摘要：目的:本项目拟通过PI3K/AKT/HIF-1α信号通路探讨再生医疗技术促进慢性难愈合创面修复的部分分子机制,结合前期课题研究结果,进一步完善慢性难愈合创面的病理机制研究,为慢性难愈合创面的治疗提供思路及参考。同时也为完善再生医疗技术在慢性难愈合创面上的作用机制,为再生医疗技术在临床上的推广应用增强科学理论依据。方法:90只从广西医科大学购买的SPF级别大鼠,均为雄性大鼠。购买后饲养在右江民族医学院SPF级别动物科学实验中心,随机分为:空白组、急性组及慢性难愈合创面组,其中空白组的大鼠不做任何有损伤性处理,急性组行全层皮肤缺损处理,慢性难愈合创面组是首先进行全层皮肤缺损处理,再参照付小兵等全层皮肤缺损法和沈氏改良塑料环肉芽肿定量法经改进制成的大鼠慢性难愈合创面。即在行全层皮肤切除后注射氢化可的松。慢性难愈合创面组再按造模后的处理方法不同随机分为慢创组(即模型组),贝复新组及美宝组,慢创组即造模后无药物干预治疗;贝复新组是造模后使用贝复新药物干预治疗;美宝组是造模后使用再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)干预治疗。各组创面制备后立即用药治疗。各组换药前均以1/5000呋喃西林液清洁创面,每日换药2次。动物模型制备完成后,每天使用SONY摄像机拍摄创面,以便创面愈合率分析;各组于造模后3d、7d、14d共3个时相点随机取6只大鼠腹腔麻醉后,切取整个创面肉芽组织。所取组织部分放入甲醛中固定,之后行HE染色及CD31免疫组化检查,余下样品迅速冻于-80℃冰箱,收集所有时相点的组织标本后统一进行Western blot检测。从宏观的创面愈合率及病理切片的炎症细胞浸润和血管新生,到微观的蛋白分子信号转导通路上研究慢性难愈合创面的病理机制及再生医疗技术在慢性难愈合创面的潜在机制。结果:(1)创面愈合率,除空白组外,各组愈合率均逐渐上升,在14d观察时相点,急性组创面的愈合率为:0.965±0.019,慢创组创面的愈合率为:0.468±0.013,贝复新组创面的愈合率为:0.975±0.007,美宝组创面的愈合率为:0.974±0.002。慢创组与急性组的P<0.001,慢创组与贝复新组的P<0.001,慢创组与美宝组的P<0.001,均有统计学差异。急性组与贝复新组的P=0.630,急性组与美宝组的P=0.709,贝复新...
摘要：目的:从p38MAPK信号通路探讨皮肤再生医疗技术（MEBT/MEBO）对大鼠慢性难愈合皮肤创面的修复机制。方法:（1）实验一:SPF级10～12周,体重在220g250g之间,SD雄性大鼠40只,一周适应性喂养,按照随机原则抽取10只大鼠作为空白组,空白组大鼠仅作皮肤全层切除,不再进行药物干预。剩余30只大鼠注射醋酸氢化可的松形成慢性难愈合创面模型,随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组10只。造模后第二天用药治疗。换药前各组均以1/5000呋喃西林溶液清洁创面,每天换药2次。在造模后第3天、第7天、第14天观察创面情况、测量并计算各组创面愈合率,观察计算创面愈合时间。（2）实验二:同实验一要求的大鼠80只,按照随机原则抽取20只大鼠作为空白组,同实验一的造模方法,剩余60只大鼠随机分为模型组、MEBO组和贝复济组,每组20只。造模后第二天用药治疗。换药方法及次数同实验一。在造模后第3天、第7天、第14天各组随机处死5只,取皮肤创面组织,一部分用10%福尔马林固定以作病理切片,剩余部分立即放于液氮罐中,稍后迅速转入-80℃超低温冰箱。待标本收集完毕做后续的Western blotting、RT-PCR、ELISA方法检测。结果:（1）创面大体情况:空白组创面恢复最好,MEBO组、贝复济组情况显著优于模型组。（2）创面愈合时间:空白组愈合时间最短（13.40±0.74d）,与模型组相比有显著差异（P<0.01）,模型组所需时间最长（22.19±2.09d）,与各组相比有显著差异（F=141.900,P<0.01）,MEBO组愈合时间与贝复济组无显著差异（P>0.05）。（3）创面愈合率:在第3d,7d,14d,空白组愈合率与模型组相比有显著差异（P<0.05）;在第7d、第14d,MEBO组、贝复济组与模型组愈合率比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;MEBO组与贝复济组比较,在第3d、14d,差异无统计学意义（P>0.05）,但在第7d相比,有显著差异（P<0.05）。（4）Western blotting:（1）在整个创面愈合过程中,实验二各组大鼠创面肉芽组织中p38、MK2的含量呈逐渐递减趋势（P<0.01）,造模后第3天、第7天、第14天各时相点各组大鼠创面肉芽p38、MK2表达均无差异（P>0.05）;（2）在创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组创面组织中p-p38、p-...
摘要：目的 观察基质金属蛋白酶13(MMP-13)和组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)在慢性难愈合创面中的作用,探讨皮肤再生医疗技术(MEBT)结合五味消毒饮的部分作用机制.方法 将90只雄性大鼠随机分为:湿润烧伤膏(美宝)(MEBO)+中药组、rb-FGF组、慢创组、急创组和空白组,每组各18只,建立创面模型,并于造模第3、7、14天采集标本组织,通过ELISA法检测标本组织匀浆中TNF-a和IL-6,以及Western-blot方法检测标本组织中MMP-13和TIMP-1的表达情况.结果 (1)MEBO+中药组创面愈合时间短于慢创组(P＜0.05),且愈合率高于慢创组(P＜0.05).(2)MEBO+中药组在造模第3天和第7天TNF-a表达高于慢...