摘要：目的:通过动态观察大鼠慢性难愈合皮肤创面肉芽组织中p38、MK2磷酸化蛋白及基因表达变化,从p38信号通路角度探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合皮肤创面的可能修复机制。方法:SD大鼠80只,随机分为4个组,每组20只,依据文献造模,造模后第3天,7天,14天各组随机处死5只大鼠,取相同部位皮肤溃疡创面肉芽组织,采用Western blotting和Real-Time PCR技术检测p38、MK2磷酸化蛋白及其mRNA水平表达差异。结果:Western blotting与RT-PCR检测结果趋势相同,在整个实验过程中,各组pp38、p-MK2、p38 m RNA、MK2 mRNA表达量随时间均呈下降趋势;创伤早期,模型组、MEBO组、贝复济组各组差异无统计学意义(P>0.05);造模后第7天,MEBO组表达量高于贝复济组,差异有统计学意义(P<0.05);造模后第14天,MEBO组、贝复济组组间比较无统计学差异(P>0.05),但与模型组相比均有显著差异(P<0.01),模型组仍处于高表达。结论:MEBT/MEBO通过下调p-p38、p-MK2蛋白表达水平,阻断部分信号转导,抑制被过度激活的p38MAPK信号通路,这可能是MEBT/MEBO对慢性难愈合创面的修复机制之一。

摘要：目的动态观察大鼠难愈性创面组织ERK1/2、ATF2蛋白表达变化,从磷酸化ERK1/2对激活ATF2的交互作用(crosstalk)角度,阐明皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进慢性难愈合创面修复的分子机制。方法 96只SD大鼠随机分为MEBO组、贝复济(rb-bFGF)组、模型组、空白对照组4组,各24只,创建体表皮肤溃疡模型,观察创面愈合情况,并于造模后第3d、7d、14d各取相同部位创面组织,采用Western Blotting技术检测磷酸化ERK1/2、ATF2蛋白表达水平。结果 MEBO组可见淡红色新生上皮由四周向创面中心生长,创面恢复良好。MEBO组和贝复济组创面愈合时间差异无统计学意义(P>0.05),均小于模型组(P<0.01);经14d治疗后,磷酸化ERK1/2及ATF2含量增高,同组内不同时间点ERK1/2、ATF2的表达差异有统计学意义(P<0.01),同时间点内不同组间的磷酸化ERK1/2、ATF2的表达差异有统计学意义(P<0.01),组间比较MEBO组和贝复济组磷酸化ERK1/2、ATF2的表达差异无统计学意义(P>0.05),但与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MEBT/MEBO能加快大鼠慢性难愈合创面的愈合速度,提高修复质量;MEBT/MEBO可能通过激活ERK1/2信号通路,调控磷酸化ERK1/2、ATF2表达水平,使ERK1/2激活p38信号通路的下游底物ATF2产生交互作用,共同促进慢性难愈合创面的修复。

摘要：目的:探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)作用IGF-1/PI3K/Akt信号通路调控创面血管生成促进体表慢性难愈合创面修复的机制。方法:145只雄性SD大鼠随机分为空白组(21只),对照组(31只),以及慢性难愈合创面组(93只);慢性难愈合创面组造模成功后再随机分为模型组、贝复新组和MEBT/MEBO组,每组各31只。计算创面的愈合时间及愈合率;取干预治疗后第3、7、14天的创面组织,ELISA法检测胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量,Western Blot技术测定磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的蛋白表达量;碱性水浸泡法扫描电子显微镜技术(SEM)观察创面组织全层皮肤愈合过程。结果:与模型组比较,MEBT/MEBO组显著缩短大鼠创面愈合时间和提高创面愈合率(P<0.01)。造模及干预治疗14d后,SEM结果显示MEBT/MEBO组大鼠全层皮肤创面愈合过程较模型组理想。与模型组比较,第7天时MEBT/MEBO组大鼠创面组织IGF-1水平及PI3K、p-Akt、p-eNOS、VEGFR2蛋白表达含量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:MEBT/MEBO能较显著促进慢性难愈合性创面的修复,较好改善其全层皮肤创面愈合过程,其作用机制可能是通过激活IGF-1/PI3K/Akt信号通路,促进创面新生血管生成,从而加快创面的愈合速度。

摘要：目的 探讨生肌创愈膏通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对大鼠炎症性创面的修复作用及其潜在机制。方法 将实验大鼠随机分为4组：空白对照组(Control)、模型组(Model)、湿润烧伤膏组(MEBO)和生肌创愈膏组(SJCYO)。构建炎症性创面模型后，分别采用生理盐水纱布、湿润烧伤膏纱条和生肌创愈膏纱条敷于创面，连续换药治疗7 d。通过HE染色观察创面病理变化，ELISA检测TNF-α和IL-6含量，RT-PCR法测定p38MAPK mRNA和MAPK活化蛋白激酶-2(MK2) mRNA表达水平，Western blot检测p38MAPK和MK2蛋白磷酸化水平。结果 与对照组相比，模型组在病理形态学上显示出明显的炎性细胞浸润和出血、水肿，TNF-α和IL-6含量显著升高，p38MAPK mRNA和MK2 mRNA表达量上升，p38MAPK和MK2蛋白磷酸化水平升高。相比模型组，生肌创愈膏组炎性细胞浸润减少，新生表皮生长，创面愈合加快；TNF-α和IL-6含量显著降低，p38MAPK mRNA和MK2 mRNA表达量降低，p38MAPK和MK2蛋白磷酸化水平下降，且较湿润烧伤膏组有更显著的改善。结论 生肌创愈膏通过降低炎症因子TNF-α和IL-6水平，抑制p38MAPK和MK2的mRNA及蛋白表达，有效促进创面愈合。