摘要：目的 探讨糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化的病理变化及湿润暴露疗法/湿润烧伤膏（MEBT/MEBO）对其干预的机制。方法 80只Wistar雄性大鼠，随机取18只作为急性创面组，其余大鼠建立糖尿病创面模型。将糖尿病创面造模成功的54只大鼠随机分为糖尿病创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组，每组18只。各组大鼠换药前均以呋喃西林液清洁创面，急性创面组和糖尿病创面组均外敷2层生理盐水纱布，MEBT/MEBO组外敷2层MEBO纱条（0.2 g/cm2）,贝复新组外敷2层贝复新浸透纱布（60 IU/cm2）,均每日换药2次。分别于造模后第3,7,14天，统计各组创面愈合率，HE染色和Masson染色观察创面病理变化，免疫荧光观察创面组织中层黏连蛋白3（LAMA3）蛋白表达情况，RT-PCR法检测创面组织中LAMA3、整合素α3（ITGA3）、E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）mRNA表达量。结果 造模后第7,14天，糖尿病创面组创面愈合率均明显低于其他组（P均<0.05）,MEBT/MEBO组和贝复新组比较差异无统计学意义（P均>0.05）。HE染色和Masson染色显示：造模后第3天，各组创面均处于炎症浸润状态；造模后第7天，糖尿病创面组创面处于炎症浸润状态，胶原纤维稀疏，边缘表皮增厚且无明显迁移，其他组炎症浸润均减轻，表皮增厚并明显迁移；造模后第14天，糖尿病创面组创面仍有炎症浸润，表皮再上皮化不全，其他组创面表皮覆盖且再上皮化明显。造模后第3,7,14天，糖尿病创面组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3 mRNA表达量均明显低于其他组（P均<0.05）,ZEB1 mRNA表达量均明显高于其他组（P均<0.05）,MEBT/MEBO组创面组织中LAMA3蛋白阳性表达光密度值和LAMA3、ITGA3、ZEB1mRNA表达量与贝复新组比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 糖尿病大鼠难愈合创面再上皮化延迟，而MEBT/MEBO能促进创面再上皮化修复，其机制可能与上调再上皮化区LAMA3、ITGA3表达和下调ZEB1表达有关。

摘要：目的:探讨糖尿病难愈合创面再上皮化的ZEB1、LAMA3、ITGA3表达机制及皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)是否对此机制存在影响。方法:将12周龄雄性Wistar大鼠随机分为急性创面组(血糖正常)、糖尿病创面组。制备1型糖尿病大鼠后将之分为:MEBT/MEBO组、贝复新组、无药物干预的模型组。在各组大鼠背部制备2个直径为30mm全层皮肤缺损创面,分别使用不同干预措施处理创面。通过统计各组大鼠3、7、14天创面愈合面积,初步观察各组创面愈合效果;HE染色和Masson染色镜下观察创面愈合过程中的肉芽组织新生情况、胶原纤维形成状态和角质形成细胞再上皮化效果;通过免疫荧光化学观察各组不同时间段(第3、7、14天)的创面中ZEB1、LAMA3蛋白的分布与表达情况;Real-Time PCR检测创面中ZEB1、LAMA3、ITGA3的基因表达水平。结果:(1)创面愈合率:实验第3天,模型组与其余三组比较尚无差异(P>0.05);实验第7、14天糖尿病模型组大鼠出现伤口延迟愈合,与急性创面组比较有明显差异(P<0.001),而糖尿病大鼠创面经MEBT/MEBO、贝复新干预治疗后,其愈合率优于模型组(P<0.05或P<0.001),而MEBT/MEBO组与贝复新组的愈合率无差异(P>0.05)。(2)病理染色、表皮迁移观察:实验干预第3天各组创面均呈现炎症浸润状态,皮肤结构层次缺损,创面边缘表皮的迁移情况无明显差异(P>0.05);第7天急性创面组有大量肉芽组织、胶原纤维、小血管新生,轻微炎症,创面边缘的表皮角质形成细胞增生并向创面中心迁移,而模型组少量肉芽组织和血管,大量坏死细胞碎片,炎症浸润,其再上皮化迁移较急性创面组缓慢(P<0.001),MEBT/MEBO组与贝复新组炎症浸润、细胞坏死较轻,存在肉芽组织、胶原纤维和血管新生,再上皮化迁移均优于模型组(P<0.05或P<0.01);第14天急性创面组大部分创面的已被迁移的表皮覆盖,肉芽组织丰厚、胶原纤维分布有序,并存在新生的皮脂腺、毛囊、血管、神经纤维束等,贝复新组、MEBT/MEBO组接近完成再上皮化,肉芽组织丰富,胶原纤维整齐均匀,皮肤附件生成,而模型组仍存在少量炎症浸润,未完成再上皮化覆盖,其再上皮化均明显慢于其他组(P<0.01或P<0.05)。(3)免疫荧光:ZEB1蛋白在真皮细胞核中表达,与急性创面组比较,第3天的模型组ZEB1蛋白表达较高(P<0.0...

摘要：目的:通过对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,Ca N)以及白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)的表达水平进行研究,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面中活化T细胞核因子-钙调神经磷酸酶信号通路表达的影响,以期为MEBT/MEBO在糖尿病创面治疗的相关基础研究与临床应用上提供更多有价值的参考数据。方法:(1)分笼饲养SPF级Wistar雄性大鼠48只,适应性喂养一周后根据随机数字表法将大鼠随机分为4组,依次为对照组、模型组、美宝组(MEBT/MEBO治疗组)、贝复新组,每组12只大鼠。各组大鼠均禁食不禁水12小时,将其中模型组、美宝组和贝复新组造糖尿病大鼠模型,腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液稀释的等剂量链脲佐菌素溶液,而对照组仅注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;注射3天后从大鼠尾端采血检测其空腹血糖,以空腹血糖大于16.7mmol/L为标准制成糖尿病大鼠模型,随后将四组大鼠按全层皮肤缺损法制备创面,建成糖尿病大鼠创面模型(模型组、美宝组、贝复新组)和大鼠急性创面模型(对照组)。(2)各组模型建立完成后先用呋喃西林液清洁创面,将对照组大鼠和模型组大鼠创面外敷两层生理盐水纱布,美宝组大鼠创面外敷两层美宝纱布,贝复新组大鼠创面外敷两层贝复新纱布,随后所有组别大鼠均加盖两层消毒干纱布并以胶布固定,每日进行更换鼠笼及垫料1次、换药操作2次以保持环境与创面清洁。(3)于第3、7、14天共3个时相点各组分别随机取4只大鼠断颈处死并取材,用直尺测量创面直径并作为参照物拍照记录所有大鼠的创面愈合情况,收集所有时相点的照片后用Image J软件测算所有大鼠不同时相的创面大小,以时相为分组进行创面愈合率计算。取距离创缘0.5cm的整个创面及周围组织,取出的组织用组织剪将其剪为两半,其中一半组织用称量纸包裹并置于盛有4%多聚甲醛离心管中,24小时后转移至70%无水乙醇中,再制成组织石蜡蜡块以备后续HE染色实验和免疫荧光实验使用。另一半剪为合适大小的组织块放入冻存管中,随即迅速放置入装有液氮的容器内并转移至-80℃冰箱冻存。(4)HE染色观察创面肉芽组织生长形态及病...

摘要：目的:本研究以糖尿病大鼠创面模型、临床糖尿病足创面为研究对象,观察皮肤再生医疗技术(Moist exposed burn therapy/Moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病创面愈合情况的影响,并通过创面组织中BMP-2、BMP-7、BMPR-IA的检测,探讨其对糖尿病创面愈合作用的机理,为临床推广应用MEBO治疗糖尿病创面提供可靠的理论依据。方法:(1)糖尿病大鼠创面模型:按照随机数表法将125只Wistar雄性大鼠分为空白组(n=25)、对照组(n=25)、模型组(n=25)重组牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)组(n=25)以及湿润烧伤膏(MEBO)组(n=25)。空白组大鼠备皮,不建立创面模型;对照组大鼠构建常规创面模型;模型组、贝复济组及MEBO组构建糖尿病模型。生理盐水外敷对照组及模型组创面,MEBO组和贝复济组创面分别予MEBO、贝复济外敷。各组于治疗后的第1、5、11、18、25天观察:(1)观察不同时点大鼠溃疡创面愈合情况,比较愈合率;(2)创面组织病理HE染色观察各组纤维细胞、创面组织炎症、肉芽生长、上皮化等情况。(3)免疫组化法观察溃疡创面BMP-2、BMP-7动态变化的影响。(4)Western Blot法测定BMP-2、BMP-7、BMPR-IA及BMPR-IA磷酸化蛋白表达。(5)q RT-PCR法测定BMP-2、BMP-7、BMPR-IA的表达。(2)临床糖尿病足创面:收集30例2型糖尿病足(T2DMF)患者治疗前和MEBO治疗两周的创面组织。资料收集主要包括以下两个部分:(1)跟踪测量、拍照记录每位患者创面愈合情况;(2)提取创面组织用福尔马林固定液收集并制成蜡块。蜡块切片行HE染色观察病理形态;免疫组化观察BMP-2、BMP-7的表达;免疫荧光定量测量治疗前后BMP-2、BMP-7的OD值。结果:(1)糖尿病大鼠创面模型:(1)创面愈合情况及愈合率:第5天四组的创面愈合率无明显差别。第11天模型组创面平均愈合率低于对照组、贝复济组、MEBO组;MEBO组与贝复济组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第18天模型组创面平均愈合率仍低于对照组、贝复济组、MEBO组。第25天模型组尚可看到个别大鼠创面未完全愈合,模型组创面平均愈合率低于对照组、贝复济组、MEBO组(P<0.05)。(2)治疗第5天,与对照组比较,模型组可见大量炎症细胞...