摘要：目的:通过对S D大鼠默克尔细胞（merkel cell,MCs）的提取、分离、培养及鉴定,观察局部注射MCs联合美宝湿润烧伤膏（MEBO）外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法:1)取新生SD大鼠（1～3d）足垫、须垫及背部皮肤,采用酶消化法分离提取MCs,接种于多聚赖氨酸（PLL）包被的培养瓶内,通过细胞免疫组织化学法测定细胞角蛋白CK20的表达,qPCR检测MCs中Piezo2 mRNA的表达,ELISA法检测培养第2d、4d、6d、8d、10d细胞分泌CGRP情况。2)建立SD大鼠足底创面模型,按照干预方式的不同分为如下五组:A组（MCs注射+MEBO组）;B组（MCs局部注射组）;C组（MEBO外用组）;D组（阴性对照组）;E组（鼠神经生长因子注射阳性对照组）。细胞组用MCs 1×106个/mL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处,24小时后追加1次,每次每个部位25μL;MEBO组按相应分组给予MEBO外用,每日换药一次,直至创面愈合。阳性及空白对照组分别予等体积鼠神经生长因子及PBS注射。观察创面愈合时间,计算各组创面各时间点愈合率,棉拭子检测足底感觉恢复情况,分别于干预后7d、14d、21d三个时相各组分别随机抽取6只大鼠,切取组织,制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维生长情况。3)每组大鼠均于造模后第7d、14d、21d时用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录、统计缩足次数并计算百分比。结果:1)采用中性蛋白酶和胰酶依次消化SD大鼠足底及须垫部位所取皮肤组织可得到较多MCs,以CK20做细胞免疫化学染色可见MCs呈阳性反应。2)实验中应用中性蛋白酶及胰酶双酶消化法可得到MCs,以Ham,s F-12培养基为基础培养基,加入20ng/ml bFGF可使MCs稳定增殖;qPCR结果示MCs中Piezo2 mRNA的表达量为:0.0270±0.0042;酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测检测MCs上清液中降钙素基因相关肽（CGRP）在培养第2、4、6、8、10天浓度随培养时间的延长逐渐增加,培养第6d到8d时增加速率更快,间接提示默克尔细胞增殖情况。3)创面愈合方面,大体观察肿胀程度及炎性反应程度无明显区别,总愈合时间上应用MEBO的两组创面较其他实验组提前,A组E组愈合时间分别为14.33±0.69天、16.44±0.86天、14.83±0.71天、1...

摘要：目的探讨迪康凝胶对烫伤大鼠创面愈合的效果及作用机制。方法将SD大鼠随机分为模型组、美宝烫伤膏组、迪康凝胶组,3组均采用超级控温烫伤仪,造背部深Ⅱ度烫伤。模型组不给药,其余给药1次/d,连续21d。连续考察21d内创面愈合情况及创面病理组织形态。ELISA法检测组织TNF-α和IL-8及Ⅰ、Ⅲ型胶原。RT-PCR检测组织TNF-α和IL-8表达水平。结果与模型组比较,迪康凝胶组愈合时间缩短(P<0.05,P<0.01),创伤愈合率增高(P<0.05,P<0.01),差异有统计学意义。组织学观察证明,迪康凝胶具有良好的组织损伤修复作用。ELISA检测表明,烫伤后两药物组创面组织TNF-α和IL-8含量均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);而胶原Ⅰ、Ⅲ组织含量均高于模型组。RT-PCR检测表明,两药物组组织TNF-αmRNA和IL-8mRNA表达水平均与其蛋白浓度水平基本一致。结论迪康凝胶能促进大鼠皮肤烫伤后创面愈合,是治疗烫伤创面的有效药物。

摘要：目的 探究象皮生肌膏对大鼠肛瘘切除术后创面模型的治疗作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(Phosphoinosi-tide 3-kinase/proteinkinase B,PI3K/Akt)信号通路的相关性。方法 将36只SPF级健康成年雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组，每组各9只。除假手术组外均采用0号钢丝(Aciflex)制成人造肛瘘，随后进行肛瘘切除术，创面不缝合，保持开放，使之形成一个“急性、开放、渗血”的类似临床肛瘘术后创面，并予以相应药物肛周换药10 d,模型组予以灭菌注射用水换药。利用常规面积检测法比较模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组各组大鼠肛瘘术后创面的创面愈合率；苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining, HE)染色观察各组大鼠肛周组织病理情况；蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)比较各组大鼠肛周肉芽组织中白介素17(Interleukin 17,IL-17)、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(Proteinkinase B,Akt)、磷酸化PI3K(Phospho-PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(Phospho-AKT,p-AKT)蛋白表达水平；定量实时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction, Q-PCR)检测各组大鼠肛周肉芽组织中IL-17、PI3K、Akt mRNA的表达及象皮生肌膏的干预作用。结果 与假手术组比较，模型组大鼠创面组织中IL-17、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高，差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较，象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠创面组织中IL-17、p-PI3K、p-Akt的蛋白表达明显降低，差异有统计学意义(P<0.05),且象皮生肌膏组大鼠创面组织中IL-17、p-PI3K、p-Akt的蛋白表达低于湿润烧伤膏组，差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较，模型组大鼠创面组织中IL-17、PI3K、Akt的mRNA表达明显升高，差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较，象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠创面组织中IL-17、PI3K、Akt的mRNA表达明显降低，差异有统计学意义(P<0.05),且象皮生肌...

摘要：目的研究自体脂肪干细胞局部注射对糖尿病足创面愈合及细胞因子、Wnt/β-catenin通路的影响。方法前瞻性选择2016年2月至2017年12月期间湖南中医药大学第一附属医院收治的糖尿病足患者,随机分为接受自体脂肪干细胞局部注射联合湿润烧伤膏换药的观察组,接受湿润烧伤膏换药的对照组。观察治疗后2周、3周、4周时的创面愈合率以及治疗过程中的创面感染率、创面愈合时间,测定2周后创面中细胞因子的含量、Wnt/β-catenin通路分子的表达量。结果观察组患者治疗2周、3周、4周后的创面愈合率高于对照组,治疗过程中的感染率低于对照组、平均愈合时间短于对照组(P <0. 05);观察组患者治疗后创面中血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量以及Wnt1、β连环蛋白(β-catenin)的mRNA表达量均高于对照组,白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量以及糖原合成激酶-3β(GSK-3β)的mRNA表达量均低于对照组(P <0. 05)。结论自体脂肪干细胞局部注射能够促进糖尿病足创面的修复并调节细胞因子分泌、Wnt/β-catenin通路激活。