分别按照各组的要求对创面进行处理,于造模治疗后第3、7、14天采取大鼠创面组织。对3个时相点相同部位大鼠创面组织进行石蜡切片和Masson染色,观察对其各组大鼠创面组织形态学差异。运用western blot及RT-PCR法对第3、7、14天的大鼠创面组织的CK10、CK14的蛋白及mRNA表达量进行检测并对比其差异。结果:(1)空白组大鼠创面组织镜下形态学未见明显改变。随着治疗周期的延长,大鼠创面组织水肿逐渐消退,新生血管明显增多,皮肤附属器官逐渐形成。在愈合过程中,急创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织明显优于慢创组大鼠创面组织。(2)Western Blotting:空白组大鼠在实验过程中未对其做任何干预处理,我们所取组织中CK10、CK14的蛋白表达在实验所采用的3个时相点上并无实质性差异,经统计学计算后也证实了其间的差异是没有统计学意义的(P>0.05)。余下4组大鼠创面组织中CK10、CK14蛋白的表达量在不同的时相点存在差异,对比发现3天、7天、14天同组大鼠之间存在较明显的差异,不仅具有统计学意义(P<0.05),而且还呈现出一个逐渐增多的趋势。我们观察实验中第7天和第14天这两个时相点结果发现,rb-bFGF组和MEBO组这两组大鼠创面组织中所测得结果明显要优于慢创组,同样经过统计分析证明了其具有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR:其表达结果和Western Blotting相符合,空白组大鼠在实验过程中未对其做任何干预处理,我们所取组织中CK10、CK14 mRNA的表达在实验所采用的3个时相点上并无实质性差异,经统计学计算后也证实了其间的差异是没有统计学意义的(P>0.05)。余下4组大鼠创面组织中CK10、CK14 mRNA的表达量在不同的时相点存在差异,对比发现3天、7...

摘要：目的:通过对细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)的表达水平研究,来探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)能否通过影响CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达水平,加快治疗慢性难愈合性创面修复进程,探讨MEBT/MEBO的部分作用机制,为其临床推广应用于慢性难愈合创面的治疗提供参考数据。方法:(1)健康成年SPF级Wistar雄性大鼠60只,用随机数字表法分为:空白组(KB组)12只、急性组(JX组)12只、模型组(MX组)12只、MEBO组(MB组)12只和贝复新组(BFX组)12只。KB组只剃毛,JX组只切除皮肤,后三组建立大鼠慢性难愈合创面模型。每日换药2次。(2)分别在造模后第3、7、14天,每组处死4只大鼠后,再取标本,观察各组大鼠的创面情况,并计算其愈合率,通过HE染色及Masson染色来观察创面组织形态学变化。(3)采用Western Blot、Real-time qPCR检测各组CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达变化及CollagenⅠ和CollagenⅢ的mRNA转录水平的差异。结果:(1)疗效观察:MB组和BFX组创面修复效果好,创面修复情况与JX组无显著性差异(P>0.05)。HE染色及Masson染色:与MX组相比,JX组、MB组和BFX组的毛细血管、胶原纤维、皮肤及皮肤附属器新生较快。(2)各组大鼠创面组织中Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达:造模后第14天,JX组的CollagenⅠ和Collagen Ⅲ蛋白表达水平与KB组无统计学差异(P>0.05),JX组接近愈合状态。造模后第3天,JX组的两种蛋白表达水平最低(P<0.05);造模后第7天,MX组、MB组和BFX组三组的Collagen Ⅰ蛋白表达水平上升,JX组表达仍最低(P<0.05);造模后第14天,JX组的Collagen Ⅰ蛋白表达水平继续保持上升,而MX组、MB组呈下降趋势(P<0.05)。造模后第14天,MX组的CollagenⅢ蛋白表达水平下降,另外三组呈现上升趋势(P<0.05)。到愈合后期,计算Collagen Ⅰ:Collagen Ⅲ的比值,MX组高于MB组...

摘要：目的:通过对大鼠慢性难愈性创面组织中基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-Derived Factor-l,SDF-1)、趋化因子受体4(C-X-C Chemokine Receptor Type 4,CXCR4)表达水平的研究,来探讨烧伤疮疡再生技术(Moist Exposed Burn Therapy/Moist Exposed Burn Ointment,MEBT/MEBO)对加速慢性难愈合创面的修复进程的部分机制。方法:(1)SPF级雄性Wistar大鼠90只按随机数表法将实验动物随机分为空白组(KBZ组)、急性组(JXZ组)、模型组(MXZ组)、贝复新组(BFZ组)和MEBO组(MBZ组),每组十八只,空白组皮肤只剃毛,不作其他皮肤损伤处理,急性组做全层皮肤处理,建立急性创面,模型组、MEBO组和贝复新组参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法建立慢性难愈合创面模型。(2)造模成功后创面处理:JXZ组、MXZ组创面予以生理盐水纱布覆盖,BFZ组创面予以贝复新药物干预,MBZ组创面予以MEBT/MEBO干预。创面换药前均以1/5000呋喃西林液消毒处理,换药频率2次/日。(3)动物模型制备完成后,分别于3d、7d、14d,每组随机选取6只大鼠,麻醉后切取整个创面肉芽组织,标本一部分放入甲醛中固定,之后行HE染色、Masson染色,余创面组织置入-80℃冰箱,用于之后行Real-time q PCR、Western Blot检测创面组织中SDF-1、CXCR4m RNA表达水平及蛋白表达水平。结果:(1)创面愈合情况观察:造模第3天,四组创面基本未见明显愈合,JXZ组创面少量新鲜肉芽组织,MXZ组、MBZ组、BFZ组创面未见明显肉芽组织,其中MXZ组创面渗出较多,水肿明显。造模第7天,除MXZ组,其他三组创面有缩小,JXZ组最明显,JXZ组创面肉芽组织鲜红色,无渗液水肿,MBZ组与BFZ组创面肉芽较前新鲜,无渗液,MXZ组创面少量渗出、水肿,且可见坏死组织。造模第14天,JXZ组创面基本愈合,部分MBZ组、BFZ组创面接近愈合,创面肉芽组织新鲜,创面上皮化明显,MXZ组创面明显缩小,创面可见较多新鲜肉芽组织,无渗液、水肿。(2)创面愈合率:造模成功后,第3天、7天、14天,MXZ组创面愈合率与JXZ组、MBZ组、BFZ组均有差别(P<0.05),且MBZ组、BFZ组愈合率无明显差别(...

摘要：目的:探讨皮肤医疗再生技术对慢性难愈合创面组织中核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶(IKK)及其磷酸化蛋白表达水平的影响,来探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏影响慢性难愈合创面进程中是否涉及到NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα表达的相互作用,探讨MEBT/MEBO的部分作用机制,为临床应用MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面提供理论依据与技术壁垒。方法:(1)方法:选取SPF级别健康2月龄Wistar雄性大鼠,90只,体重范围235±15g,适应性喂养一周。用随机数法将90只大鼠分为5组,每组18只,分别是:空白组、对照组(急性全层皮肤缺损组)、模型组、MEBO组、贝复新组。慢性难愈合创面组包括模型组、MEBO组和贝复新组。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠根据付小兵教授制备全层皮肤缺损模型结合沈氏改良塑料环肉芽肿定量法,经改进,建立大鼠慢性难愈合创面模型。所有组别除空白组外在造模后立刻用药处理。换药前,每组每天用1/5000呋西林溶液清洗两次。(2)在建立模型后的第3天、第7天、第14天分别每组麻醉6只大鼠取单侧标本,继续观察大鼠创面达到完全愈合时间,观察各组大鼠的创面情况、愈合时间及愈合率,通过HE染色观察大鼠模型创面内的炎症细胞变化及数量和Masson染色观察大鼠模型创面肉芽组织病理形态学变化、胶原蛋白的生成、组织中纤维以及炎性因子。(3)采用Western Blot检测细胞外基质成分中的NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα蛋白表达变化差异,观察各组受干预后对创面中NF-κB p65、IKK、IκBα蛋白以及磷酸化蛋白p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα的表达的影响。(4)采用免疫荧光测定NF-κB p65入核荧光强度,间接性半定量观察炎症因子的表达趋势。结果:(1)干预第3、7天,各组大鼠创面愈合率均无明显差异(P>0.05);干预第14天,模型组大鼠创面愈合率明显低于对照组、MEBO组(P<0.05),其余各组间创面愈合率均无明显差异(P>0.05)。MEBO与对照组和贝复新组对比,创面愈合时间无明显差别(P>0.05),与模型组相比,MEBO组愈合时间明显短于模型组(P...