摘要：目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)对慢性创面组织修复中STAT6和SOCS1表达的影响,为MEBT/MEBO临床推广提供可靠的理论依据。方法:(1)本实验选择150只Wistar大鼠作为研究对象,将这些大鼠分为模型组、空白组、急性组以及贝复新组、MEBO组,每组30只。按要求处理各组大鼠,分别在实验分组后的第3、第7天、第14天观察各组大鼠创面愈合情况,并于这3个时间节点切取大鼠创面组织行石蜡包埋,进行Masson染色及HE染色;(2)采用Western Blot法分别对信号转导子和转录激活子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)及细胞因子信号抑制因子(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)进行检测与对比,分析在各组大鼠创面组织中STAT6和SOCS1蛋白表达量的情况;(3)采用Real Time PCR法检测各组大鼠慢性难愈合创面肉芽组织中STAT6和SOCS1 mRNA基因转录情况。结果:(1)通过研究对比各组大鼠创面大体愈合情况及创面组织Masson及HE染色结果,可以发现MEBO组、急性组、贝复新组三组组间对比都未见显著差异性,且这三组的愈合情况明显好于模型组。(2)对比各组大鼠创面组织STAT6、SOCS1蛋白在各时间点的表达水平:急性组、MEBO组和贝复新组STAT6蛋白表达呈先降低后再增高的趋势(P<0.05),而模型组呈持续降低现象(P<0.05)。建模后第3天、第7天,对比模型组,其他四组的STAT6蛋白表达水平均较低,第14天,五组的STAT6蛋白表达水平未见显著差别(P>0.05)。急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1蛋白表达呈先上升后降低趋势(P<0.05),而模型组则持续升高(P<0.05);建模后第3天、第7天,急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1蛋白表达最高,最低为模型组。第14天时,各组有关该值实验结果的差异性并不明显(P>0.05)。(3)SOCS1 mRNA、STAT6mRNA的基因转录水平比较:建模后急性组、MEBO组和贝复新组的STAT6 mRNA转录水平均呈先降低,后增高趋势(P<0.05),而模型组则表现为持续降低的趋势(P<0.05);建模后第3天、第7天,空白组、急性组、贝复新组与MEBO组STAT6 mRNA转录水平均明显低于模型组(P<0.05);第14天五组mRNA转录水平无明显差异(P>0.05)。建模后急性组、MEBO组和贝复新组SOCS1 mRNA转录水平呈先升高后降低现象(P<0.05),模型组呈持续升高现象(P<0.05);建模后第3、第7天,急性组、贝复新组与MEBO组SOCS1 mRNA转录水平均明显高于空白组及模型组(P<0.05),对比模型组,空白组转录水平更高(P<0.05);五组在第14天时的SOCS1 mRNA转录水平无统计学差异。结论:(1)通过MEBT/MEBO治疗可有效促进创面的愈合,明显减少浸润的炎症细胞,促进毛细血管、毛囊、皮质腺的生成;(2)MEBT/MEBO能够下调慢性难愈合创面中STAT6的蛋白表达及STAT6 mRNA转录水平,抑制2型固有免疫的促进纤维化修复的作用,从而减少瘢痕的形成;(3)MEBT/MEBO能够上调SOCS1蛋白表达及SOCS1 mRNA转录水平,从而抑制STAT6的蛋白表达及STAT6 mRNA转录水平,缓解慢性难愈合创面中的炎症反应,促进慢性难愈合创面组织原位再生修复。

摘要：目的:探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响,完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制,为临床应用及推广提供更多的理论依据。方法:(1)取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组(Blank)、急创组(Acute)、美宝组(MEBO)、贝复济组(rb-b FGF)、模型组(Model),每组18只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理,急创组直接进行背部皮肤剪除,建立急性损伤模型,并湿敷生理盐水纱布,其余三组大鼠制备慢性难愈合创面模型,分别用湿润烧伤膏、贝复济,生理盐水湿敷创面治疗。造模后第3、7、14天分别切取创面肉芽组织,部分置于甲醛液及电镜液中固定,待病理HE染色,免疫荧光及电镜实验时取用。其余创面标本置于-80℃冰箱,用于Western Blotting和Real-Time PCR检测,对比各组大鼠创面IL-18及Caspase-1蛋白表达情况及mRNA转录水平。结果:(1)创面愈合情况:治疗后第3天,各组大鼠创面愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第7天和第14天,急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率和模型组比较均明显升高(P<0.05),美宝组与贝复济组比较无差异(P>0.05)。急创组在第14天愈合效果最好。(2)HE染色情况:急创组、贝复济组、美宝组的组织形态学结构均优于模型组。(3)电镜观察情况:电镜观察显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大、细胞破损、胞液稀疏、着色较浅、胞膜不连续,膜孔形成的细胞焦亡特征。(4)免疫荧光染色结果:Caspase-1在造模后第3天的急性组、贝复济组、美宝组,模型组中均有不同程度表达,其中模型组表达明显;造模后第7天和第14天,其余各组表达均明显减少,而模型组相对其他组仍然明显表达。(5)Western Blotting和Real-Time PCR检测情况:(1)治疗后第3、7、14天,空白组各时间点IL-18蛋白表达水平无明显变化,P>0.05,差异无统计学意义;急创组、贝复济组、美宝组、模型组:大鼠创面组织内IL-18蛋白表达水平先升高后降低;各组对比情况:第3天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异P<0.05,急创组、贝复济组、美宝组两两比较无统计学差异。第7天:空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异...

摘要：目的:本研究通过对比单纯使用皮肤再生医疗技术(MEBO/MEBT),观察“补托法”结合MEBO/MEBT处理压疮的疗效、安全性及基础机制。方法:选取符合标准的压疮患者60例,将其均随机分为治疗组和对照组,每组各30例。两组均予以常规治疗,对照组创面规范按照MEBO/MEBT处理,每日2次,并根据情况适当清创。治疗组在对照组基础上服用八珍汤加减,总疗程4周。于治疗前后治疗记录创面面积、渗液量及创面组织类型后进行PUSH评分,评价愈合情况,记录创面新生新生上皮出现时间,记录不良反应,评价其安全性;于第7、14、21、28日取创缘组织,一部分HE染色后观察组织病理形态变化,一部分用western blot法检测压疮组织中CK19的表达水平;对临床观察结果及CK19检测结果进行统计学分析。结果:本次研究脱失或剔除治疗组7个、对照组8个,最终治疗组23人、对照组22人,共45人纳入试验结果。(1)临床观察结果治疗前后两组内压疮PUSH评分进行比较,有统计学差异(两组P均<0.05),两组患者压疮PUSH评分在治疗前后均有变化,即两组压疮较治疗前好转;治疗后两组间PUSH评分比较,有统计学差异(P<0.05),治疗组低于对照组,即治疗组压疮愈合情况优于对照组。(2)基于PUSH评分评价“补托法”结合MEBO/MEBT治疗III、IV期(气血亏虚证)压疮的效果,治疗组有效22例、无效1例,总有效率95.65%,对照组有效12例、无效10例,总有效率54.55%,治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间治疗后新生表皮出现时间差异有统计学意义(P<0.05),新生表皮出现时间:治疗组早于对照组。安全性比较,治疗组及对照组分别出现2例、1例轻度不良反应,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)实验观察结果观察压疮创面组织HE染色后组织病理形态学变化:治疗前两组压疮组织病理情况基本相同,均可见组织疏松水肿,部分区域变性坏死,纤维模糊断裂,部分血管坏死,真皮内出血,巨噬细胞、嗜中性粒细胞及大量淋巴细胞等炎性细胞浸润。研究过程中治疗组新生血管及纤维量生长更快,并在14d时即出现新生上皮,21d时出现毛囊、腺体结构,对照组相同结构新生时间晚于治疗组1周。对压疮组织中CK19表达量进行组间比较:在0d、7d时治疗组及对照组创面中CK19表达量的差异无统计学意义(P>0.05),14d、21d、28d时组间差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组高于对照组。两组创面在不同时间点CK19的表达总体上有差异(P<0.05),两组创面CK19表达量7d与14d、0d与14d之间,治疗组7d与28d之间,对照组0d与21d之间,无明显差异(P>0.05),其余任意同组内两时间点存在统计学差异(P<0.05),并且两组创面中CK19表达量呈现随时间先降低后升高最后再降低的趋势(28d<7d<0d、28d<14d<21d)。结论:(1)MEBO/MEBT联合“补托法”可促进III、IV期(气血亏虚证)压疮患者创面的愈合,且比较安全,其机制可能与促进表皮干细胞的分化及其标志物CK19表达相关。(2)MEBO/MEBT联合“补托法”可促进III、IV期(气血亏虚证)压疮患者创面中表皮组织、肉芽组织及附属器生成。(3)MEBO/MEBT治疗III期、IV期(气血亏虚证)压疮患者过程中,创面中CK19表达量呈先降低后升高再降低的趋势,加用“补托法”不改变其基本趋势,但可在使用2周后促进创面组织中表皮干细胞标志物CK19的表达。

摘要：目的：观察超脉冲CO2点阵激光Active FX、Deep FX治疗兔耳浅表性瘢痕的创面愈合情况并比较湿性创面护理技术和传统外科创面护理技术，创面愈合的差异性。研究CK19、P63在兔耳浅表性瘢痕点阵激光修复中的表达及不同创面护理技术对它们的影响，为临床采用超脉冲CO2点阵激光治疗瘢痕、寻找表皮干细胞参与瘢痕修复的证据。方法:选取新西兰大白兔20只，在兔耳腹侧面制作边长为1.5cm的正方形全层皮肤及软骨膜缺损创面，每只兔耳2个创面，共计80个创面，建立兔耳浅表性瘢痕模型。激光治疗分为两组: UltraPulse CO2Fractional（超脉冲CO2点阵）激光Active FX治疗组和UltraPulse CO2Fractional（超脉冲CO2点阵）激光Deep FX治疗组;激光治疗后创面修复分为两组：传统络合碘治疗方法组和湿润烧伤膏治疗方法组。每天观察创面愈合情况，记录每个创面的愈合时间；收集治疗前、治疗后即刻、1天、4天、7天、14天的瘢痕组织标本作病理组织切片，行HE染色镜下观察，并采用免疫组化检测皮肤干细胞标志分子角蛋白19（cytokeratinsCK19）、转录因子P63的表达，分析超脉冲CO2点阵激光两种不同模式和两种创面修复方法对CK19、P63的影响。结果:1、大体观察：络合碘组Active FX、Deep FX模式治疗后第2～3天创面开始干燥结痂、第9～10天痂皮开始脱落、第14天创面愈合，瘢痕较治疗前平整，颜色变浅；湿润烧伤膏组Active FX模式治疗后创面湿润，第2～3天创面可见散在点状结痂，第5～6天点状痂皮脱落,Deep FX模式治疗后创面未见明显结痂，治疗后第6～7天创面上皮化愈合。点阵激光Active FX模式治疗：络合碘组创面愈合时间为（13.7±0.65）天，湿润烧伤膏组创面愈合时间为（10.4±0.80）天，组间差异有统计学意义（P＜0.05）；点阵激光Deep FX模式治疗：络合碘组创面愈合时间为（9.4±0.28）天，湿润烧伤膏组创面愈合时间为（7.5±0.62）天，组间差异有统计学意义（P＜0.05）；Active FX模式和Deep FX模式治疗创面愈合时间对比，...