摘要：目的:许多miRNAs对皮肤有特定功能,miRNA广泛参与了机体皮肤发育,包括表皮细胞的增殖、分化、衰老及毛囊的发育,miRNA-203是第一个被发现在表皮及毛囊丰富表达的miRNA, miRNA-203在皮肤中的表达比在其他器官中高出100倍,被称为是"皮肤特异性的miRNA",它可通过直接抑制p63基因表达而促进表皮分化。研究表明,miRNA-203表达与皮肤分化和分层密切相关。临床实践中应MEBT/MEBO治疗慢性难愈合性创面,发现MEBO能显著缩短创面愈合时间,减少瘢痕愈合;进一步研究发现MEBO/MEBO能明显提高创面肉芽组织VEGF、bFGF、EGF基因及蛋白表达,最终加快创面愈合的进程,减少疤痕形成。尽管我们的研究初步揭示了MEBO防治慢性难愈合创面的部分机制,但是MEBO是通过何种途径调节以上基因及蛋白表达的呢?这个问题还有待进行更深入的研究。鉴于miRNA是一类小分子的非编码调控基因,而且人类中大部分的蛋白编码基因受miRNA调控,所以我们研究目的是证明MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。方法:参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型。健康成年SPF级Wistar雄性大鼠250只,12周龄,体重220g～250g,适应性喂养1周后,随机分为:空白组50只、对照组50只、慢性难愈合创面组150只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠按上述模型建立方法在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;慢性难愈合创面组大鼠按上述方法制备慢性难愈合创面模型,然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组50只,各组创面制备后立即用药治疗。模型制备完成后,各组于1d、3d、7d、11d、14d共5个时相点随机取10只大鼠,尾静脉注射适量的多功能纳米探针,然后利用小动物活体成像系统,进行miRNA-203的活体原位荧光成像与分析检测。活体原位荧光成像与分析检测完成后,对大鼠作病理切片,Western Blot检测HIF-1α、PTEN、VEGFR2、PI3K、MMP2、p-Akt蛋白表达。结果:MEBO可以通过PTEN/Akt/VEGF信号通路影响血管内皮细胞的生长,调控血管新生;通过PTEN/Akt/EGF信号通路影响表皮细胞的增殖和爬行,调控再上皮化的过程,进而促进细胞生长因子产生和修复创面。而MEBO可以促进miRNA-203的表达,而miRNA-203又可以调节PTEN表达水平的变化。结论:PTEN-Akt-VEGF/EGF通路可以接受miRNAs调节而发挥相应作用,而MEBT/MEBO可以通过对miRNA-203的调控来促进慢性难愈合创面恢复。所以miRNA-203在MEBO发挥防治慢性难愈合创面作用过程中起到重要的作用。

摘要：目的 探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗大鼠糖尿病性创面的作用及部分作用机制。方法 采用高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型，成模后将糖尿病大鼠随机分为模型组、MEBO组及重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用液(贝复济)组，与空白组同时制备创面模型后，分别予以相应药物干预治疗，MEBO组予以MEBO创面外敷，贝复济组予以贝复济创面外敷，空白组与模型组予以凡士林无菌纱布创面外敷。各组于干预治疗后第4、6、12天观察创面情况计算创面愈合率，分别取相同位点创面组织采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miRNA-21和转化生长因子(TGF)-β1 mRNA表达，应用Western印迹检测创面组织中TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3和Smad7蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组第4、6、12天创面愈合率、创面组织中miRNA-21、TGF-β1 mRNA及TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3蛋白表达显著降低，Smad7蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组比较，MEBO组干预第6、12天创面愈合率、创面组织中miRNA-21、TGF-β1 mRNA表达及TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3蛋白表达显著升高，Smad7蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论 MEBO可能通过miRNA-21调控TGF-β1/Smads信号通路促进成纤维细胞迁移、增殖，促进糖尿病性创面修复。