摘要：目的:通过对S D大鼠默克尔细胞（merkel cell,MCs）的提取、分离、培养及鉴定,观察局部注射MCs联合美宝湿润烧伤膏（MEBO）外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法:1)取新生SD大鼠（1～3d）足垫、须垫及背部皮肤,采用酶消化法分离提取MCs,接种于多聚赖氨酸（PLL）包被的培养瓶内,通过细胞免疫组织化学法测定细胞角蛋白CK20的表达,qPCR检测MCs中Piezo2 mRNA的表达,ELISA法检测培养第2d、4d、6d、8d、10d细胞分泌CGRP情况。2)建立SD大鼠足底创面模型,按照干预方式的不同分为如下五组:A组（MCs注射+MEBO组）;B组（MCs局部注射组）;C组（MEBO外用组）;D组（阴性对照组）;E组（鼠神经生长因子注射阳性对照组）。细胞组用MCs 1×106个/mL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处,24小时后追加1次,每次每个部位25μL;MEBO组按相应分组给予MEBO外用,每日换药一次,直至创面愈合。阳性及空白对照组分别予等体积鼠神经生长因子及PBS注射。观察创面愈合时间,计算各组创面各时间点愈合率,棉拭子检测足底感觉恢复情况,分别于干预后7d、14d、21d三个时相各组分别随机抽取6只大鼠,切取组织,制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维生长情况。3)每组大鼠均于造模后第7d、14d、21d时用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录、统计缩足次数并计算百分比。结果:1)采用中性蛋白酶和胰酶依次消化SD大鼠足底及须垫部位所取皮肤组织可得到较多MCs,以CK20做细胞免疫化学染色可见MCs呈阳性反应。2)实验中应用中性蛋白酶及胰酶双酶消化法可得到MCs,以Ham,s F-12培养基为基础培养基,加入20ng/ml bFGF可使MCs稳定增殖;qPCR结果示MCs中Piezo2 mRNA的表达量为:0.0270±0.0042;酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测检测MCs上清液中降钙素基因相关肽（CGRP）在培养第2、4、6、8、10天浓度随培养时间的延长逐渐增加,培养第6d到8d时增加速率更快,间接提示默克尔细胞增殖情况。3)创面愈合方面,大体观察肿胀程度及炎性反应程度无明显区别,总愈合时间上应用MEBO的两组创面较其他实验组提前,A组E组愈合时间分别为14.33±0.69天、16.44±0.86天、14.83±0.71天、1...

摘要：目的观察局部注射Merkel细胞(Merkel cells,MCs)联合美宝湿润烧伤膏(MEBO)外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法取成年大鼠共90只(210±10)g,于左后足检测缩足反射后垂直切取左足底皮肤直至皮下,形成直径为1 cm圆形创面,保留深筋膜。将建模后大鼠随机分为5组:MCs+MEBO组、MCs组、MEBO组、PBS组及m NGF(鼠神经生长因子)组。细胞组用MCs(1×10～6个/m L)每个点25μL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处;m NGF组及PBS组分别予等体积(每个点25μL)的重组β鼠神经生长因子(0. 1μg/m L)和PBS液注射。造模后所有模型鼠均用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录并统计缩足次数,计算其百分比;在建模第7、14、21天3个时间点每组随机抽取6只大鼠,切取组织并制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维的生长情况。结果缩足反射对比,MCs+MEBO组比MCs组、MEBO组、PBS组反射阈值更低、对刺激更敏感(P <0. 05),与m NGF组相近;MCs+MEBO组在神经纤维数量、排列有序性等方面都优于阴性对照或单一处理组,与m NGF组相近。结论 MCs局部注射联合MEBO外用可促进创面皮肤神经的再生。