摘要：目的:本项目拟通过PI3K/AKT/HIF-1α信号通路探讨再生医疗技术促进慢性难愈合创面修复的部分分子机制,结合前期课题研究结果,进一步完善慢性难愈合创面的病理机制研究,为慢性难愈合创面的治疗提供思路及参考。同时也为完善再生医疗技术在慢性难愈合创面上的作用机制,为再生医疗技术在临床上的推广应用增强科学理论依据。方法:90只从广西医科大学购买的SPF级别大鼠,均为雄性大鼠。购买后饲养在右江民族医学院SPF级别动物科学实验中心,随机分为:空白组、急性组及慢性难愈合创面组,其中空白组的大鼠不做任何有损伤性处理,急性组行全层皮肤缺损处理,慢性难愈合创面组是首先进行全层皮肤缺损处理,再参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成的大鼠慢性难愈合创面。即在行全层皮肤切除后注射氢化可的松。慢性难愈合创面组再按造模后的处理方法不同随机分为慢创组(即模型组),贝复新组及美宝组,慢创组即造模后无药物干预治疗;贝复新组是造模后使用贝复新药物干预治疗;美宝组是造模后使用再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)干预治疗。各组创面制备后立即用药治疗。各组换药前均以1/5000呋喃西林液清洁创面,每日换药2次。动物模型制备完成后,每天使用SONY摄像机拍摄创面,以便创面愈合率分析;各组于造模后3d、7d、14d共3个时相点随机取6只大鼠腹腔麻醉后,切取整个创面肉芽组织。所取组织部分放入甲醛中固定,之后行HE染色及CD31免疫组化检查,余下样品迅速冻于-80℃冰箱,收集所有时相点的组织标本后统一进行Western blot检测。从宏观的创面愈合率及病理切片的炎症细胞浸润和血管新生,到微观的蛋白分子信号转导通路上研究慢性难愈合创面的病理机制及再生医疗技术在慢性难愈合创面的潜在机制。结果:(1)创面愈合率,除空白组外,各组愈合率均逐渐上升,在14d观察时相点,急性组创面的愈合率为:0.965±0.019,慢创组创面的愈合率为:0.468±0.013,贝复新组创面的愈合率为:0.975±0.007,美宝组创面的愈合率为:0.974±0.002。慢创组与急性组的P<0.001,慢创组与贝复新组的P<0.001,慢创组与美宝组的P<0.001,均有统计学差异。急性组与贝复新组的P=0.630,急性组与美宝组的P=0.709,贝复新...

摘要：目的:从p38MAPK信号通路探讨皮肤再生医疗技术（MEBT/MEBO）对大鼠慢性难愈合皮肤创面的修复机制。方法:（1）实验一:SPF级10～12周,体重在220g250g之间,SD雄性大鼠40只,一周适应性喂养,按照随机原则抽取10只大鼠作为空白组,空白组大鼠仅作皮肤全层切除,不再进行药物干预。剩余30只大鼠注射醋酸氢化可的松形成慢性难愈合创面模型,随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组10只。造模后第二天用药治疗。换药前各组均以1/5000呋喃西林溶液清洁创面,每天换药2次。在造模后第3天、第7天、第14天观察创面情况、测量并计算各组创面愈合率,观察计算创面愈合时间。（2）实验二:同实验一要求的大鼠80只,按照随机原则抽取20只大鼠作为空白组,同实验一的造模方法,剩余60只大鼠随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组20只。造模后第二天用药治疗。换药方法及次数同实验一。在造模后第3天、第7天、第14天各组随机处死5只,取皮肤创面组织,一部分用10%福尔马林固定以作病理切片,剩余部分立即放于液氮罐中,稍后迅速转入-80℃超低温冰箱。待标本收集完毕做后续的Western blotting、RT-PCR、ELISA方法检测。结果:（1）创面大体情况:空白组创面恢复最好,MEBO组、贝复济组情况显著优于模型组。（2）创面愈合时间:空白组愈合时间最短（13.40±0.74d）,与模型组相比有显著差异（P<0.01）,模型组所需时间最长（22.19±2.09d）,与各组相比有显著差异（F=141.900,P<0.01）,MEBO组愈合时间与贝复济组无显著差异（P>0.05）。（3）创面愈合率:在第3d,7d,14d,空白组愈合率与模型组相比有显著差异（P<0.05）;在第7d、第14d,MEBO组、贝复济组与模型组愈合率比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;MEBO组与贝复济组比较,在第3d、14d,差异无统计学意义（P>0.05）,但在第7d相比,有显著差异（P<0.05）。（4）Western blotting:（1）在整个创面愈合过程中,实验二各组大鼠创面肉芽组织中p38、MK2的含量呈逐渐递减趋势（P<0.01）,造模后第3天、第7天、第14天各时相点各组大鼠创面肉芽p38、MK2表达均无差异（P>0.05）;（2）在创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组创面组织中p-p38、p-...

摘要：目的：探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏（moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO）对糖尿病创面中TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路表达的影响。方法：将48只Wistar雄性大鼠随机平均分为对照组、模型组、美宝组和贝复新组。其中对照组构建急性创面模型，其余组构建糖尿病创面模型。随后美宝组和贝复新组分别采用湿润烧伤膏和重组牛碱性成纤维生长因子进行换药，对照组及模型组采取生理盐水进行换药。通过H&E染色、免疫荧光法及实时荧光定量PCR检测观察各组创面第3、7、14天愈合情况及TXNIP、NLRP3及Caspase-1表达情况。结果：（1）治疗第3天，对照组创面愈合率高于模型组，且具有统计学差异性（P<0.05）；治疗第7、14天，对照组、美宝组和贝复新组创面愈合率高于模型组（P<0.05）。（2）治疗第3、7、14天，对照组、美宝组和贝复新组的TXNIP、NLRP3表达量低于模型组（P<0.05）：治疗第3、7、14天，对照组和美宝组的Caspase-1表达量低于模型组（P<0.05）。结论：MEBT/MEBO可通过抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路表达，减轻糖尿病创面的炎症反应，从而促进糖尿病创面的愈合。

摘要：目的:探究湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposure therapy/Moist burn ointment,MEBT/MEBO)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物(mammalian target of rapamycincomplex,m TORC)信号通路基质金属蛋白酶(MMP3、MMP8)促进体表慢性难愈合创面的修复机制。方法:(1)取60只SPF级Wistar大鼠作为实验对象,将这些大鼠分为五组,即空白组、对照组、模型组、贝复新组以及MEBO组,每组12只。模型组、贝复新组、MEBO组、对照组于背部做一圆形创面,然后模型组、贝复新组、MEBO组立即肌肉注射醋酸氢化可的松注射液,使其形成慢性难愈合创面,而对照组不注射醋酸氢化可的松注射液使其形成急性创面。模型组不涂抹任何药物,贝复新组涂抹贝复新凝胶,MEBO组涂抹湿润烧伤膏,对照组氯化钠溶液纱条覆盖,空白组只备皮不做创伤性处理。(2)分别在造模后的第3、7、14天记录各组大鼠创面愈合率,并进行HE及Masson染色观察创面组织愈合的病理情况。(3)采用Western Blot法分别对MMP3、MMP8、磷酸化m TORC(p-m TORC)进行检测,分析在各组大鼠创面组织中MMPs以及p-m TORC蛋白表达水平。(4)使用实时PCR法检测各组大鼠创面组织中MMP3、MMP8、m TORC m RNA基因转录情况。结果:(1)创面愈合率:四组大鼠造模后第7、14天的创面愈合率显著高于第3天,差异均有统计学意义(均P<0.05)。造模后第3天,对照组、模型组、贝复新组、MEBO组创面愈合率比较,差异无统计学意义(F=2.474,P=0.074);造模后第7、14天,对照组、贝复新组、MEBO组的创面愈合率均优于模型组,差异均存在统计学意义(均P<0.05)。(2)创面组织病理学:HE及Masson染色结果发现,在造模后的第3天,除空白组外,四组的炎症细胞大量生成,新生毛细血管生成较少,成纤维细胞排列紊乱,未生成皮肤附属器。造模后的第7天,对照组、MEBO组及贝复新组中的炎症细胞较之前显著降低,毛细血管生成明显,成纤维细胞排列规则;模型组中可观察到少数新生毛细血管及排列不规则的成纤维细胞,仍有炎症细胞浸润,未生成皮肤附属器。造模后的第14天,对照组、MEBO组与贝复新组新生毛细血管排列有序,未见浸润的炎症细胞,有皮肤附属器生成,胶原纤维明显增加且排列...