摘要：目的:本研究以糖尿病大鼠创面模型、临床糖尿病足创面为研究对象,观察皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病创面愈合情况的影响,并通过创面组织中BMP-2、BMP-7、BMPR-IA的检测,探讨其对糖尿病创面愈合作用的机理,为临床推广应用MEBO治疗糖尿病创面提供可靠的理论依据。方法:(1)糖尿病大鼠创面模型:按照随机数表法将125只Wistar雄性大鼠分为空白组(n=25)、对照组(n=25)、模型组(n=25)重组牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)组(n=25)以及湿润烧伤膏(MEBO)组(n=25)。空白组大鼠备皮,不建立创面模型;对照组大鼠构建常规创面模型;模型组、贝复济组及MEBO组构建糖尿病模型。生理盐水外敷对照组及模型组创面,MEBO组和贝复济组创面分别予MEBO、贝复济外敷。各组于治疗后的第1、5、11、18、25天观察:(1)观察不同时点大鼠溃疡创面愈合情况,比较愈合率;(2)创面组织病理HE染色观察各组纤维细胞、创面组织炎症、肉芽生长、上皮化等情况。(3)免疫组化法观察溃疡创面BMP-2、BMP-7动态变化的影响。(4)Western Blot法测定BMP-2、BMP-7、BMPR-IA及BMPR-IA磷酸化蛋白表达。(5)q RT-PCR法测定BMP-2、BMP-7、BMPR-IA的表达。(2)临床糖尿病足创面:收集30例2型糖尿病足(T2DMF)患者治疗前和MEBO治疗两周的创面组织。资料收集主要包括以下两个部分:(1)跟踪测量、拍照记录每位患者创面愈合情况;(2)提取创面组织用福尔马林固定液收集并制成蜡块。蜡块切片行HE染色观察病理形态;免疫组化观察BMP-2、BMP-7的表达;免疫荧光定量测量治疗前后BMP-2、BMP-7的OD值。结果:(1)糖尿病大鼠创面模型:(1)创面愈合情况及愈合率:第5天四组的创面愈合率无明显差别。第11天模型组创面平均愈合率低于对照组、贝复济组、MEBO组;MEBO组与贝复济组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第18天模型组创面平均愈合率仍低于对照组、贝复济组、MEBO组。第25天模型组尚可看到个别大鼠创面未完全愈合,模型组创面平均愈合率低于对照组、贝复济组、MEBO组(P<0.05)。(2)治疗第5天,与对照组比较,模型组可见大量炎症细胞...

摘要：目的研究探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。方法将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(12只)、对照组(12只)、模型组(12只)、贝复新组(12只)及MEBO组(12只),其中,空白组大鼠做背部备皮处理后采用生理盐水纱布湿敷;对照组大鼠做深达筋膜层的全层皮肤缺损创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;模型组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;贝复新组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用贝复新治疗;MEBO组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用MEBO治疗。分别于治疗第3、7、14天取各组大鼠相同部位皮肤或创面组织进行HE染色,并用Western blot法检测组织中EGFR的含量,对比观察各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR的表达水平及组织病理变化。结果局部处理后第3、7天,除空白组外,其余各组大鼠创面组织HE染色病理切片均显示炎症细胞增多,有新生血管生成;局部处理后第14天,对照组、贝复新组、MEBO组大鼠创面组织中炎症细胞消失,创面再上皮化。局部处理后第3、7、14天,空白组大鼠背部皮肤组织中EGFR表达水平无明显变化,F=0.667,P>0.05,差异无统计学意义;对照组、模型组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平变化均较明显,F值分别为79.546、89.600、63.036、56.628,P均<0.01,差异具有统计学意义,其中对照组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平组间两两对比,除贝复新组与MEBO组对比,P>0.05,差异无统计学意义外,其余各组组间两两对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平多个样本均数对比,F值分别为57.036、134.368、92.829,P均<0.01,差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调大鼠慢性难愈合创面组织中EGFR的表达水平,促进慢性难愈合创面的愈合,能够为MEBT/MEBO治疗慢性难愈合...

摘要：目的通过对比观察不同治疗方案对大鼠创面组织内CK10表达水平的影响,进一步揭示皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)治疗慢性难愈合创面的部分作用机制。方法将90只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组(18只)、急创组(18只)、慢创组(18只)、rb-bFGF组(18只)及MEBO组(18只),其中空白组大鼠仅做备皮处理,急创组大鼠建立急性创面模型,慢创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠建立慢性难愈合创面模型,且空白组大鼠局部皮肤予以生理盐水纱布湿敷,急创组及慢创组大鼠创面予以生理盐水治疗, rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor, rb-bFGF)凝胶治疗, MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment, MEBO)治疗,分别于治疗第3、 7、 14天对比观察5组大鼠皮肤或创面组织的形态学变化及CK10的表达水平。结果 (1)治疗第3天,空白组大鼠皮肤组织形态与正常皮肤组织形态无明显差异,其他各组大鼠创面组织水肿明显,可见大量炎性细胞浸润及少量成纤维细胞与新生毛细血管分布;治疗第14天,空白组大鼠皮肤组织形态与正常皮肤组织形态无明显差异,慢创组大鼠创面组织内仍有少量炎性细胞浸润,且有大量排列不规则的成纤维细胞分布,而急创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织内可见排列整齐的新生毛细血管及完整的毛囊和皮脂腺等皮肤附属器,组织结构接近于正常皮肤组织。(2)治疗第3、 7、 14天,空白组大鼠皮肤组织内CK10表达水平无明显变化,P> 0.05,差异无统计学意义;而急创组、慢创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平呈现逐渐升高的趋势,P均<0.05,差异具有统计学意义。(3)治疗第7、 14天,急创组、rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平均明显高于慢创组,P均<0.05,差异具有统计学意义;治疗第3、 7、 14天, rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平均无明显差异,P均> 0.05,差异无统计学意义。结论 MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的疗效不亚于rb-bF...

摘要：目的:通过检测不同干预方案下大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白15(cytokeratin-15 CK15)与细胞角蛋白19(cytokeratin-19 CK19)的动态表达,探讨完善皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进创面愈合的部分分子学机制,从而为其在临床治疗上推广应用提供理论支持。方法:将90只健康成年Wistar雄性大鼠(SPF级)随机分为空白组(18只)、急创对照组(18只)、慢创模型组(18只)、MEBO组(18只)和Rb-b FGF(18只)。其中空白组不做损伤处理,急创对照组做急性全层皮肤缺损创面模型,慢创模型组、MEBO组和Rb-b FGF组在急创对照组基础上注射氢化可的松,制备慢性难愈合创面模型。模型建立后给予创面换药,每日两次。急创对照组与慢创模型组创面给予碘伏消毒,MEBO组碘伏消毒后涂抹MEBO治疗,Rb-b FGF组碘伏消毒后涂抹重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel Rb-b FGF)治疗。最后分别于治疗后第3,7,14天在各组中分别随机抽取6只大鼠,腹腔麻醉后,完整切取创面肉芽组织。一部分组织给予甲醛固定,之后进行HE染色。其余组织投入-80℃冰箱。所有时相点组织收集完毕后,应用Western Blotting技术以及Real Time PCR技术统一检测、对比各组大鼠创面组织中CK15、CK19蛋白表达量及CK15、CK19m RNA的转录水平。结果:(1)HE染色,各组样本HE染色后显微镜下观察,空白组未见变化,均为正常皮肤组织学形态。在造模后的第3天,急创对照组组织水肿,同时可见大量中性粒细胞浸润。慢创模型组,MEBO组,Rb-b FGF组组织间水肿,少量淋巴细胞浸润。在造模后的第7天,急创对照组镜下见中性粒细胞减少,组织间水肿减轻,少量毛细血管再生。MEBO组,Rb-b FGF组淋巴浸润情况亦有所减少,组织间水肿有所改善,除血管新生外,还可见少量毛囊。而慢创模型组淋巴细胞浸润程度未见减轻,组织水肿仍明显,缺乏新生毛细血管。在造模后的第14天,急创对照组,MEBO组,Rb-b FGF组组织无炎性细胞浸润,水肿不明显,可见新生的分层表皮结构,同时可见毛囊、皮脂腺...