摘要：目的:探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposure therapy/Moist burn ointment,MEBT/MEBO)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物(mammalian target of rapamycincomplex,m TORC)信号通路基质金属蛋白酶(MMP3、MMP8)促进体表慢性难愈合创面的修复机制。方法:(1)取60只SPF级Wistar大鼠作为实验对象,将这些大鼠分为五组,即空白组、对照组、模型组、贝复新组以及MEBO组,每组12只。模型组、贝复新组、MEBO组、对照组于背部做一圆形创面,然后模型组、贝复新组、MEBO组立即肌肉注射醋酸氢化可的松注射液,使其形成慢性难愈合创面,而对照组不注射醋酸氢化可的松注射液使其形成急性创面。模型组不涂抹任何药物,贝复新组涂抹贝复新凝胶,MEBO组涂抹湿润烧伤膏,对照组氯化钠溶液纱条覆盖,空白组只备皮不做创伤性处理。(2)分别在造模后的第3、7、14天记录各组大鼠创面愈合率,并进行HE及Masson染色观察创面组织愈合的病理情况。(3)采用Western Blot法分别对MMP3、MMP8、磷酸化m TORC(p-m TORC)进行检测,分析在各组大鼠创面组织中MMPs以及p-m TORC蛋白表达水平。(4)使用实时PCR法检测各组大鼠创面组织中MMP3、MMP8、m TORC m RNA基因转录情况。结果:(1)创面愈合率:四组大鼠造模后第7、14天的创面愈合率显著高于第3天,差异均有统计学意义(均P<0.05)。造模后第3天,对照组、模型组、贝复新组、MEBO组创面愈合率比较,差异无统计学意义(F=2.474,P=0.074);造模后第7、14天,对照组、贝复新组、MEBO组的创面愈合率均优于模型组,差异均存在统计学意义(均P<0.05)。(2)创面组织病理学:HE及Masson染色结果发现,在造模后的第3天,除空白组外,四组的炎症细胞大量生成,新生毛细血管生成较少,成纤维细胞排列紊乱,未生成皮肤附属器。造模后的第7天,对照组、MEBO组及贝复新组中的炎症细胞较之前显著降低,毛细血管生成明显,成纤维细胞排列规则;模型组中可观察到少数新生毛细血管及排列不规则的成纤维细胞,仍有炎症细胞浸润,未生成皮肤附属器。造模后的第14天,对照组、MEBO组与贝复新组新生毛细血管排列有序,未见浸润的炎症细胞,有皮肤附属器生成,胶原纤维明显增加且排列...

摘要：目的 探究皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物(mTORC)信号通路对慢性难愈合创面组织中基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)、基质金属蛋白酶-8 (MMP-8)表达水平的影响:方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠60只适应性饲养7 d后,按照随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、rb-bFGF组、MEBO组,每组12只,其中空白组大鼠只做备皮处理,对照组大鼠于脊柱两侧建立急性创面模型,模型组、rb-bF-GF组、MEBO组大鼠于脊柱两侧建立慢性难愈合创面模型。模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水纱布换药处理,rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)换药处理,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)换药处理,对比观察各组大鼠干预第3、7、14天时创面愈合率以及皮肤/创面组织中MMP-3、MMP-8、p-mTORC蛋白及相应mRNA的表达水平。结果 干预第7、14天,对照组、rb-bFGF组、MEBO组大鼠创面愈合率均明显高于模型组(P均<0.05)。干预第3、7、14天,对照组、rb-bFGF组、MEBO组大鼠创面组织中MMP-3、MMP-8、p-mTORC蛋白及MMP-3、MMP-8 mRNA表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组呈持续升高的趋势;干预第3、7天,rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织中MMP-3、MMP-8、p-mTORC蛋白及MMP-3、MM P-8 mRNA表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),而干预第14天,rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织中MMP-3、MMP-8、p-mTORC蛋白及MMP-3、MMP-8mRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),且干预第3、7天rb-bFGF组大鼠创面组织中MMP-3、MMP-8蛋白表达水平均明显低于MEBO组(P均<0.05),而干预第3、7、14天两组大鼠创面组织中MMP-3、MMP-8 mRNA表达水平均无明显差异(P均>0.05);干预第3、7、14天,各组大鼠创面组织中mTORC mRNA表达水平均无明显变化(P均>0.05)。结论 MEBT/MEBO可通过调控mTORC信号通路中MMP-3和MMP-8的表达水平促进慢性难愈合创面愈合。

摘要：目的 探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)是否通过调控糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞，影响α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL-1)的表达水平，从而促进创面愈合。方法 90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为5组，空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组，每组18只，适应性喂养7 d后构建糖尿病模型，成模后统一制备创面。创面形成后第0天、第3天、第7天、第14天拍照记录创面愈合情况，每组随机取6只大鼠创面组织，进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化，免疫荧光观察创面组织α-SMA、COL-1的分布及表达情况，Western Blot检测创面组织α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。结果 (1)同一时间点组织学观察各组病理形态改善均优于模型组，治疗后期创面愈合率MEBO组、贝复新组优于模型组。(2)WB:与对照组比较，创面发生第3天、第7天、第14天过程中，模型组创面组织α-SMA、COL-1蛋白表达均明显下降(P<0.05);与模型组比较，创面第7天、第14天，MEBO组、贝复新组创面组织α-SMA、COL-1表达显著升高(P<0.05)。(3)免疫荧光：与对照组比较，第3天、第7天、第14天的模型组α-SMA蛋白表达均较低，其中第7天时具有显著性差异(P<0.05);模型组COL-1蛋白表达均显著偏低(P<0.05)。与模型组比较，第7天、第14天MEBO组、贝复新组α-SMA表达均较高(P<0.05),两用药组COL-1表达也较高，而贝复新组与模型组的比较差异有统计学意义(P<0.05),MEBO组COL-1表达介于模型组与对照组之间，但与模型组的比较差异不明显(P>0.05)。结论 MEBT/MEBO可能通过提高α-SMA和COL-1的蛋白表达水平，促进肌成纤维细胞转化及细胞外基质的沉积，从而加速糖尿病难愈合创面修复。

摘要：目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(Moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病难愈合创面的作用,并以α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平反映糖尿病难愈合创面肌成纤维细胞转化程度,影响细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原蛋白(Collagen I,COL-1)的生成为切入点,通过动物及细胞实验探讨MEBT/MEBO促进糖尿病难愈合创面的具体机制,为MEBT/MEBO的临床应用及推广提供理论依据。方法:(1)90只SPF级成年雄性Wistar大鼠以随机数表法分为五组,空白组、对照组、模型组、MEBO组、贝复新组,每组18只,适应性喂养7天后应用STZ腹腔注射法诱导糖尿病大鼠模型,成模后再以全层皮肤缺损法统一制备创面。观察创面愈合情况,拍照记录创面形成后第0、3、7、14天的大鼠创面,并随机切取每组6只大鼠创面肉芽组织,进行HE、Masson染色以观察各组创面组织病理形态变化,免疫荧光观察α-SMA、COL-1的分布及表达情况,Western blot检测α-SMA、COL-1的蛋白表达水平。(2)探讨MEBT/MEBO对大鼠真皮成纤维细胞(rat dermal fibroblasts,RDFs)的作用。首先用双酶法(中性蛋白酶+胰酶)分离提取Wistar大鼠幼崽皮肤真皮成纤维细胞,以HE染色观察细胞形态,免疫荧光法鉴定其波形蛋白(Vimentin)表达情况。以CCK8法摸索MEBO对RDFs的合适剂量,细胞实验分为低糖组、高糖组、溶剂组、低剂量MEBO组、高剂量MEBO组,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,实时定量PCR法检测α-SMA、COL-1的基因转录水平,Western blot法检测RDFs的α-SMA、COL-1蛋白表达水平。结果:(1)大鼠经STZ法诱导糖尿病模型后,出现典型“三多一少”症状,血糖明显升高达到糖尿病标准。与其他组相比,模型组大鼠出现创面愈合延迟(P<0.05),创面肉芽组织持续炎症浸润、血管新生不足、成纤维细胞数量低下及细胞外基质沉积减少等特征;治疗中后期创面愈合率:对照组(29)MEBO组=贝复新组(29)模型组。(2)WB:与对照组比较,创面发生第7、14天过程中,模型组创面组织α-...