摘要：目的用免疫组化法及超微病理技术探讨烧伤湿性医疗技术(Moist Exposed Burn Therapy,MEBT)及其配套产品湿润烧伤膏(Moist Exposed Burn Ointment,MEBO)促进大鼠糖尿病足溃疡创面愈合的机制。方法将100只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组(20只)与糖尿病造模组(80只)。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠糖尿病模型,选取60只造模成功的大鼠并随机分为MEBO组、贝复济组、模型组(每组20只)。4组大鼠均建立足溃疡模型,空白对照组、模型组外敷生理盐水,MEBO组外敷湿润烧伤膏,贝复济组外敷贝复济。治疗第5天和第14天,各组分别处死10只大鼠,利用电镜观察溃疡创面肉芽组织细胞的超微结构,并用免疫组化技术测定TGF-β1、Smad3蛋白的表达量,对比各组观察及测定结果。结果治疗第5天和第14天,MEBO组与贝复济组溃疡创面肉芽组织细胞的超微结构逐步改善,细胞内各细胞器的形态结构逐渐恢复,MEBO组、贝复济组肉芽组织细胞的超微结构情况明显优于模型组。连续换药第5天,MEBO组TGF-β1、Smad3蛋白的表达量均明显高于模型组(P<0.001),且MEBO组、空白对照组、贝复济组3组相比,TGF-β1、Smad3蛋白的表达量无明显差异;第14天,MEB0组TGF-β1、Smad3蛋白的表达量均明显低于空白对照组(P<0.001),且MEBO组、贝复济组、模型组3组相比,TGF-β1、Smad3蛋白的表达量无明显差异。结论 MEBT/MEBO能改善细胞的超微结构,并通过动态调节TGF-β1、Smad3蛋白的表达量,促进糖尿病足溃疡创面的愈合,同时可在一定程度上减少瘢痕形成。

摘要：目的采用RT-PCR检测方法观察皮肤原位再生复原技术(Moist Exposed BurnTreatment/Moist Exposed Burn Ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足溃疡创面愈合的干预作用,研究其促进溃疡创面愈合的机制。方法将100只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(20只)和糖尿病造模组(80只),糖尿病造模组大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ),成功制备糖尿病大鼠模型64只,从中随机选取60只,并随机分为湿润烧伤膏(MEBO)组(20只)、贝复济组(20只)和模型组(20只)。造模成功后次日开始用药,各组大鼠创面给予相应的药物治疗,并记录创面愈合时间;用药6 d后,采用RT-PCR法观察记录创面肉芽组织中β-catenin mRNA和Smad3 mRNA的表达量。结果 (1)4组大鼠创面平均愈合时间对比,空白对照组愈合时间最短;MEBO组、贝复济组、模型组3组大鼠创面平均愈合时间对比,MEBO组愈合时间最短。(2)用药后第6天,模型组大鼠创面肉芽组织中β-catenin mRNA的表达显著低于空白对照组、MEBO组、贝复济组(P<0.01),而MEBO组与贝复济组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠创面肉芽组织中Smad3 mRNA的表达显著高于空白对照组、MEBO组、贝复济组(P<0.01),而MEBO组与贝复济组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MEBT/MEBO可抑制Smad3 mRNA、增强β-catenin mRNA在实验性糖尿病足溃疡大鼠创面修复中的表达,缩短创面愈合时间,促进糖尿病足溃疡创面的愈合。

摘要：目的观察皮肤原位再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠糖尿病足创面TGF-β1、P-smad3表达的调控作用。方法100只SD大鼠随机分为糖尿病足造模组(80只)与空白对照组(20只),从糖尿病足造模组成功造模大鼠中取60只,随机分为模型组、贝复济组及MEBO组,各20只。于用药第5天、14天,各取相同部位创面组织,采用Western blotting技术检测TGF-β1、Smad3、P-smad3(磷酸化smad3)蛋白表达水平。结果四组大鼠Smad3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);MEBO组与贝复济组TGF-β1、P-smad3蛋白表达无差异(P>0.05),均低于空白对照组、高于模型组(P<0.05或P<0.01);与第5天相比,第14天时MEBO组与贝复济组TGF-β1、P-smad3表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠糖尿病足溃疡创面修复早期,MEBT/MEBO可能通过上调创面TGF-β1、P-smad3蛋白的表达,促进创面损伤修复;而在创面修复后期,MEBT/MEBO可能通过下调创面TGF-β1、P-smad3蛋白的表达,减少瘢痕愈合。

摘要：目的:建立糖尿病大鼠创面动物模型,以MMPs/TIMP系统为切入点,探讨皮肤再生医疗技术(湿润暴露疗法/湿润烧伤膏;Moist exposed burn therapy,MEBT/Moist exposed burn ointment,MEBO)促进糖尿病创面愈合的作用机制,为MEBT/MEBO干预糖尿病创面修复提供理论依据,进一步指导临床。方法:110只SPF级雄性SD大鼠,随机选取86只大鼠制备糖尿病模型,其余24只大鼠正常喂养。糖尿病模型采用高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备,高脂高糖饲料喂养4周后,禁食12 h,腹腔注射STZ(40mg/kg,1ml/kg),48h后再一次腹腔注射STZ(40mg/kg,1ml/kg)。糖尿病造模后随机血糖≥16.7 mmol/L,且体重明显下降则视为糖尿病大鼠模型诱导成功。糖尿病模型诱导成功后进行大鼠创面模型的制备,随机选取造模成功的糖尿病大鼠(72只)和正常大鼠(24只)制备创面模型,在大鼠背部印出18mm大小圆形标记,剪除其全层皮肤,深至筋膜,制备创面模型。创面制备结束后,将糖尿病大鼠创面模型分成模型组、MEBO组、贝复济组,每组各24只;正常大鼠创面模型为空白组,24只。各组大鼠每日换药,于干预治疗后第4d、6d和12d分别选取8只大鼠,观察创面情况,并计算创面愈合速率,麻醉后取相同位点的创面组织,用于开展病理检测和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Bolt检测。结果:(1)大鼠体重、血糖水平情况:糖尿病造模前,正常组和糖尿病模型组体重、血糖比较差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病造模后,糖尿病模型组平均血糖大于16.7 mmol/L,血糖水平显著高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01),且体重显著低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)创面愈合率:在第4d、6d和12d,空白组>MEBO组和贝复济组>模型组。第4d、6d和12d,空白组创面愈合率均高于模型组、MEBO组和贝复济组,差异均有统计学意义(P<0.01);MEBO组和贝复济组创面愈合率均高于模型组,差异均有具有统计学意义(P<0.01)。(3)创面病理显示:在第4d和第6d,模型组胶原纤维含量较少,炎性细胞浸润较多;空白组、MEBO组胶原纤维含量较多且炎性细胞浸润较少。第12d,空白组胶原纤维丰富致密、排列规整;...